Нуклеотидная последовательность лигандами

Промотор гена глутаминсинтетазы замечателен не только те.м, что он регулируется с участием минорной сигма-субъединицы и нуклеотидных последовательностей, удаленных на большие расстояния от старта транскрипции, но и тем, что действие регуляторного белка. модулируется не путе.м связывания лигандов-эффекторов, которыми могли бы быть глута.мин или глутаминовая кислота, а путем хи.мической модификации — фосфорилирования и дефосфо-рилирования NR,,— осуществляемой несколькими ферментами, реагирующими на обеспеченность клетки источниками азота. [c.153]

При описании экспериментальных данных с помощью модели с исключением мест связывания можно варьировать лишь один подгоночный параметр — константу связывания /с. Однако кажется маловероятным, чтобы больщинство веществ, связывающихся с ДНК, было совершенно нечувствительно к последовательности оснований. Прекрасное согласие с моделью экспериментальных данных по связыванию эгидия с ДНК означает, что влияние последовательности в основном самоусредняется точно так же, как это имеет место в случае оптических свойств гетерополимера. Поэтому исследование влияния нуклеотидной последовательности на связывание лигандов необходимо проводить на коротких олигонуклеотидах с известной последовательностью. [c.370]

Мутационная замена Asn Ala в С-концевой части интеина блокирует последнюю стадию сплайсинга рекомбинантного белка (см. рис. 39), при конструировании которого нуклеотидная последовательность целевого белка 1 была объединена в коммерческом экспрессирующем векторе в одной рамке считывания с последовательностями нуклеотидов мутантного интеина и хитин-связыва-ющего домена ( BD) бактериальной хитиназы. Последний в рекомбинантном белке выполняет роль лиганда, взаимодействующего с иммобилизованным рецептором (хитином), что необходимо для очистки белка с помощью аффинной хроматографии после связывания хроматографическим носителем целевой белок вырезается из полипептида с помощью добавленного тиола (R-HS) в реакции межмолекулярной трансэтерификации, и образовавшееся производное может быть далее лигировано с пептидом, содержащим остаток a- ys. Таким образом, процесс EPL объединяет в себе две стадии тиолиз с участием интеина и спонтанное химическое лигирование нативных белков [c.314]

Каковы структурные особенности рецепторов и их модифицированных, связанных с лигандами форм и каким образом рецепторы узнают соответствующие HRE Другой важнейший вопрос- как связывание лиганд-рецепторного комплекса с HRE влияет на транскритщю Современные, хотя и неполные, представления об этом базируются на нескольких экспериментальных подходах, которые сформировались благодаря возможности получать клонированные и секвенированные кДНК, кодирующие рецепторы. Исходя из нуклеотидных последовательностей соответствующих секвенированных кДНК была определена аминокислотная последовательность рецепторов. Их сравнение выявило оди- [c.73]

Анализ аминокислотных последовательностей рецепторов эстрогенов и глюкокортикоидов, установленных по данным о нуклеотидных последовательностях соответствующих кДНК, показал, что вблизи центра каждого рецептора находится высококонсервативный короткий участок (область С на рис. 8.48). По данным скрининга продуктов расщепления геномной ДНК при помощи олигонуклео-тидных зондов, синтезированных на основе этой консервативной последовательности, подобная область характерна для большого семейства генов, очевидно кодирующих другие рецепторы. Неудивительно, что с помощью тех же самых зондов были выделены кДНК еще некоторых рецепторов это указывает на важность данного домена для функционирования рецепторов. Белки, кодируемые некоторыми из этих кДНК, только предположительно можно отнести к рецепторам, поскольку их лиганды или HRE неизвестны. Отдельные гены рецепторов стероидов клонированы, частично секвенированы и отнесены к соответствующим хромосомам (рис. 8.48). [c.74]

Для более тонкой структурной реорганизации гена (результатом которой является замена одной или нескольких аминокислот в кодируемом белке) требуются специальные методы. Сначала химическим путем синтезируют небольшую молекулу ДНК, содфжащую измененную часть нуклеотидной последовательности данного гена. Затем этот синтетический олигонуклеотид гибридизуют с одноцепочечной плазмидой ДНК, в составе которой присутствует последовательность ДНК, подлежащая изменению гибридизацию ведут в условиях, допускающих спаривание не вполне подходящих пфтнеров (рис. 5-87). Синтетический олигонуклеотид становится затравкой для ДНК-полимфазы, осуществляющей синтез ДНК, в результате которого образуется молекула, содфжащая ген с встроенной в него измененной последовательностью. После этого модифицированный ген включают в экспрессирующий вектор, что позволяет получить измененный белок в достаточном количестве для детального изучения. Заменяя таким путем те или иные аминокислоты в молекуле интересующего нас белка, можно выяснить, какие именно части полипептидной цепи ответственны за такие фундаментальные процессы, как свертывание белка, взаимодействие белка с лигандом или ферментативный катализ. [c.337]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология