Негативное контрастирование

Рис. 2.18. А. Строение вируса табачной мозаики (ВТМ) видна спиральная симметрия капсида. Показана только часть палочковидного вируса. Рисунок построен на основе результатов рентгено-структурного анализа, биохими -ческих данных и электронно-микроскопических исследований. Б. Электронная микрофотография вируса табачной мозаики, полученная методом негативного контрастирования (х800 ООО). Капсид (оболочка) образован 2130 идентичными белковыми капсомерами. В. Растение табака, инфицированное ВТМ. Обратите внимание на характерные пятна в тех местах, где ткань листа отмирает.

Рис. 2.17. А. Икосаэдр. Б. Электронная микрофотография вируса простого герпеса, полученная методом негативного контрастирования (окрашивается не сам препарат, а его фон). Обратите внимание, насколько отчетливо видны детали строения вируса. Индивидуальные капсомеры просматриваются как раз там, где между ними проник краситель.

Рис. 19-35. Плазматическая мембрана протопласта табака. Протопласт, иммобилизованный иа сеточке для электронной микроскопии, вскрыли, отмыли его внутреннее содержимое н подвергли препарат негативному контрастированию для выявления структуры внутренней стороны мембраны. На снимке хорошо видим кортикальные мнкротрубочки и многочисленные окаймленные ямки. (С любезного разрешения С. Роч ке.)

Рис. 8.2. Электронная микрофотография ферритина, полученная методом негативного контрастирования с помощью натриевой соли фосфорномолибденовой кислоты, любезно предоставленная Д. X. Хаггисом. Железосодержащие ядра ферритина окружены белковыми оболочками, которые кажутся светлыми на фоне негативной окраски (X 500 ООО).

Форма молекулы может быть также определена путем измерения вязкости, а также методом двойного лучепреломления в потоке. С помощью электронной микроскопии возможно прямое определение формы молекулы. При этом пользуются методом негативного контрастирования при применении тетраоксида осмия или других тяжелых металлов в качестве контрастирующих средств. [c.363]

Дальнейшее развитие техники электронной микроскопии, сопровождавшееся улучшением разрешениями в частности применение нового метода, основанного на негативном контрастировании мембранных препаратов, позволило выявить морфологически более сложную картину структурной организации биологических мембран. Оказалось, что во многих случаях, и особенно на микрофотографиях внутриклеточных органелл, мембрана выглядит не как сплошная трехслойная линия, а как гранулярная структура, имеющая разрывы (или поры) и состоящая из отдельных глобулярных частиц. [c.582]

Капсулы можно увидеть с помощью светового микроскопа, если добавить к препарату такие красители, как нигрозин, конго красный или китайскую тушь, которые в капсулу не проникают. Получается негативное контрастирование светлая капсула выделяется на темном фоне (рис. 1.7). Более тонкие капсулы пневмококков становятся видимыми при добавлении гомологичной антисыворотки при этом происходит [c.26]

Негативное контрастирование. Оно заключается в том, что срез образца обрабатывают растворами солей тяжелых металлов соли подбирают таким образом, чтобы они не присоединялись к исследуемым элементам структуры, а создавали темный фон. На этом фоне располагаются более светлые частицы исследуемого объекта, что позволяет четче выявить структурные особенности. Метод негативного контрастирования применяют для изучения синтетических полимеров и биополимеров. [c.189]

Рис. 2.19. А. Строение бактериофага Т2. Б. Электронная микрофотография бактериофага, полученная методом негативного контрастирования.

Пример, для изучения микроворсинок, расположенных на поверхности клеток (рис. 2-20, разд. 2-19)] и негативного контрастирования [для выявления крупных периферических белков, например, Р1-АТР-азы внутренней митохондриальной мембраны (гл. 17)]. [c.345]

Рис. 45. Правильный слой белковых гексагональных структур на внешней стороне клеточной стенки спирилл. Подобные 8-слои найдены и у многих грамположительных бактерий, однако они легко теряют регулярную структуру при приготовлении препаратов (негативное контрастирование, увел. 200 000 )

Частицы небольшого размера, в том числе макромолекулы, выявляют методом напыления. Для этого металл —хром или платину — испаряют в вакууме и напыляют под определенным углом на поверхность исследуемого образца. Так можно увидеть отдельные молекулы ДНК, хотя и при сравнительно низкой разрешающей способности. Собственно, видны не сами молекулы, а только их тени , которые в 2—3 раза шире. При исследовании белков часто применяют метод негативного контрастирования. Суть метода состоит в следующем тонкий слой раствора, содержащего исследуемые белки и электроноплотное вещество (например, фосфоволь-фрамовокислый натрий в концентрации 1%), наносят на углеродную пленку-подложку и высушивают. Образуется однородный электроноплотный слой, характеризующийся тем, что в местах локализации молекул белка отсутствует соль фосфовольфрамовой кислоты отсюда и термин негативный контраст . [c.20]

РИС. 2-23. А. Двойная спираль ДНК В-форма. (Arnott S., Hukins D. W. L.. JMB, 81, 93—105, 1975.) Б. Электронная микрофотография молекулы ДНК бактериального вируса (бактериофаг Т7) в момент ее репликации. Вирусная ДНК представляет собой длинный ( 14 мкм) дуплексный стержень, содержащий около 40 000 пар оснований. Виден небольшой репликативный глаз — участок, где происходит удвоение ДНК. Синтез ДНК начинается в особой точке (точке инициации), расположенной иа расстоянии, равном 17% длины молекулы, от одного из концов дуплекса. Окраска уранилацетатом негативное контрастирование. (С любезного разрешения Т. Wolfson [c.131]

Микрофотография концевой части бактериального жгутика внутри чехла (негативное контрастирование фосфовольфрамовой кислотой). Жгутик принадлежит неидентифи-цированной бактерии, обнаруженной в пруду. Назначение неплотно прилегающего чехла неясно. (С любезного разрешения F. D. Williams.) [c.282]

Уже давно было показано что во всяком случае эукариотические рибосомы прикрепляются к мембране своей большой (60S) субчастицей. По-видимому, существует специальный участок на 60S субчастице, который имеет сродство к мембране эндоплазматического ретикулума, и, таким образом, все рибосомы прикрепляются к мембране строго определенной точкой, в одной и той же ориентации. Эта ориентация такова, что ось, соединяющая большую субчастицу и малую субчастицу, приблизительно параллельна поверхности мембраны (рис. 126). Данные электронной микроскопии негативно контрастированных эукариотических рибосом указывают, что длинная ось малой субчастицы должна быть приблизительно параллельна поверхности мембраны, и заставляют предполагать, что прикрепление рибосомы к мембране должно, скорее всего, иметь место со стороны боковых выступов субъединиц (эквивалентных Ll-гребню 50S субчастицы и платформе 30S субчастицы Е. соИ, см. Б.1.2) таким образом, район предполагаемого кармана для тРНК (см. рис. 86) и стержень большой субчастицы (см. B.L3), по-видимому, должны находиться на стороне, обращенной от мембраны. [c.276]

Рис. 9. Микрофотография срезов клеток мицелия фруктозного варианта A t. roseoflavus var. roseofungini (ув. 75000) а — гифы культуры на СР-1 с глюкозой б — на овсяном агаре в — культура на СР-1 с глюкозой вокруг клеток нидно большое количество трубочек, лежащих в различных плоскостях г — тонкая структура отдельных трубочек при негативном контрастировании 0,5% раствором уранилацетата (ув. 150 000) — клеточная стенка ЦМ — цитоплазматическая мембрана М — мембранные образова- иия ОГ — осмиефильные гранулы Н — нуклеоид В — вакуоль Т — трубочки (Черни и др., 1972)

Количество и размер электронно-светлых зон, выявляемых на ультратонких срезах (рис. 20, 6 и аморфных гранул, выявляемых на сколах, значительно увеличиваются при дальнейшем культивировании мицелия и достигают максимума на третьи сутки. В этот период, когда содержание антибиотика достигает максимального значения, наблюдается заметное просветление цитоплазмы и интенсивное развитие мембранного аппарата, окружающего многочисленные гранулы (рис. 20, б). Размеры гранул настолько велики, что в некоторых случаях они заполняют большую часть пространства гифы между двумя смежными септами. Аналогичные по форме п размерам гранулы наблюдаются и на негативно контрастированных препаратах (рис. 20, е). На последних этапах культивирования (7— 8 сутки) цитоплазма полностью просветляется, а содержимое клетки представлено скоплениями мембран и многочисленными крупными гранулами. Электронно-микроскопические исследования показали, что появление гранул, увеличение их числа и размеров коррелирует с содержанием антибиотика в культуре. Обнаружение у гранул люминесценции, характерной для флавофунгина, было прямым доказательством их природы (рис. 20, г). [c.175]

Препараты для ЭМВ готовят методом негативного контрастирования. Для этого смешивают равные объемы вирусной суспензии и 1%-го раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты ( негативная краска ) на формваруглеродной подложке. Краска окружает вирусную частицу и контрастирует наружную оболочку вириона, а иногда проникает внутрь капсида, в результате чего получают профильное изображение наружной оболочки. Для выявления вирусов в биологическом материале применяют также метод ультратонких срезов. [c.267]

Некоторые бактерии Strepto o us, Klebsiella и др.) образуют капсулу - слизистое образование, прочно связанное с клеточной стенкой, имеющее четко очерченные внешние границы. Капсула различима в мазках-отпечатках. В чистых культурах бактерий капсула образуется реже. Она выявляется при специальных методах окраски, создающих негативное контрастирование вещества капсулы. Например, капсулы можно увидеть с помощью светового микроскопа, если добавить к препарату красители (нигрозин, китайская тушь). [c.8]

Комплексное применение совокупности новых препаративных методов ЭМ исследования полимеров (механическая и ультразвуковая диспергация, контрастирование продуктов дробления, использование метода реплик, ультратонких срезов, отражательной и сканирующей электронной микроскопии и т. п.) создали условия для выяснения характера НМС целлюлозы [6, 7]. Оказалось, что если диспергировать в жидкости пеболь-щую навеску волокна, то удается наблюдать распад исходного волокна на удлиненные образования, так как при дроблении полимер разрушается в первую очередь по границам структурных образований. Поперечные размеры продуктов дробления заключены в достаточно широком интервале (рис. П.1,с). Малоконтрастность снимков, не позволяющая обнаружить никаких более тонких деталей, обусловлена тем, что полимерные объекты состоят из слаборассеивающих элементов (в основном углерода), а соседние области мало различаются по толщине. Поэтому препараты для прямого исследования необходимо контрастировать , создавая неравномерное распределение посторонних веществ, содержащих тяжелые атомы. Для этой цели применяют методы косого напыления металлов в вакууме негативного контрастирования, а также пропитку за счет диффузии паров 0з04 или иода [8, гл. 9]. [c.87]

С—неконтрастированные, высаженные на микросетку б —после негативного контрастирования с помощью ФВК а —кривые фотометрирования ЭМ. [c.88]

Большинство исследователей, к сожалению, к этому вопросу редко обращаются заново, хотя разрешающая способность электронных микроскопов достигла предела (2 А), а при препарировании возможно напылять бесструктурные конденсаты [ 2], использовать негативное контрастирование [9] весьма совершенной стала техника микротомирования, вплоть до возможного получения срезов с замороженных препаратов и т. д. [c.88]

Тщательный анализ причин возникновения зернистости на снимках микрофибрилл целлюлозы проведен в работе [52]. В микроскопе с высоким разрешением исследовали ультратон-кие срезы, подвергнутые негативному контрастированию. Автор [c.104]

Ван<ная особенность полимеров, к-рую необходимо учитывать при интерпретации электронномикроскоиич. снимков, полученных с использованием прямых методов препарирования,— незначительная разница плотностей кристаллич. и аморфных областей. Следствие этого — чрезвычайно малый контраст фотографич. снимков иолимерных образцов, В ряде случаев контраст удается повысить при косом напылении на поверхность препарата слоя тяжелого металла. Более эффективен, особенно для выявления мелких, плотно уложенных структур, метод негативного контрастирования. Па препарат, предварительно помещенный на пленку-подлон ку или дырчатую пленку, наносят р-р какого-либо соединения, содержап его атомы тяжелых металлов (нанр., фосфорновольфрамовой к-ты, уранил-ацетата). Эти соединения не должны взаимодействовать с изучаемым полимером. После удаления растворителя на исследуемом образце остается тонкий слой (в несколько десятков А) осадка, причем концентрация р-ра подбирается такой, чтобы осадок заполнил в основном промежутки между структурными образованиями. После обработки объект будет выглядеть светлым на темном фоне, т. к. рассеивающая способность атомов осадка несравнимо больше, чем у полимера. Основу контраста изображения в этом случае будет составлять [c.475]

Морфология бактериофагов. Строение бактериофагов в основном изучали на примере фагов серии Т Es heri hia oli. Колифаг Т2 состоит из полиэдрической головки длиной 100 нм и отростка, или хвоста , примерно такой же длины. Поэтому говорят о составных вирусах (табл. 4.1). Головка состоит из капсомеров и содержит внутри ДНК. Количество белка и ДНК примерно одинаково. Отросток фага Т2 имеет сложное строение. В нем можно различить не менее трех частей полый стержень, окружающий его сократимый чехол и находящуюся на дистальном конце стержня базальную пластинку с шипами и нитями (от последних зависит специфическая адсорбция на клетке-хозяине).ГНа электронных микрофотографиях, полученных при негативном контрастировании, можно видеть фаговые частицы в двух состояниях у одних частиц головка очень резко выделяется на электроноплотном фоне и чехол отростка растянут, у других головка мало отличается от фона по плотности и чехол находится в сокращенном состоянии. Это схематически изображено на рис. 4,7. Первое состояние А) характерно для активного фага, в головке которого заключена ДНК, второе (Б)-для фага, который инъецировал свою ДНК в бактериальную клетк) [c.142]

Хосака и Айзава [129], изучая тетрагональный вирус, установили, что при негативном контрастировании в тельце вируса обнаруживаются две концентрические икосаэдрические оболочки толщиной 45—69 ммк. Каждая из вершин кристаллической структуры имеет одно более плотное тельце. Тельца внешней оболочки представляют собой диски шириной 200 А, а внутренней — только 50 А. Из вершин икосаэдров торчат телескопические выступы длиной более половины радиуса вирусного тельца. Эти структуры более отчетливо видны при негативном контрастировании. [c.131]

У некоторых бактерий слизистые или клейкие секреты образуют капсулы капсулы хорошо видны после негативного контрастирования (когда окрашивают не препарат, а фон). Иногда эти секреты служат для формирования колоний из одиночных бактерий. С помощью секретов бактерии приобретают способность прилипать к различным поверхностям, таким как зубы, частицы ила или скалы. Кроме того, капсулы обеспечивают дополнительную защиту для бактериальной клетки. Так, например, капсулированные штаммы пневмококков свободно размножаются в организме человека, вызывая воспаление легких, тогда как некапсулированные штаммы легко атакуются и разрушаются фагоцитами и поэтому совершенно безвредны. [c.25]

Каждая митохондрия окружена оболочкой, состоящей из двух мембран. Наружную мембрану отделяет от внутренней небольшое расстояние — внутримембранное пространство. Внутренняя мембрана образует многочисленные гребневидные складки, так называемые кристы (рис. 9.12). Кристы существенно увеличивают поверхность внутренней мембраны, обеспечивая место для размещения компонентов дыхательной цепи. Через внутреннюю митохондриальную мембрану овуществляется активный транспорт АДФ и АТФ. Метод негативного контрастирования, при котором окрашенными оказываются не сами структуры, а пространство вокруг них (рис. 9.12, Д), позволил выявить присутствие особых элементарных частиц на той стороне внутренней митохондриальной мембра- [c.356]

Методом негативного контрастирования фосфорно-вольфрамовой кислотой и замораживания с разломом (freeze-et hing) выявлены различия в ультраструктуре наружной и внутренней поверхностей цитоплазматической мембраны. Однако ультраструктура и размеры субъединиц, обнаруженных с помощью этих двух методов, неодинаковы, и поэтому по- тученные при этом данные слабо сопоставимы. Кроме того, при использовании метода замораживания с разломом не всегда можно однозначно решить, в каком месте структуры произошел разлом и, следовательно, с какой поверхностью мембраны мы имеем дело (см. ниже.). [c.26]

Молекулярная биология клетки Том5 (1987) -- [ c.176 ]

Основы биохимии Т 1,2,3 (1985) -- [ c.345 ]

Биология Том3 Изд3 (2004) -- [ c.356 , c.358 ]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.188 ]

Биофизическая химия Т.2 (1984) -- [ c.178 , c.181 , c.182 ]

Вирусология Методы (1988) -- [ c.146 ]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.188 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология