Контрастирование образца для электронной микроскопии

Вторым способом является негативное контрастирование. В данном случае образец помещается в контрастирующий раствор, содержащий тяжелые атомы, например в раствор уранилацетата. Рассеивающие тяжелые атомы заполняют все пространство вокруг нерассеивающей макромолекулы, и поэтому на их фоне становится возможным наблюдение макромолекулы в электронном микроскопе (рис. 10.1, Б). К сожалению, это наблюдение нельзя назвать прямым, так как реально получают изображение не самой макромолекулы, а всей той рассеивающей области, где ее нет. [c.178]

Второй тип контраста — амплитудный контраст определяется степенью взаимодействия различных участков образца с проходящими электронами. Амплитудный контраст в просвечивающей электронной микроскопии щироко используют при исследовании различных элементов внутренней структуры твердофазных материалов достигаемое при этом разрещение заметно меньше, чем при фазовом контрасте, и составляет около 1 нм. Взаимодействие электронов с веществом обусловлено различиями как в элементном составе разных участков облучаемой области (это позволяет исследовать размеры и форму составляющих образец наночастиц, включения другой фазы в наблюдаемые частицы или вариации элементного состава без образования вторых фаз), так и в ориентации кристаллических фрагментов относительно направления падающего электронного пучка. Это позволяет изучать малоугловые границы внутри зерен (контрастируя их изменением ориентации образца), а также различать механически напряженные участки частиц, что в свою очередь позволяет непосредственно наблюдать (по окружающей их области искаженной структуры) протяженные дефекты кристаллического строения вещества, такие как дислокации или дефекты упаковки. Контраст на электронномикроскопическом изображении также может быть связан с интерференционными эффектами, например, с широкими полосами равной толщины на клиновидных краях зерен образца или полосами Френеля по границам зерен. Амплитудный контраст (как и фазовый) существенно зависит от положения фокуса объективной линзы, при точном фокусе он минимален, а при удалении от этого положения наблюдается контрастирование изображения с [c.247]

РИС. 20.13. В электронном микроскопе образец помещают на угольную пленку, поддерживаемую медной сеточкой (медь обеспечивает хороший электрический и термический контакт препарата с держателем образца). Верхняя часть рисунка иллюстрирует метод негативного контрастирования. [c.549]

Электронный микроскоп в отличие от светового позволяет исследовать только неживые высушенные объекты, так как образец находится в условиях высокого вакуума и интенсивного электронного облучения. Принцип возникновения изображения в электронном микроскопе иной, чем в световом. Как уже отмечалось, в световом микроскопе контраст обусловлен избирательным поглощением света различных длин волн элементами структуры объекта (адсорбционный контраст) или изменением фазы световой волны при прохождении света через объект (фазовый контраст), тогда как в электронном микроскопе контраст вызван отклонением ускоренных электронов тяжелыми атомами, входящими в состав тонкопленочного объекта (или искусственно внесенными в него при химическом контрастировании). Такой контраст называют дифракционным. Абсорбционный контраст в электронном микроскопе — явление нежелательное (поглощение энергии электронов приводит к хроматической аберрации, а часто и к тепловому разрушению образца), и с ним приходится бороться, исследуя объект в виде ультратонких (30—100 нм) срезов и пленок. [c.96]

Метод электронной микроскопии позволяет непосредственно наблюдать размер и форму макромолекул. Для получения контраста между молекулой и пленкой-подложкой образец обрабатывают тяжелыми металлами. Контрастирование сильно ограничивает разрешающую способность. Если образец обладает симметрией вращения или трансляционной симметрией, существующие способы усреднения значительно улучшают качество электронно-микроскопического изображения. [c.220]

В предыдущих разделах настоящей главы рассмотрены методы определения количества вируса, основанные на его биологических свойствах способности размножаться в культуре клеток и куриных эмбрионах, а также агглютинировать эритроциты. Очевидно, что эти методы не пригодны для определения числа физических частиц вируса. Соотношение между единицами гемагглютинации или инфекционности и числом вирусных частиц в очень большой степени зависит от штамма вируса, и поэтому часто возникает необходимость определения числа вирусных частиц с помощью электронной микроскопии. Наиболее распространенный метод подсчета вирусных частиц состоит в том, что образец исследуемого вируса смешивают с равным объемом суспензии шариков латекса с известной концентрацией эти шарики имеют примерно такой же диаметр (около 100 нм), что и вирионы вируса гриппа. Полученную смесь после негативного контрастирования (например, фосфорно-вольфрамовой кислотой) наносят на сеточки для электронной микроскопии и сравнивают число шариков латекса и вирусных частиц в одних и тех же полях (рис. 6.4). Зная концентрацию шариков латекса в исходной смеси, нетрудно подсчитать концентрацию вирусных частиц [15]. [c.181]

Для разделения в АБС-пластиках матрицы и привитого сополимера применяют 1%-ный водный раствор 0504. Контрастирование проводят следующим образом. В пробирку с 1%-ным раствором латекса (20 мл) добавляют 1 каплю 1 %-ного водного раствора 0з04- По истечении 3 ч каплю латекса наносят на предметную сетку. После высушивания на воздухе образец помещают в электронный микроскоп и фотографируют наиболее характерные участки объекта. [c.65]

РИС. 10.2. Изображение образцов гликогена печени в зависимости от способа их обработки для электронной микроскопии. А. Негативное контрастирование. Б. Образец высушен на воздухе и за-тем оттенен. В. Образец высушен фильтрацией через агар и затем оттенен. Г. Образец заморожен, лиофильно высушен и затем оттенен. Д. Замороженный образец лиофильно высушен, перед оттене-нием выдержан в водных парах. Е. Гликоген в тонком срезе ткани печени. (Микрофотографии любезно предоставлены Келленбергером, Виллигером и Кистлером.) [c.181]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология