Конъюгат альбумина сывороточного человека

Были синтезированы конъюгаты сывороточного альбумина человека с аденозиндезаминазой — ферментом, катализирующим гидролиз аденозина с образованием инозина и аммиака. Для регистрации ферментативной активности использовали чувствительный к аммиаку ионселективный электрод. Метод прост и. позволяет определить белок в концентрации 1 мкг/мл. [c.118]

Для того чтобы гаптен обладал иммуноген-ными свойствами, необходимо получить конъюгат гаптена с высокомолекулярным носителем. В качестве носителей обычно используют бычий сывороточный альбумин (БСА), альбумин сыворотки человека, овальбумин, тироглобулин и синтетические пептиды типа полилизина. Особых преимуществ у какого-либо носителя не отмечено и поэтому чаще всего им является наиболее доступный белок — БСА. Для хороших иммуногенных свойств конъюгата важно число молекул гаптена, конъюгированных с носителем. Показано, что слишком малое и слишком большое количество молекул гаптена, пришитых к носителю, ухудшает иммуногенные свойства. Для конъюгирования с БСА, по-видимому, наиболее оптимально вводить 10—20 молекул гаптена на молекулу носителя. [c.177]

Смит II соавторы с помощью аффинной хроматографии очищали рецептор прогестерона человека. Содержание рецептора в матке составляет лишь 0,002% суммарного белка, и оп весьма лабилен. В качестве лиганда использовали 11-дезоксикортикостерон. Гормон сажали на Br N-активнрованную сефарозу 41 в виде конъюгата с бычьим сывороточным альбумином. Полученный таким образом аффинный сорбент инкубировали 18 ч с частично очищенным цитозолем матки, промывали 0,4 М КС1 и элюировали мкМ раствором меченного тритием прогестерона. Рецептор выходил в комплексе с гормоном. Операция обеспечивала очистку в 10 ООО раз. Вместе с предварительной 6-кратной очисткой цитозоля осаждением сульфатом аммония это позволило авторам получить гомогенный препарат рецептора [Smith et al., 1981). [c.434]

Иммуноанализ проводят следующим образом. Полистирольные пробирки (80X11 мм) покрываются антителами при обработке 1 мл раствора антител. Растворы антител разбавляют ОД М N a-карбонатного буфера (pH 9,8) или фосфатным (солевым) буфером. Пробирки с этими растворами оставляют на 3 ч при 37 °С для хранения раствор оставляют в пробирках на холоду. Перед определением необходимое число пробирок промывают 0,9%-ным хлоридом натрия, содержащим 0,05% твина 20. В каждую пробирку помещают 0,5 мл одного из следующих растворов 1) стандартный раствор иммуноглобулина G, 2) неизвестный образец, 3) буферный раствор. После этого добавляют 0,1 мл разбавленного конъюгата щелочной фосфатазы и иммуноглобулина G (приготовленного с помощью сщивапия глутаровым альдегидом). Для разбавления используют фосфатный (солевой) буферный раствор, содержащий 1% сывороточного альбумина человека и 0,02% азида натрия. Пробирки инкубируют при комнатной температуре в течение ночи (16 ч) на роторной мешалке так, чтобы поверхность, покрытая антителами, покрывалась 0,6 мл раствора, находящегося в каждой пробирке. Затем пробирки промывают три раза раствором Na l-твин. Количество фермента, присоединенного к иммуноглобулину G, связанному стенками пробирок, покрытых антителами, определяют, добавляя 1 мл 0,05 М Na-карбонатного буфера (pH 9,8), содержащего 1 мг/мл п-нитрофенилфосфата и 1 ммоль/л хлорида. магния. Через 30 мин реакцию останавливают, добавляя 0,1 мл 1 М ХаОН. Измеряют оптическую плотность при 400 нм и строят стандартный график зави-си.мости ферментативной активности (изменение оптической плотности в единицу времени) индивидуальных образцов от содержания в них иммуноглобулина G. [c.382]

Мышей иммунизировали конъюгатом N1P-OA (N1P — гаптен 4-гидрокси-З-йод-5-нитрофенилуксусная кислота, ОА — овальбумин кур, использованный как носитель для гаптена). При переносе клеток селезенки примированных мышей в организм сингенного облученного хозяина развивается анти-КЧР-ответ только при использовании гомологичного антигена (NIP-овальбумина). Прсдукиия антител к NIP отсутствует, если в качестве носителя использован гетерологичный белок (бычий сывороточный альбумин — BSA, сывороточный альбумин человека — HSA). При введении интактным мышам клеток селезенки от мышей, примированных к NIP-OA и BSA, ответ развивается как к NIP-OA, так и к NiP-BSA. Р.сли из клеток селезенки мышей, иммунизированных BSA, удалить Т-клетки, то оставшаяся популяция В-клеток не способна отвечать на NIP-BSA, хотя реактивность к NIP-OA сохраняется. Сделан вывод о том, что Т-клетки реагируют на носитель, в то же время В-клетки отвечают на гаптен [c.245]

ИФА, основанный на использовании антител против активного центра фермента. При использовании сывороточного альбумина человека как модельного антигена разработан гомогенный ИФА, основанный на конкурентном связывании с конъюгатом фермент — антиген двух типов антител специфических антител против определяемого антигена и антител против фермента, вызывающих при связывании полную потерю его каталитической активности. Вследствие стерических затруднений связывание с конъюгатом антител против антигена приводит к потере способности взаимодействия антител второй специфичности с ферментом. В присутствии определяемого антигена доля специфических антител, вязанных с конъю- [c.117]

Ультразвуковой анализ хориогонадотропина человека. Смешивают 1 мл образца (мочи или буферного раствора) со 100 мкл реагента, приготовленного на 0,05 М натрий-фосфатном буфере, pH 7,2, и содержащего в 1 л 0,1 моль хлорида натрия 0,25 г тритона QS-44 2,5 мг конъюгата антител с пероксидазой. Погружают в эту смесь индикаторную бумагу, воздействуют ультразвуком в течение 5 мин, переносят бумагу в проявитель (приготовленный на 0,05 М натрий-фосфатном буфере, pH 6,5,- и содержащий в 1 л 0,1 моль хлорида натрия 2 г бычьего сывороточного альбумина 300 мг 4-хлорнафтола 0,25 г тритона QS-44), инкубируют 10 мин при комнатной температуре и измеряют отражательную способность, как указано выше. [c.134]

Данные, представленные на рис. 15-3, отражают влияние скорости потока на эффективность анализа. Они были получены для определения дигоксина с использованием мономерного конъюгата [Fab — -галактозидаза] и колонок (0,5x2 см) с аффинным сорбентом [сефадекс G-10 — сывороточный альбумин человека — уабаин] (об использовании уабаина вместо дигок- [c.251]

Сшивание террилитина или трипсина с сывороточным альбумином человека альдегидным методом приводит к снижению сродства обоих ферментов к ингибиторам протеиназ, присутствующим в крови [139]. Константа ингибирования для террилитина увеличивается в 3—4 раза, а для трипсина — на 2—3 порядка. Бремя рекальцификации крови не меняется для конъюгата террилитина, для конъюгата трипсина коагулирующая активность снижается. Оба конъюгата обладают пониженной острой токсичностью, по-видимому, за счет уменьшения сродства террилитина к его ингибитору — сс-макроглобулину, а для трипсина — за счет снижения коагулирующей активности. [c.200]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология