Метод реплик отпечатков

Все методы исследования с помощью просвечивающего электронного микроскопа разделяют на прямые и косвенные. При прямых методах в микроскопе исследуют непосредственно объект в виде очень тонкой пленки (среза) или мельчайших частиц (определение формы и размера частиц высокодисперсных систем, изучение структуры биологических объектов, полимеров, металлов и т. п.). При косвенных методах в микроскопе рассматривают не сам объект, а отпечаток этого объекта. Отпечаток иначе называют слепком или репликой. Метод реплик применяют для исследования рельефа различных поверхностей, а также таких объектов, как кристаллы льда или гели, которые невозможно исследовать непосредственно в микроскопе. Существенным недостатком электронной микроскопии является невозможность наблюдения образца в динамических условиях, т. е. в движении, так как препарат должен быть высушен или заменен репликой. [c.395]

Из-за ограниченной проникающей способности электронов толщина объектов исследования не должна превышать 0,1 мкм. Это создает определенные трудности при приготовлении образцов в виде тонких пленок или ультратонких срезов. Вот почему нередко пользуются косвенным методом исследования — методом реплик. В этом случае с исследуемой поверхности образца (как правило, со свежего скола) получают тонкий отпечаток, достаточно точно воспроизводящий ее рельеф — реплику. Реплику обычно получают методом напыления. Для этого на свежий скол исследуемого объекта наносят при испарении в вакууме углерод, создающий удерживающий слой в виде тонкой сплошной пленки на изучаемой поверхности. Затем для повышения контрастности углеродную реплику [c.156]

Косвенные методы широко распространены в электронной микроскопии при этом исследуется не сам объект, а копия (слепок) с его рельефа — отпечаток, реплика. [c.133]

Косвенными методами исследования являются методы, при которых в электронном микроскопе рассматривается не сам объект, а отпечаток, полученный с этого объекта. В литературе отпечаток часто называют репликой или слепком, а метод исследования с использованием реплики — методом реплик. Косвенные методы применяют, главным образом, для исследования рельефа различных поверхностей, а также тех объектов, которые невозможно исследовать непосредственно в электронном микроскопе (например, кристаллов льда или поверхностей гелей). [c.174]

Результаты, показанные на рис. 6.18 и 6.19, подтверждают данные, полученные методом реплик, т. е. вывод о том, что частицы сажи, слабо связанные с каучуком, извлекаются из среды каучука, оставляя отпечаток на поверхности разрыва, в то время как прочно связанные с каучуком частицы образуют относительно гладкую поверхность при разрыве. [c.185]

Хотя опыты с пересевом значительно проще, чем флуктуационный тест, но и в этом случае полученные результаты нуждаются в статистической обработке. В 1952 г. Джошуа и Эстер Ледерберги смогли наконец показать спонтанную природу бактериальных мутаций с помощью метода, не требующего никакой статистической обработки. Ледерберги провели очень простой, но очень удобный по технологии эксперимент. Они установили, что можно делать отпечаток бактериальных колоний, выросших на чашке с агаром (фиг. 64). Для этого на поверхность агара исходной первичной чашки, содержащей колонии бактерий, накладывают кусок бархата, натянутый на круглую деревянную болванку диаметром, равным диаметру чашки Петри. Затем этим бархатом касаются чистой поверхности агара новой чашки Петри. После инкубации этой второй чашки получается реплика, отпечаток исходной чашки в каждой точке, где была колония на исходной чашке, вырастает колония и на чашке-реплике. [c.143]

Новая информация о строении мембраны была получена с помощью метода замораживание-скол-травление . По этому методу клетку охлаждают до очень низкой температуры в жидком азоте. Охлаждение проводится с очень большой скоростью (около 1000 градусов в секунду). При этом вода, содержащаяся в препарате, переходит в твердое аморфное состояние. Затем клетки раскалываются специальным ножом и помещаются в вакуум. Замерзшая вода быстро возгоняется, освобождая поверхность скола (этот процесс и называют травлением). После травления получают реплику (отпечаток со сколотой поверхности) и фотографируют в электронном микроскопе. Замороженные мембраны могут при раскалывании расщепляться в разных направлениях, в том числе и вдоль границы двух липидных монослоев, и поэтому можно видеть их внутреннее строение. [c.13]

В связи с этим при исследовании полимеров с помощью электронной микроскопии наибольшее распространение получил метод, при котором В микроскопе рассматривается не сам образец, а его реплика, т.е. отпечаток поверхности исследуемого образца. При исследовании металлов вначале готовится шлиф из образца. Для того чтобы выявить структуру, шлиф подвергается травлению. Так же иногда готовят к исследованию полимерные образцы. Травление обычно осуществляется в парах органических растворителей, которые более активно воздействуют на неупорядоченные аморфные области. Полученный образец полимера с выявленной в результате травления структурой помещают в вакуум и напыляют на шлиф [c.52]

Напыление углеродной реплики на первичный отпечаток. Первичный отпечаток, представляющий собой толстый слепок, с которого нужно получить окончательную углеродную реплику, помещают в вакуумную напылительную установку. Углеродную пленку наносят на контактную поверхность отпечатка. Напыление углерода проводят таким же методом и в тех же условиях, что и при изготовлении первичных углеродных отпечатков (см. работу 29). [c.204]

Рассмотрим, согласно Бредли [79], основы методики получения реплик. Имеется два основных способа получения как углеродных, так и большинства других реплик (рие. 31). Если тонкую углеродную пленку удается отделить от объекта, что обычно достигается путем растворения последнего, то применяют более простой и точный одноступенчатый метод. Объект в виде отдельного куска или частиц, нанесенных на стеклянную пластинку (рис. 31, I, а) покрывают слоем углерода (рис. 31,7,6), затем растворяют объект и промывают отделившуюся углеродную реплику (рис. 31,/, б). Если объект нельзя растворить или желательно его сохранить, то применяют двухступенчатый метод. Образец, например металл, покрывают толстым слоем пластического вещества (рис. 31, Л, б), который затем механически отделяют от образца. На промежуточный отпечаток наносят слой углерода (рис. 31, II, в), растворяют отпечаток и получают реплику. [c.97]

Тотальную ДНК из клеток человека гидролизуют эндонуклеазой примерно на 500000 фрагментов длиной от 10 до 10 нуклеотидных пар. Затем фрагменты разделяют по молекулярной массе с помощью гель-электрофореза в агарозе, после чего ДНК денатурируют щелочью прямо в геле, чтобы получить одноцепочечные фрагменты. Их переносят на нитроцеллюлозный фильтр и фиксируют высушиванием при 80°С. В результате получается отпечаток (реплика) картины разделения фрагментов ДНК по их размеру. Эти фрагменты можно идентифицировать методом гибридизации с радиоактивными ДНК-зондами, специфичными для определенных генов или хромосом. Любой фрагмент, содержащий всю последовательность зондируемого гена или его часть, будет выглядеть на радиоавтографе в виде темной полосы (рис. 4.60). [c.126]

Разновидность метода электронной микроскопии — замораживание—скалывание . Его применяют для изучения характера связывания белков с мембранами. Для этого образец, не требующий химической фиксации, замораживают в жидком азоте, а затем раскалывают в плоскости наименьшего сопротивления холодным ножом в вакууме. Плоскость наименьшего сопротивления проходит между двумя слоями липидной фазы мембраны. Далее поверхность образца покрывается платиной и углеродом, его растворяют и отпечаток (реплику) рассматривают в элект- [c.207]

В случаях прямых методов в микроскопе исследуется сам объект в виде тонкой пленки или мельчайших частиц. В случае косвенных методов рассматривается не сам объект, а полученный с него отпечаток — реплика. [c.226]

При косвенном методе исследования в электронном микроскопе изучается не сам образец, а копия с его рельефа - реплика, отпечаток. Методы отпечатков, которых в настош ее время насчитывается около ста различаются меаду собой как по технике изготовления отпечатков, так и по применяемым для их получения материалам. Косвенные методы вносят дополнительные затруднения в интерпретацию полученных изображений. [c.106]

Часто наблюдаются такие случаи, когда объект имеет детали, размер которых превышает разрешаемое мп] роскопом расстояние, однако вследствие низкой контрастности изображения эти детали не различимы. Поэтому, чтобы полностью использовать разрешающую способность электронного микроскопа и получить высококачественные электронно-микроскопические изображения, пользуются специальными приемами, иозвол.яющими уси.иить контрастность объекта. Наиболее эффективным и широко распространенным методом увеличения контрастности реплик является метод оттенения, который заключается в том, что на исследуемый объект или на его отпечаток в вакууме нанглляется слой тяжелого металла под некоторым углом к поверхности. Благодаря наклонному направлению пучка частиц металла оттеняющий слой на объекте напыляется неравномерно. В тех местах, где поверхность объекта находится под прямым углом к направлению [c.187]

В литературе на английском языке применяется термин repli a , на немецком Abdru k (отпечаток). Однако Кёниг [11 справедливо отмечает, что первое лучше характеризует метод согласно первоначальному смыслу, реплика — копия художественного произведения, сделанная автором. В отечественной литературе, к сожалению, нет установившегося [c.90]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология