Осаждение сульфатом аммония

Осаждение сульфатом аммония повторяют еще 2—3 раза, после чего осадок суспендируют в 30 мл полунасыщенного раствора сульфата аммония. В таком виде ферментный препарат стабилен в течение нескольких недель при его хранении в холодильнике. [c.288]

В случае хранения в замороженном состоянии при —20 °С рекомендуется разделять антисыворотку на партии небольших объемов, чтобы не подвергать ее многократному замораживанию и размораживанию. При использовании некоторых методов необходимо, чтобы иммуноглобулины IgG были отделены от других сывороточных белков. Осаждение сульфатом аммония или комбинирование этой операции с ионообменной хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе [31, 36] или с аффинной хроматографией при использовании белка А, иммобилизованного на носителе [48], позволяет легко, но более или менее тщательно очистить эти иммуноглобулины. Иммуноаффинная хроматография, используя очищенный иммобилизованный антиген, дает возможность производить очистку специфических антител белка при разделении фракции IgG или даже антисыворотки. [c.97]

Осаждение сульфатом аммония, ионообменная хроматография на ДЕАЕ-цел-люлозе и ЗР-сефадексе, сефадексе 0-200 [c.124]

Опыт ставится обычно следующим образом. В серию про--бирок наливают различные объемы пробы, в которой требуется определить концентрацию гормона, например инсулина.-Одновременно готовят пробы, содержащие известное количество этого гормона. Затем в каждую пробирку добавляют стандартное количество меченого гормона (обычно используются гормоны, меченные испускающим улучи) и специфического к гормону антитела. Раствор инкубируют некоторое-время (несколько минут или часов) для достижения равновесия между гормоном (антигеном) и комплексом антитело — гормон. Далее отделяют комплекс гормон — антитело, например, методом гель-фильтрации или осаждением сульфатом аммония и измеряют радиоактивность полученного комплекса. Если в определяемой пробе гормон содержится в высокой-концентрации, то разведение меченого гормона окажется выше, а радиоактивность комплекса гормон — антитело соответственно ниже по сравнению с пробой, где данный гормон присутствует в более низкой концентрации. Используя известные концентрации гормона, строят стандартную кривую, с помощью которой непосредственно определяют концентрацию-гормона в исследуемой пробе. [c.318]

Экстракт после обработки ультразвуком Осаждение сульфатом аммония и диализ Фракции 49—70 Фракции 42—48 [c.14]

Обессоливание (сефадекс G-25), осаждение сульфатом аммония, хроматография на агарозе (Bio-Gel i4-0,5m). в присутствии сульфата аммония [c.16]

Исходный препарат фермента получали из обработанной толуолом ткани электрического угря путем экстракции и последующего дробного осаждения сульфатом аммония [71]. Фрак- [c.23]

Получение. Водная экстракция из ацетонового порошка поджелудочной железы, свиньи, очистка на алюминиевом геле,, осаждение сульфатом аммония,. диализ и лиофильная сушка. М. м. 25 000—30 000. , [c.205]

Получение и состав. Водная экстракция из селезенки лошади, осаждение сульфатом аммония и последующая двухкратная перекристаллизация. [c.414]

Рис. 6.13. Фракционирование на сефадексе, 0-150 экстракта бычьей селезенки после осаждения сульфатом аммония [47].

Белки, осажденные сульфатом аммония, почти не денатурируются после удаления соли из белкового осадка (диализом через целлофановую мембрану) его растворяют и используют для различных целей. На этом принципе основано приготовление некоторых видов концентрированных лечебных сывороток и нротивокоревого у-глобулина. [c.184]

Освободить белок от полибуфера можно осаждением сульфатом аммония или гель-фильтрацией на сефадексе G-75 (для белков с Л/ > 25 ООО). [c.336]

Фактор элонгации EF-1 из ретикулоцитов кролика после предварительного фракционирования суиернатанта осаждением сульфатом аммоння очищали на колонке гепарин-сефарозы сначала в статическом режиме. Элюцию вели 0,25 М раствором КС1 в 0,02 М Трис-НС1 (pH 7,5) с 2 мМ -меркаптоэтанола. Очистку на гепарин- [c.423]

Смит II соавторы с помощью аффинной хроматографии очищали рецептор прогестерона человека. Содержание рецептора в матке составляет лишь 0,002% суммарного белка, и оп весьма лабилен. В качестве лиганда использовали 11-дезоксикортикостерон. Гормон сажали на Br N-активнрованную сефарозу 41 в виде конъюгата с бычьим сывороточным альбумином. Полученный таким образом аффинный сорбент инкубировали 18 ч с частично очищенным цитозолем матки, промывали 0,4 М КС1 и элюировали мкМ раствором меченного тритием прогестерона. Рецептор выходил в комплексе с гормоном. Операция обеспечивала очистку в 10 ООО раз. Вместе с предварительной 6-кратной очисткой цитозоля осаждением сульфатом аммония это позволило авторам получить гомогенный препарат рецептора [Smith et al., 1981). [c.434]

