Протопласты способы выделения

В общем виде способ получения протопластов представлен на рисунке. Однако для каждой системы тканей этот способ требует корректировки. В некоторых случаях бывает необходима предварительная подготовка материала. Так, чтобы получить жизнеспособные протопласты из листьев гаплоидного растения табака, ткань выдерживают в темноте в течение нескольких часов в растворе 0.4 М сахарозы, а побеги и листья бобов помещают на 1 ч в смесь 0.5 М сорбита и 5 10 М СаСЬ, чтобы вызвать предварительный плазмолиз и сократить время инкубации в ферменте. Иногда перед выделением протопластов растение на некоторое время помещают в темноту либо на короткое время на яркий свет. [c.166]

Пролиферативная способность клеток, возникающих из протопластов. Формирование клеточной стенки осуществляется легче, чем дальнейшая пролиферация клеток. Р. Г. Бутенко (1979—1981) выделяет следующие факторы, которые определяют пролифера-тивную способность клеток, возникших из изолированных протопластов 1. Видовая специфичность и физиологическое состояние исходной ткани растений. 2. Способ и условия выделения протопластов. 3. Плотность высева протопластов. 4. Состав пита- [c.41]

Изолированные протопласты за то короткое время, пока они не образовали клеточной стенки, могут сливаться между собой. Слияние может быть спонтанным. Оно происходит чаще при одноступенчатом способе выделения протопластов и если используются протопласты, изолированные из молодых тканей или суспензионных культур. По мнению Е. Кокинга (1972), спонтанное слияние осуществляется пассивно путем расширения плазмодесм, которыми связаны клетки в растительной ткани. [c.42]

Разработаны методы выделения ядерной ДНК из каллуса, листьев, протопластов и отдельных клеток. В каждой лаборатории используют определенные варианты методик, которые обычно -подразумевают разрушение свежего растительного материала, удаление неразрушенной ткани фильтрованием, фракционирование клеточных компонентов дифференциальным центрифугированием, обработку ядер ДНКазой, лизис, депротеинизацию и последующую очистку нуклеиновых кислот в градиенте плотности s l/БЭ [6, 16]. В данном разделе изложены методики, которые можно взять за основу при разработке способов выделения ядерной ДНК из различного растительного материала. Кроме того, ядра, выделенные, как указано ниже, могут исполь- [c.254]

Описаны нсточннкн для выделения протопластов, способы нх получения, условия их последующего культивирования. Дана пропись сред, используемых для культивирования протопластов. Бнблиогр. 11 назв. Ил. 1. Табл. 2. [c.317]

К числу недостатков ферментативного метода получення протопластов можно отнести 1) невозможность применения этого метода для некоторых видов 2) необходимость затрачивать дополнительное время На выделение протопластов (что отнюдь не ограничивает возможность применення этого метода в тех случаях, когда гарантированные результаты оправдывают затраченные усилия) н 3) ограниченный выход органелл (1—5 мгХл на 10 г ткани листа). Сюда же относится и настоятельная необходимость проводить переваривание в теченне минимального времени и использовать для очистки протопластов наиболее подходящий способ. Следует помнить о том, что переваривающие, ферменты могут подавляться различного рода ингибито рам и, а сама обработка ферментами может давать ряд побочных эффектов. [c.557]

Мягкая осмотическая обработка применяется также при выделении протопластов и мембранных везикул грамположительных бактерий. Выделенные с ее помощью препараты чрезвычайно полезны при изучении транспорта веществ через бактериальную мембрану. Способы их получения обсуждаются и описываются в следующей главе (разд. 19.3). [c.381]

Обсуждены разные приемы клеточно-инженерной технологии на растительных, животных н бактериальных клетках. Рассмотрены проблемы модификации протопластов и соматической гибридизации клеток растений, способы получе ния гибридов и методы идентификации и выделения ассоциаций клеток высших растений с микроорганизмами. [c.4]

В первой главе разбираются проблемы получения клеточных культур, их отличия от исходных тканевых клеток целого растения и различия при разных способах культивирования. Вторая глава посвящена протопластам растительных клеток, их выделению и культивированию. Изолированные протопласты являются удобным объектом для биологического конструирования. Гибридизация и цибридизация соматических клеток на основе слияния изолированных протопластов, введение органелл и бактериальных клеток, хромосом и чужой ДНК — основа технологии полученная генетически измененных клеток и растений. [c.5]

Удаление нижнего эпидермиса — это трудоемкая и требующая большого мастерства процедура. Награда за терпение заключается в том, что полученные при этом популяции протопластов, как правило, содержат высокий процент жизнеспособных клеток. Описаны альтернативные способы быстрого выделения протопластов, в которых используют мелко нарезанные кусочки листа стерилизованных выращенных в теплице или размножаемых in vitro растений. С одной из таких методик читатель может ознакомиться в приложении 2 [VI]. Популяции протопластов, выделенных быстрыми методами, обычно содержат много мертвых клеток и деб-рис, однако, тем не менее, вполне пригодны для трансформации путем совместного культивирования с агробактериями. [c.147]

Впервые протопласты растительных клеток были получены при изучении плазмолиза (в 1892 г.) в клетках водного растения - телореза. Способ получения был весьма простым (если не сказать примитивным), но тем не менее с его помощью они были получены, а это главное. Тонкая полоска ткани растения видерживалась сначала в 0,1 М растворе сахарозы до тех пор, пока протопласт не "сожмется" и не отойдет от клеточных стенок, затем бритвой делался разрез полоски и протопласты высвобождались в среду. Такого рода методические приемы выделения протопластов получили название механических. Подобные методы имеют определенные ограничения 1) с помощью их можно получить только небольшое количество протопластов 2) можно использовать только те ткани, в клетках которых при данном способе может иметь место выраженный плазмолиз 3) из зрелой ткани таким методом протопласты получаются с большим трудом 4) метод довольно длительный и трудоемкий. [c.98]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология