Гель-проникающая хроматография коэффициент распределения

Эккере [33] применил этот принцип к гель-хроматографии и предложил для очень пористых гелей механизм ограниченной диффузии. (В отличие от других типов геля для сефадекса 0-200 коэффициент распределения между фазой геля и элюентом в равновесном состоянии значительно отличался от значения Кв., определенного на колонке.) Согласно новому принципу, объемы выхода макромолекул (белков) с гранулированного геля агара или сефадекса 0-200 определяются скоростью их диффузии в фазу геля. Вследствие медленной диффузии крупные молекулы проникают в гель не столь глубоко, как мелкие, н поэтому вымываются с колонки гораздо раньше. Вновь применив уравнение Ренкина [32], Эккере связал величину /(( , характеризующую поведение макромолекул в геле, с величиной г Я, где г — радиус частиц белка [c.120]

Рис. 5.19. Схематическое изображение процесса разделения трех веществ с различными молекулярными массами с помощью гель-фильтрации. Молекулы наименьшего размера могут свободно входить во внутреннее пространство частиц геля более крупные молекулы также могут войти внутрь частицы, ио не столь легко. как первые. Самые крупные молекулы неспособны проникать внутрь геля. Светлые кружочки — частицы геля, о —смесь нанесена на колонку б — процесс разделения прошел наполовину в — самые крупные молекулы начинают выходить с КОЛОНКИ е — кривые элюирования, полученные путем измерения концентрации вещества в каждой фракции собранного элюата после завершения хроматографии. Если V o —объем растворителя между частицами геля, а — объем доступного растворителя внутри геля, то объем элюирования Уе (объем, с которым данное вещество выходит с колонки) равен V = V o- -ЯV s (К — коэффициент распределения вещества между подвижной фазой 1 о и неподвижной фазой Для веществ, не способных проникать в гель, V =V o, поскольку для них = 0. Для веществ, способных входить в гель, V в>V o V E=V o+Vs для молекул, свободно проникающих в гель (К=1).

В гель-проникаюшей хроматографии ta — характеризует молекулы и вешества, которые не могут проникнуть в поры геля в колонке в адсорбционной хроматографии — вещества, которые хотя и проникают практически в весь объем пор, но не задерживаются вследствие взаимодействия с поверхностью сорбента. Коэффициент емкости характеризует процессы взай модействия разделяемого вещества с подвижной и стационарной фазами и является, следовательно, термодинамической величиной. Его значение зависит от коэффициента распределения вещества /Сг и объемов стационарной (Ух) и подвижной (Ут) фаз в колонке [c.232]

Гель-хроматографию (гель-фильтрацию) также можно отнести к колоночной хроматографии, однако область ее применения несколько специфична [22—24]. Неподвижной фазой в стеклянной колонке служит набухшее веп1,ество со структурой геля (декстран, агар-агар, полиакриламид, полистирол и т. д.) предпочтительно с поперечносшитой полимерной структурой, вследствие этого обладающее ограниченным набуханием. Растворителем для подвижной фазы служит то же самое вещество, в котором происходит набухание геля, главным образом вода или смесь воды и спирта. Пустоты между шариками геля заполнены раствором. Во время хроматографирования растворенное вещество распределяется между гелем и жидкостью, и этот процесс в основном зависит от размера частиц растворенного вещества. В идеальном случае распределение небольших ионов и молекул между двумя фазами проходит совершенно одинаково, в то время как большие молекулы ограниченно проникают в гелевую фазу. Согласно экспериментальным данным, связь молекулярной массой химически сходных веп1,еств и коэффициентом распределения подчиняется уравнению [c.285]