После добавления сульфата аммония иногда выпадает темный вязкий осадок, который сильно прилипает к стенкам стеклянного стакана. Рекомендуется осаждение сульфатом аммония проводить прямо в центрифужном стакане раствор сульфата аммония добавляют по каплям из делительной воронки, а содержимое стакана при этом постоянно встряхивают. Смесь центрифугируют 20 мин после 10 мин инкубации. Осадок растворяют в 16 мл 0,1 М фосфатного буфера (pH 7,4), содержащего 1,5%-ный холат натрия. Снова добавляют насыщенный сульфат аммония до появления легкой мути. Через 30 мин смесь центрифугируют 20 мин, осадок отбрасывают, а супернатант насыщают сульфатом аммония до 36%. Через 10 мин смесь центрифугируют 20 мин. Осадок растворяют в 12 мл 0,1 М фосфатного буфера (pH 7,4), содержащего 1%-ный твин-80. К раствору добавляют насыщенный сульфат аммония до появления легкой мути, осадок отделяют центрифугированием 20 мин, а к супернатанту добавляют насыщенный суль- [c.433]

Для фракционирования экстрагированных белков можно применять также осаждение сульфатом аммония. Жубер [58] выделил фракцию (11 12) S из подсолнечника осаждением сульфатом аммония при насыщении 22—30 % и фракцию альбумина при насыщении от 40 до 80 %. Симард и Буле [107] предложили метод фракционирования посредством фракционного растворения для белков сои, конских бобов и рапса. Метод состоит в осаждении сульфатом аммония при 90 %-ном насыщении суммарных белков, экстрагированных раствором (NH4j2S04 при 57,5 %-ном насыщении, а затем в последовательном экстрагировании из полученного осадка растворами сульфата аммония уменьшающихся концентраций. У конских бобов предпочтительные зоны растворимости фракций 7S и 11S соответственно 85—75 %-ного и 70—65 %-ного насыщения, а для глобулинов сои — соответственно 90—75 %-ного и 65—55 %-ного насыщения. Наконец, зона растворимости фракции 12S белков рапса располагается между 35 и 10 %, а зона растворимости фракции альбумина 2S распадается на две соответственно 60— 35 %-ного и 20—О %-ного насыщения. [c.153]

Вместо последовательного экстрагирования можно полностью перевести в растворимую форму весь набор белков клейковины до разделения их на отдельные группы. Так, Орт и Бу-шук [142] солюбилизировали 98 % белков клейковины в смеси УМЦ — 0,1М уксусной кислоты, ЗМ мочевины, 0,01М цетилтри-метиламмоний бромида. Затем этот раствор титровали этанолом до конечной концентрации 70 % и подводили pH до 6,4, что позволяло отделить глиадины, которые оставались растворимыми, от глютенинов, нерастворимых в этой среде. Их можно также разделять методом гель-фильтрации [78]. Предложен метод [175] получения из муки очищенных глютенинов последовательными осаждениями сульфатом аммония. [c.179]

Как известно, растворимость многих биополимеров уменьшается в присутствии больших количеств неорганических солей. На этом свойстве основано, например, широко распространенное в химии белка фракционированное осаждение сульфатом аммония. Этот реагент может служить осадителем и для полисахаридов. Примером служит фракционирование с помощью сульфата аммония смеси полисахаридов, извлекаемых водой из ячменной муки . Фракционирование полисахаридов растворами солей используется не очень часто, хотя является, по-видимому, довольно перспективным, ибо соли, ныгывакщие разрыв межмолекулярных водородных связей, должны вызывать меньшее соосаждение, чем органические растворители. [c.484]

Talaromy es emersoni Осаждение сульфатом аммония, гель-фильтрация через Сефадекс О-150, хроматография на ДЕАЕ-сефа-дексе, препаративный электрофорез Четыре эндоглюканазы с одинаковой специфичностью, активностью, отличающиеся р1, Мг, содержанием углеводов [14] [c.122]

Осаждение сульфатом аммония, гель-фильтрация на Сефакриле 8-200 [c.124]

Фракционное осаждение сульфатом аммония, аффинная хроматография на порошковой целлюлозе, хроматография на ДЕАЕ-сефадексе, сефакриле 3-200 [c.124]

Экстракт ацетонового поро- шка DEAE-целлюлоза ОЕАЕ-сефадекс Осаждение сульфатом аммония [c.20]

Действительно, заведомо исключая расположение спин-меток в активном центре антитела, можно прийти к выводу, что относительно подвижное состояние спин-меток в преципитате антиген — антитело может сохраняться лишь при отсутствии сильной дегидратации антител за счет межмолекулярных взаимодействий. Следовательно, в отличие от у-глобулина, осажденного сульфатом аммония, специфический преципитат антиген — антитело в соответствии с альтернационной теорией имеет микроячеистую структуру. [c.173]

Получение. Экстракция фермента из сердечной мышцы свиньи деминерй ли-эованной водой, обработка кальций-фосфатным шяем, двукратное осаждение сульфатом аммония и ацетоном, диализ против фосфатного буферного растврра -(pH — 7,5) и перекристаллизация. М, м. около 135 ООО. [c.201]

Смотреть страницы где упоминается термин Осаждение сульфатом аммония: [c.233] [c.304] [c.413] [c.449] [c.430] [c.154] [c.162] [c.199] [c.427] [c.122] [c.122] [c.122] [c.122] [c.122] [c.123] [c.123] [c.123] [c.124] [c.128] [c.234] [c.168] [c.13] [c.31] [c.213] [c.288] [c.330]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология