Антитело а цельной сыворотке, получени

Определяют титр антител. Концентрированную IgG-фракцию можно добавить к сыворотке для увеличения отношения антитела общий белок. Альтернативный путь — приготовить цельную сыворотку как фракцию IgG необходимой концентрации. Преимущество такого подхода заключается в еще большем увеличении отношения антитела белок при уменьшении количества добавляемого белка в системе и уменьшении фона. Это также позволяет стандартизовать концентрацию антител в последовательно приготавливаемых сериях антител одной и той же специфичности. Целесообразно иметь в запасе некоторое количество антител в концентрации выше требуемой для улучшения сывороток. Антисыворотка, предназначенная для реакции преципитации, должна содержать не менее 1—2 мг специфических антител в 1 мл, а еще лучше— 5—10 мг/мл для уменьшения количества добавляемого белка. Необходимо проверить чистоту IgG-фракции полученных антител, и если она удовлетворительна, то определить общий белок по оптической плотности и установить отношение антитела общий IgG. [c.112]

Такие антисыворотки используются для изучения кампонен-тов смесн антигенов, а также как контрольные реагенты при определении индивидуальных молекул. При получении таких антиоывороток важно достичь максимального разнообразия иммунного ответа и такого баланса титров антител с разной специфичностью, чтобы при использовании одной концентрации можно было выявить (в ИЭФ или двумерном ИЭФ) многочисленные антигены, составляющие смесь. Применяя в качестве исходного материала экстракт бактерий или паразитов, элюат клеточной мембраны или цельную сыворотку, которые содержат антигены в разной концентрации и с различной иммуногенностью, трудно получить сбалансированную антисыворотку, выявляющую антигены небольшой мол. массы, поскольку преимущественно будут образовываться антитела к большим молекулам. Может возникнуть необходимость в раз- [c.79]

Основная проблема использования цельной сыворотки или плазмы в качестве иммуногена заключается в получении эффективного ответа на а-глобулины. Наилучший подход — электрофоретическое разделение белков сыворотки на горизонтальной пластине агарозного геля. Полос. геля затем можно разрезать поперек и заморозить, и компоненты собирать в ходе оттаивания. После этого можно иммунизировать овец различными фракциями в соответствии с их электрофоретической подвижностью. Можно добавить антитела к отдельным компонентам цельной сыворотки, например компонентам комплемента. На рис. 2.7 приведена электрофоре-грамма хорошо сбалансированной овечьей антисыворотки к белкам сыворотки человека, полученной данным методом. Общая схема иммунизации аналогична той, что р-екомендована для отдельных белков. [c.80]

Ферментативный иммунохроматографический метод. Добавляют 10—20 мкг образца (буферного раствора, сыворотки или цельной крови) к 1 мл ферментного реагента (приготовленного на 0,1 М натрий-фосфатном буфере, pH 7,0 и содержащего 0,2 моль хлорида натрия 0,2—1,0 мг конъюгата [теофиллин — пероксидаза] 100 мг глюкозооксидазы 2 г неиммунных IgG барана). В полученную смесь погружают край индикаторной полоски (4x90 мм), содержащей иммобилизованные антитела против теофиллина ( 30 мкг/см ),и дают растворителю подняться за счет капиллярных сил до противоположного края полоски (на это уходит 10 мин). Переносят полоску в проявитель (приготовленный на 0,01 М натрий-фосфатном буфере, pH 7,0, и содержащий в 1 л 0,02 моль хлорида натрия 0,5 г тритона QS-44 400 мг 4-хлорнафтола 0,05 моль глюкозы 2 г бычьего сывороточного альбумина). Через 5 мин на бумаге появляется голубая окрашенная область в форме ровной полосы или ракеты. Высота окрашенной области пропорциональна концентрации определяемого вещества. Для количественного анализа предварительно строят калибровочную кривую, отражающую зависимость высоты окрашенного фронта от концентрации теофиллина. [c.135]

Воспроизводимость иммунохроматографического метода, как и других твердофазных конкурентных методов, сильно зависит от однородности распределения антител (или антигена) на твердой поверхности. Данные, приведенные в табл. 10-3, показывают, что обычно этот метод обеспечивает равномерное распределение. Стандартное отклонение (S) расстояния миграции, как правило, меньше 1 мм для концентраций, лежащих в диапазоне калибровки. Характеристикой степени однородности служит и коэффициент вариации (У), который в условиях анализа со-< тавляет 5—8% (табл. 10-4). Аналитическое обнаружение теофиллина, растворенного в сыворотке или цельной крови, колеблется в пределах 95—106% и существенно не изменяется при высоком содержании эндогенных веществ, таких, как гемоглобин, триглицериды или билирубин (Zuk et al., 1985). Для оценки достоверности анализа с применением индикаторных полосок сравнили данные, полученные при анализе теофиллина, с результатами EMIT -анализа (рис. 10-20). Между двумя методами наблюдалась отличная корреляция ( /= 1,03л +0,82 г= = 0,98 Sm=l,3 /г=75, где у — результат иммунохроматографи- ческого анализа). [c.158]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология