гибридома, клеточная линия

ГИБРИДОМА. Клеточная линия, образующаяся при слиянии клеток миеломы и лимфоцита такая линия постоянно экспрессирует иммуноглобулины обоих родителей. [c.520]

По мере увеличения количества используемых клеточных линий пропорционально возрастает и риск загрязнения этих линий клетками других линий. Проблема становится особенно острой в лабораториях, в которых проводятся интенсивные исследования со многими различными линиями клеток человека (гибридомами), доступными к настоящему времени. Тесты на полиморфные изоферменты, маркерные поверхностные антиге- [c.137]

Моноклональные антитела грызунов, сходные с антителами человека, можно получить, выделив кДНК L- и Н-цепей из клеточной линии гибридомы грызунов и амплифицировав их вариабельные области с помощью ПЦР. В качестве праймеров для амплификации можно использовать олигонуклеотиды, комплементарные высококонсервативным сегментам ДНК, фланкирующим с 5 - и 3 -концов последовательность, кодирующую вариабельную область. Зная нуклеотидные последовательности кДНК вариабельных областей легкой и тяжелой цепей (V и Vjj), легко определить границы DR, основываясь на том, что соответствующие им последовательности гипервариабельны, в то время как каркасные области относительно консервативны. Исходя из данных о нуклеотидных последовательностях ДНК, кодирующих DR грызунов, синтезировали шесть пар олигонуклеотидных праймеров. Каждая пара инициировала синтез ДНК, кодирующей одну из шести DR грызунов три, локализованных на L-цепи, и три - на Н-цепи. Кроме того, на 5 -конце каждого праймера находилось 12 дополнительных нуклеоти- [c.217]

Гибридома (Hybridoma) Гибридная клеточная линия, полученная при слиянии нормальных антителообразующих клеток (лимфоцитов) и миеломных клеток. Обладает способностью к неограниченному росту и синтезу моноклональных антител. [c.547]

Гкбридома — гибридная клеточная линия, полученная в результате слияния антителопродуцирующей клетки с миеломной, активно пролиферирующей клеткой, у которой отсутствует собственный синтез иммуноглобулинов гибридома образует высокоаффинные антитела узкой специфичности. [c.460]

Многие линии клеток могут расти в суспензии в культуральных системах, используемых для культивирования клеток в монослое (т. е. без встряхивания или перемешивания). К числу клеточных линий, способных к такой форме роста, относятся многие линии лимфобластов (например, MOLT, RAJI), гибридомы и некоторые некроветворные клетки, такие как клетки LS, описанные в предыдущем разделе. Однако в последнем случае всегда существует опасность реверсии к монослою (небольшая часть линии клеток LS всегда прикрепляется к стенкам сосуда [c.96]

Принимая во внимание широкое использование гибридомноп технологии, никакой обзор свойств клеточных линий не будет полным, если в нем не будет упомянута эта область исследований. Наиболее надежным критерием идентификации является, естественно, специфичность моноклональных антител, продуцируемых гибридомой. Если этот клеточный продукт отсутствует и его синтез не может быть восстановлен, то линия гибридомных клеток ценности не представляет. Однако потенциальное количество различных гибридом, теоретически равное числу существующих эпитопов, намного превышает число имеющихся различных линий слившихся клеток. Это создает проблему для любого учреждения, создающего банк гибридом, поскольку ни одна индивидуальная организация не в состоянии идентифицировать все моноклональные антитела даже в современной ситуации, когда количество антител относительно невелико. [c.155]

В 50-е гг. Вернет, Ерне, Ледерберг и Тол1мейдж постулировали, что каждый В-лимфоцит запрограммирован на синтез антител одной определенной специфичности, относящихся к тому же идиотипу, что и молекулы, экспрессированные на поверхности данного лимфоцита в качестве антигенных рецепторов. В настоящее время это положение убедительно доказано. Если животное иммунизируют каким-либо антигеном, то начинается клональная экспансия и дифференцировка тех В-лимфоцитов, которые распознают этот антиген. В результате образуются плазматические клетки, которые продуцируют антитела. Если бы индивидуальные антиген-реактивные клетки лимфоидной ткани иммунизированного животного удалось длительное время поддерживать в культуре, то надосадочная жидкость содержала бы однородные молекулы антител (моноклональные антитела), которые были бы способны распознавать только один или несколько близкородственных антигенов. К сожалению, потомство индивидуального реактивного лимфоцита не удается длительное время выращивать в культуре для получения больших количеств моноклональных антител (МКА). Впервые эта проблема была решена Келером и Мильштейном в 1975 г. [1]- Исследователям удалось трансформировать антителообразующие лимфоциты путем слияния их с клетками иммортализованной клеточной линии с последующим клонированием индивидуальных гибридных клеток. Таким образом были получены линии гибридных клеток (гибридомы), каждая из которых продуцировала молекулы антител одного и того же идиотипа. [c.116]

В том случае, когда клетки после слияния рассевают в лунки панели для культуры ткани объемом 2 мл, вероятность того, что в одной лунке окажется более одного клона, повышается. Просматривая культуры под инвертированным микроскопом, можно наблюдать два и более клонов в лунке. Клонирование клеток, продуцирующих антитела нужной специфичности, предпринимают немедленно после образования монослоя (обычно па 21—28-е сутки после гибридизации). Тем не менее гибридо-ыу продолжают наращивать в нескольких лунках, а затем во флаконах, пока не образуется достаточное для замораживания и хранения в жидком азоте количество клеток. Необходимо иметь, по меньшей мере, пять ампул исходной клеточной взвеси на случай, если возникнут трудности или неудачи при клонировании. Во время культивирования гибридомы во флаконах культуральную среду тестируют для выявления антител нужной специфичности. Если наблюдается прогрессирующее сни-жение образования антител на стадии роста культуры во флаконах, то это означает, что несекретирующие варианты гибридных клеток обогнали в росте антителообразующие клетки, В таком случае важно отобрать антителообразующие гибрид ные клетки путем клонирования, а небольшое количество клеток из этих флаконов сохранить для последующих процедур клонирования. Клонирование клеток из тех флаконов, где а культуральной среде выявляют прогрессивное снижение образования антител, почти всегда безуспешно. Если все же очень важно выделить такую клеточную линию, то следует извлечь из жидкого азота и разморозить образец клеток, замороженный на самой ранней стадии культивирования и сразу же после восстановления клеток в культуре провести клонирование. Клони-рование может быть осуществлено либо путем высевания небольшого количества клеток в мягкий агар, либо с помощью лимитирующих разведений. [c.139]

Описываемые ниже методики более чувствительны, чем гемагглютинация. Кроме того, метод определения зон гемолиза позволяет обнаруживать индивидуальные антителосекретирующие клетки. Используемые в настоящее время методы особенно удобны для определения ревматоидных антител, синтезируемых либо клеточными линиями, гибридомами и нормальными клетками, индуцированными митогенами in vitro, либо клетками, свежевыделенными из организма. [c.315]

Выращенные таким образом в небольшом количестве культуры гибридных клеток проверяют на способность секретировать в питательную среду специфических антител и далее рассевают до отдельных клеток методом последовательных разведений. В результате, каждая клетка потенциально может стать родоначальницей клона, продуцирующего mAb требуемой специ-<4 ичности. Поскольку синтез антител в ряде случаев может быть токсичным для клетки-продуцента, вместо культивирования in vitro на этой стадии параллельно используют культивирование in vivo в виде асцитных опухолей у мышей. Отмечено, что непродолжительное культивирование in vivo в дальнейшем способствует стабилизации клеточных линий, продуцирующих mAb. Полученные таким образом, охарактеризованные клоны гибридом являются источником неограниченного количества mAb данной специфичности, которые можно получать, культивируя гибридомы в искусственной питательной среде или асцитной жидкости организма мышей. [c.405]

Гибридома. Гибридная клеточная линия, полученная in vitro путем слияния клеток двух типов, обычно лимфоцитов и клеток опухоли. [c.557]

Дифференцировка В-клеток, цитотоксических Т-лим-фоцитов индукция продукции 1Ь-2 и экспрессии рецептора к 1Ь-2 на Т-клетках рост Т-лимфоцитов Рост стволовой кроветворной клетки созревание мегакариоцитов Индукция синтеза белков острой фазы Рост гибридомы/плазмоцитомыУмиеломы Рост Т-клеточной лимфомы и В-лимфоцитов, трансформированных вирусом Эпштейн-Барра рост клеток почечной карциномы угнетение роста мие-лоидной клеточной линии Дифференцировка нейронов индукция синтеза аце-тилхолина активация остеокластов рост мезенги-альных клеток рост кератиноцитов [c.31]

Необходимо хорошее оборудование для работы с культурами, в том числе СОг-термостат (содержание СОг в воздухе — 5%)- Желательно иметь ламинарный бокс для осуществления манипуляций в стерильных условиях. Следует отметить, что знание основ асептики и некоторый опыт в работе с клеточными культурами важны для успешного проведения работ. Для визуального наблк>дения за культурами необходим инвертированный микроскоп (например, Olympus СК модель снабжена широкой ровной подста вкой, объективом ХЮ и бинокулярной насадкой WF 15Х). Кроме контейнеров с жидким азотом для хранения плазмацитом и гибридом, для получения моноклональных антител необходимо не так уж много специального оборудования. Позднее будут рассмотрены возможные варианты процедур скрининга, которые, по-видимому, следует усовершенствовать и более широко внедрять в практику. Для иммунизации необходимо иметь инбредные линии мышей (обычно BALB/ ) или крыс (Lou). Если предполагается выращивать гибридомы в виде асцитных опухолей, то понадобится довольно большое количество животных. [c.117]

Для получения гибридомы, образующей антитела N 5/1, мышей иммунизируют перевиваемыми лимфобластами человека, берут клетки мышиной селезенки и проводят их слияние с клетками мышиной миеломы, а затем отбирают полученные гибриды. В качестве реагента, содержащего моноклональные антитела, используют разбавленный 1 10 нли 1 20 супернатаит среды, в которой культивировалась данная линия гибридных клеток. Чтобы избежать спонтанного Т-клеточного розетирова-иия, образование розеток с участием моноклональных аитнтел к DR-антнгенам проводят с эритроцитами быка (ЭБ), а ие барана. [c.202]

Значительная часть Т-клеток, экспрессирующих цепь vpe.l, распознает антиген Mls-1 . Путем слияния Т-лимфобластов (экспрессирующих vp8.1 или Vp8.2), выделенных из лимфатических узлов мышей линии B10.br (М1а-1 ), с вариантом Т-клеточной тимомы BW5147 (не экспрессирующей ни Va, ни vp) были получены Т-клеточные гибридомы. Клетки-гибриды отделяли при помощи скрининга с использованием антител, распознающих vpe.l и (для сравнения) VP8.2, затем исследовали реактивность гибридом в отношении антигенов Mls-1 на поверхности клеток-стимуля-торов Н-2 . Подавляющее большинство гибридом, реагирующих на антиген Mls-1 , экспрессировало VP8.1 и незначительное - VP8.2. Эти результаты показывают, что в распознавании антигена Mls-1 главную роль играет цепь vp8.1. [c.251]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология