Ультратонкие срезы

Рис. 29. Электронные микрофотографии рибосом на ультратонких срезах а — участок цитоплазмы клетки печени крысы (предоставлена проф. Ю. С, Ченцовым, МГУ им. М, В. Ломоносова). Видны рибосомы на мембранах шероховатого эндоплазматического ретикулума, а также группы свободных рибосом. Фиксация глютаральдегидом б — клетки морской бактерии Vibrio alginolyti us (предоставлена Л. Е. Бакеевой, МГУ им. М. В, Ломоносова). Видно, что цитоплазма наполнена рибосомами. Фиксация четырехокисью осмия

Из-за ограниченной проникающей способности электронов толщина объектов исследования не должна превышать 0,1 мкм. Это создает определенные трудности при приготовлении образцов в виде тонких пленок или ультратонких срезов. Вот почему нередко пользуются косвенным методом исследования — методом реплик. В этом случае с исследуемой поверхности образца (как правило, со свежего скола) получают тонкий отпечаток, достаточно точно воспроизводящий ее рельеф — реплику. Реплику обычно получают методом напыления. Для этого на свежий скол исследуемого объекта наносят при испарении в вакууме углерод, создающий удерживающий слой в виде тонкой сплошной пленки на изучаемой поверхности. Затем для повышения контрастности углеродную реплику [c.156]

Образование мезофазы начинается в объеме изотропной жидкости при 390-400 С. При этом на ультратонких срезах с помощью электронного микроскопа обнаружены мезофазные сферы размером около 0,1 мкм. Их зародыши и первые частицы мезофазы, не видимые под микроскопом, имеют еще меньшие размеры [2-6]. Между температурами Та и (рис. 2-7) образуются нематические жидкие кристаллы. С ростом температуры они необратимо переходят в анизотропный углерод. По-видимому, показанные на диаграмме области изотропного углерода состоят из смешанных структур изотропной и анизотропной. По мере приближения сплава к однокомпонентному состоянию образующийся углерод становится все более изотропным. При соотношениях между мезофазой и изотропной средой не больше 1 1 рост сфер происходит без их слияния. При этом сохраняется сферическая форма частичек, а их диаметр увеличивается до нескольких десятков микрон. [c.46]

Прямые методы заключаются в том, что в электронном микроскопе исследуется непосредственно объект в виде очень тонкой пленки или мельчайших частиц. Эти методы применяют для определения формы и размера частиц высокодисперсных систем, а также для изучения структуры биологических объектов, полимеров, металлов и др. За последние годы были разработаны конструкции микротомов, позволяющие получать ультратонкие срезы препаратов порядка 200—500 А, которые пригодны для. прямого наблюдения в электронном микроскопе. [c.174]

Основное требование, которое предъявляется к объекту для получения ультратонких срезов, заключается в том, чтобы он обладал достаточной твердостью и не деформировался в процессе резания. [c.181]

Метод ультратонких срезов широко применяют для исследования распределения различных наполнителей и ингредиентов в полимерах, для исследования структуры смесей полимеров, а в некоторых случаях и для исследования надмолекулярных образований в полимерах. [c.182]

Для обнаружения нуклеоида бактерий используют микрохимическую реакцию Фельгена с применением слабого кислотного гидролиза. При этом освобождается дезоксирибоза, которая затем переходит в альдегидную форму и вступает в реакцию с бесцветной фуксинсернистой кислотой реактива Шиффа. Нуклеоид окрашивается в красно-фиолетовый цвет. Выявить нуклеоид микроорганизмов можно также с помощью электронно-микроскопических исследований ультратонких срезов. [c.21]

Электронный микроскоп, ультратонкие срезы и реплики, т. 1, стр. 19 [c.380]

На рис. 2.11 представлена электронно-микроскопическая фотография ультратонкого среза с частицы порошка ПЭ. Из микрофотографии видно, что поры в ПЭ образованы соприкасающимися шарообразными частицами, т. е. ПЭ имеет пористое строение. Кристаллическая структура ПЭ, полученного в газовой фазе, не отличается от кристаллической структуры ПЭ, полученного в растворителе рентгенограммы ПЭ, полученных обоими способами, идентичны — одинаковый набор колец и равная интенсивность рефлексов (рис. 2.12). [c.82]

Электронный микроскоп, ультратонкие срезы [c.19]

РИС. 1-11. в. Перегородчатое соединение в ресничном эпителии моллюсков препарат получен методом замораживания—скола. Соединения этого типа полностью опоясывают клетки. Обнаженная> поверхность покрыта параллельными рядами мембранных частиц, соответствующими распределению межклеточных перегородок, видимых на ультратонких срезах. В участках мембраны, находящихся вне области контакта, частицы расположены нерегулярным образом [44]. [c.57]

Изучение ультратон к их срезов. Метод реплик, передавая строение только видимой, геометрической поверхности частицы, не дает представления о ее внутренней структуре, которая может заметно отличаться от строения видимой поверхности вследствие прошедших реакций гидратации и гидролиза. Метод получения ультратонких срезов с поверхности твердого тела (толщиной около 0,1 мкм) позволяет восполнить этот пробел и изучить и внутреннюю, и внешнюю истинную физическую структуру частиц. Для приготовления срезов применяют специальные приборы — микротомы и ультрамикротомы, в которых режущим инструментом является равномерно и точно движущийся нож из алмаза или зеркального стекла. [c.142]

РИС. 1-11. г. Ультратонкий срез перегородчатого контакта того же типа, что и на рис. В. Плазматические мембраны двух клеток соединяются с помощью электроноплотных пластин, или перегородок, регулярно расположенных в межклеточном пространстве. Обратите внимание на аппарат Гольджи в нижней части снимка [44]. [c.57]

РИС. 1-11. Ж. Щелевые контакты ультратонкий срез [44]. [c.60]

Улучшенная техника микротомии и электронной микроскопии ультратонких срезов животных клеток привела к выявлению однородных плотных гранул с диаметром около 15 нм непосредственно в клетке. Электронно-микроскопические исследования Дж. Паладе (США), проведенные в 1953—1955 гг., показали, что маленькие плотные гранулы в изобилии содержатся в цитоплазме животных клеток. Они видны либо присоединенными к мембране эндоплазма-тического ретикулума, либо свободно рассеяны в цитоплазме. [c.49]

Распределение лигнина в клеточных стенках можно наблюдать с помощью ультрафиолетовой микроскопии, используя его способность к поглощению при 280 нм (см. 6.4.2). Предприняты попытки количественного определения лигнина в слоях клеточных стенок [17, 33, 48]. Успешные результаты были получены с использованием метода ультратонких срезов [57]. На снятых в монохроматическом ультрафиолетовом свете микрофотографиях измеряли интенсивность поглощения с помощью микроденситометра. [c.182]

Рис. 2.9. Различные типы пор клеток древесины лиственных и хвойных пород, ПЭЛ ультратонких срезов

Гетерогенность структуры аморфных полимеров подтверждается также методом малоуглового рассеяния рентгеновских лучей. Этот метод достаточно объективен, так как подготовка к рентгеновскому исследованию не вносит никаких изменений в структуру объекта кроме того, этим методом исследуются полимеры в виде блоков (непосредственное наблюдение объекта в электронной микроскопии возможно только в виде ультратонких срезов или пленок). Диффузное малоугловое рентгеновское рассеяние возникает только в случае неоднородности среды, причем эти неоднородности расположены беспорядочно. В случае исследования гомогенной среды малоуглового диффузного рассеяния не возникает. Таким образом, сам факт существования диффузного малоуглового рассеяния должен свидетельствовать о наличии перепадов электронной плотности в исследуемом объекте. [c.79]

Электронно-микроскопическое исследование ультратонких срезов криптогетерогенного ПВФ (как и гомогенного ПВФ) не обнаруживает каких-либо неоднородностей коллоидных размеров (рис. 8, а). Иногда в условиях приготовления препаратов пористость ликвидируется неполностью и отчетливо можно проследить характер упаковки деформированных структурных элементов при образовании криптогетерогенных контактов (рис. [c.337]

Прямым методом электронно-микроскопического анализа изучают также структуру различных композиционных материалов, полимеров и т. д., делая с них срезы. Ультратонкие срезы толщиной не более 200 нм получают с помощью специальных приборов — ультрамикротомов. Образец закрепляют на конце обогреваемого стержня, совершак )-щего колебательные нли вращательные движения. Прн движении образец подходит к ножу 1У Икротома, который снимает е него тонкий срез. За промежуток времени между двумя последовательными колебаниями стержень с образцом нагревается и расширяется. Регулируя скорость нагревания, можно получит срезы различной толщины. Образующиеся срезы надают на поверхностг, жидкости, откуда их переносят на сетки с пленкой-подложкой. [c.125]

Полимеры, которые находятся при комнатной температуре в застеклованном состоянии, можно микротомировать без дополнительных обработок. Однако эластомеры необходимо отверждать перед изгото- влением ультратонких срезов. Существует несколько приемов отверждения эластомеров перевулканизация хлоридом серы заполимери-зовывапие в метилметакрилат или другой мономер, дающий твердый полимер замораживание образца. [c.182]

При прямых методах исс.иедования, т. о. при исследовании непосредственно объекта в виде ультратонких срезов и пленок, часто также прибегают к методам контрастирования, которые ос]юваны на пропитывании объекта веществами, содержащими тяжелые металлы с большой рассеивающей способностью по отношению к электронам. Этот метод, по аналогии со световой микроскопией, применяющей окрашивание животных илп растительных тканей, используют, главным образом, нри исследовании биологических объектов или полимеров для получения сведений об их морфологической структуре. [c.189]

Из одной бактериальной клетки, скажем Е. oli, можно получить целых 10 ультратонких продольных срезов (рис. 1-2), а из клетки эукариот диаметром 10 мкм — до 100 срезов. Только с такими ультратонкими срезами получаются четко сфокусированные изображения. Для изучения трехмерных структур используют серийные срезы . [c.20]

РИС.1-4. A. Электронная микрофотография ультратонкого среза молодой эпидермальной клетки подсолнечника. Ткань фиксировали и окрашивали уранилацетатом и цитратом свинца. Ясно видны ядро, митохондрии, хлоропласты, тельце Гольджи (диктиосо-ма, слева около ядра), эндоплазматический ретикулум, клеточная стенка, плазмадесмы и кутикула (наверху справа в виде тонкого темного слоя). (С любезного разрешения Ногпег Н. Т.) [c.30]

Диспергирование технического углерода в смесях полимеров можно оценить по средней шероховатости тонкого среза композиций. Для микроскопических исследований на криомикротоме пригодны ультратонкие срезы толщиной около 100 нм. Так как калибровочные константы чаще всего неизвестны, для оценки используют только относительный фактор шероховатости к, где / - количество выступов на 1 см поверхности к - средняя высота выступов, мкм. [c.582]

Количество и размер электронно-светлых зон, выявляемых на ультратонких срезах (рис. 20, 6 и аморфных гранул, выявляемых на сколах, значительно увеличиваются при дальнейшем культивировании мицелия и достигают максимума на третьи сутки. В этот период, когда содержание антибиотика достигает максимального значения, наблюдается заметное просветление цитоплазмы и интенсивное развитие мембранного аппарата, окружающего многочисленные гранулы (рис. 20, б). Размеры гранул настолько велики, что в некоторых случаях они заполняют большую часть пространства гифы между двумя смежными септами. Аналогичные по форме п размерам гранулы наблюдаются и на негативно контрастированных препаратах (рис. 20, е). На последних этапах культивирования (7— 8 сутки) цитоплазма полностью просветляется, а содержимое клетки представлено скоплениями мембран и многочисленными крупными гранулами. Электронно-микроскопические исследования показали, что появление гранул, увеличение их числа и размеров коррелирует с содержанием антибиотика в культуре. Обнаружение у гранул люминесценции, характерной для флавофунгина, было прямым доказательством их природы (рис. 20, г). [c.175]

На лигнине березы Betula papyrifera) впервые показали [71 ], что состав лигнина зависит от его местоположения в клеточной стенке. УФ-микроскопическое исследование ультратонких срезов позволило обнаружить, что лигнин вторичной стенки сосудов и срединной пластинки является преимущественно G-лигнином. Лигнин вторичной стенки волокон и клеток лучевой паренхимы состоит в основном из сирингильных единиц. Лигнин же из срединной пластинки и углов волокон и лучевых клеток представляет собой типичный смешанный GS-лигнин. Затем установили корреляцию [202] между отношением S- и G-единиц в лиственных лигнинах из различных морфологических участков с числом метоксильных групп, приходящимся на единицу Сд (ОСНуСд) в лигнине всей древесины в среднем. [c.121]

Препараты кислотнь1х лигнинов (Н2804-лиг1шн, ТФУ-лигнин, см. 3.2.9) видны в виде частиц неправильной формы (рис. 6.7, a). Исследования лигнинных скелетов, получающихся при кислотной обработке ультратонких срезов клеточной стенки, показывают, что размер частиц может зависеть от условий выделения лигнина [61, 67]. При электронно-микроскопических наблюдениях эта-нол/НгО-лигнинов из ели и тополя были обнаружены правильные глобулярные ассоциаты со средним диаметром порядка 100 нм в большей части со структурированными поверхностями (рис. 6.7, е) [c.134]

После осторожной обработки срезов древесины кислотами (H2SO4, НС1, HF) остается лигнинный скелет клеточной стенки, который можно разрезать на ультратонкие срезы [7, 27, 52]. При исследовании этих срезов в электронном микроскопе видно, что лигнин в сложной срединной пластинке имеет высокую концентрацию. Во вторичной стенке он распределяется приблизительно равномерно, причем частицы лигнина ориентированы в соответствии с направлением присутствовавших до кислотной обработки фибрилл целлюлозы. Дихроизм лигнина в ультрафиолетовом свете, обусловленный текстурой целлюлозы, наблюдали на срезах древесины ели и волокон джута [17, 48]. [c.180]

На ультратонких срезах, полученных из древесины ели (Pi ea abies), облученной гамма-лучами в дозах 6,55 МДж/кг, после обычной процедуры приготовления с погружением в воду можно было видеть разрыхление структуры [30]. Это объяснили удалением значительного количества водорастворимых продуктов. После обработки ультразвуком в течение нескольких минут целлюлозные фибриллы и аморфные компоненты облученной древесины легко распадались на короткие фрагменты. В случае необлученной древесины ультразвуковая обработка не оказывала никакого действия. [c.292]

Рис. 2.10. Мембраны различного типа окаймленных пор древеснны хвойных пород, ПЭМ ультратонких срезов

Принадлежность исследуемой фазы к фторкупффериту, т. е. моноклинной разновидности амфибола с пространственной группой С 2/т, подтверждается также результатами изучения методом микродифракции электронов. Данные этого метода в сочетании с электронно-микроскопическим изображением объекта позволяют не только диагностировать, но и устанавливать морфологические особенности микромонокристаллов, а также изучать механизм минералообразования. Вместе с тем изучение волокнистых амфиболов методом микродифракции сопряжено с рядом трудностей, для преодоления которых следует иметь в виду следующее обстоятельство. Микромонокристаллы волокнистых соединений вытянуты параллельно [001] и, следовательно, для них невозможно без использования ультратонких срезов получать сечения обратной решетки с индексами узлов ккО. [c.122]

Среди внутрицитоплазматических мембран вьщеляют несколько видов (табл. 4). Развитая система внутрицитоплазматических мембран характерна для большинства фотосинтезирующих эубактерий. Поскольку было показано, что в этих мембранах локализован фотосинтетический аппарат клетки, они получили общее название фотосинтетических мембран. Все фотосинтетические мембраны (как и все внутриклеточные) — производные ЦПМ, возникшие в результате ее разрастания и глубокого впячивания (инвагинации) в цитоплазму. У некоторых организмов (пурпурные бактерии) фотосинтетические мембраны сохранили тесную связь с ЦПМ, легко обнаруживаемую при электронно-микроскопическом изучении ультратонких срезов клетки. У цианобактерий эта связь менее очевидна. Одни авторы считают, что связь фотосинтетических мембран с ЦПМ у цианобактерий всегда существует, но трудно выявляется, поскольку редко попадает в плоскость среза препарата. По другому мнению, фотосинтетические мембраны цианобактерий — структуры, возникшие первоначально из ЦПМ, но впоследствии отделившиеся от нее и являющиеся в настоящее время автономными клеточными компонентами. [c.52]

За период с 1936 по 1960 г. с помощью методов дифракции рентгеновских лучей, поляризационной микроскопии, измерений электрических характеристик мембран, их проницаемости и поверхностной активности были получены многочисленные факты, свидетельствующие в пользу моделей Даниелли — Давсона. Но наиболее мощную поддержку эта модель получила на рубеже 1950—1960 гг. благодаря прогрессу, достигнутому в технике приготовления ультратонких срезов тканевых препаратов для электронной микроскопии. На полученных микрос тографиях различных мембран была отчетливо видна трехслойная структура толщиной [c.582]

Препараты для ЭМВ готовят методом негативного контрастирования. Для этого смешивают равные объемы вирусной суспензии и 1%-го раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты ( негативная краска ) на формваруглеродной подложке. Краска окружает вирусную частицу и контрастирует наружную оболочку вириона, а иногда проникает внутрь капсида, в результате чего получают профильное изображение наружной оболочки. Для выявления вирусов в биологическом материале применяют также метод ультратонких срезов. [c.267]

Рис. 8. Электронно-микроскопические снимки ультратонких срезов а — воздушно-сухого криатогетерогенного образца ПВФ б — криптогетерогенного образца ПВФ, подвергшегося действию паров воды о — пористой конденсационной структуры ПВФ

Плазматическая мембрана. На электронных микрофотографиях ультратонких срезов бактерий, фиксированных четырехокисью осмия, плазматическая мембрана представляется многослойной. Она состоит из двух осмофильных и потому темных слоев толщиной 2-3 нм каждый и промежуточного более светлого слоя толщиной 4-5 нм. По своему строению мембраны бактериальных, животных и растите.пьных клеток очень сходны. Это дает основание говорить об универсальной элементарной мембране . Мембраны можно выделить, подвергнув осмотическому шоку протопласты, полученные с помощью лизоцима. Мембрана богата липвдами, в особенности фосфолипидами. Составляя всего 8-15 % сухого вещества клетки, мембраны содержат 70-90 % всех ее липидов. [c.23]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология