Индикаторные полоски

Стандартной шкалой для сравнения окраски индикатора служат поперечные полоски акварельной краски, нанесенные выше и ниже индикаторной полоски. Для определения pH индикаторную бумажку опускают в испытуемый раствор и через секунду, вынув ее из раствора, сравнивают окраску индикаторной полоски с окраской полосок стандартной шкалы совпадение окраски индикатора с окраской одной из полосок шкалы укажет на значение pH испытуемого раствора. Значения pH для каждой полоски стандартной шкалы нанесены на прилагаемом к ним ключе . [c.104]

Индикаторные полоски для качественного анализа с внутренним стандартом [c.135]

При определении pH суспензий или слабоокрашенных растворов рекомендуется нанести каплю испытуемой жидкости на индикаторную полоску с помощью стеклянной палочки и сравнивать со шкалой обратную сторону полоски. [c.53]

Основными средствами тестирования воды, водных растворов и других жидких средств являются бумажные индикаторные полоски, индикаторные трубки, таблетки и простейшие устройства для титрования. Однако известны и другие средства. Применяемые процедуры зависят, естественно, от типа средств. [c.218]

Нужная площадь на пластинке сначала локализуется либо по окраске, если она характерна, либо с помощью флуоресценции в ультрафиолетовом свете, либо сравнением с известными соединениями в узкой индикаторной полоске на краю пластинки. [c.61]

Индикаторные полоски помещают в местах возможного попадания паров ртути в воздух на уровне человеческого роста. Если в течение рабочего дня (7—8 ч) бумажки не приобретают розоватого оттенка, содержание паров ртути в воздухе ниже ПДК. [c.126]

Рис. 10-7. Зависимость интенсивности окраски от температуры проявителя. Индикаторные полоски (светлые кружки) и полоски сравнения (темные кружки) инкубировали сначала в образцах мочи, не содержащих морфия, а затем в проявителе в течение 10 мин при указанных температурах. На врезке отношение интенсивностей окраски индикаторной полоски и полоски сравнения (1/К) при инкубации в отрицательных образцах мочи (сплошная линия) и образцах, содержащих морфий (20 мг/л) (прерывистая линия), с последующей инкубацией в проявителе при указанных температурах.

Бумагу сушат в сушильном шкафу при 40—50 °С, после чего нарезают полоски размером, обеспечивающим впитываемость 0,5—5 см воды. Готовые индикаторные полоски имеют бледно-кремовый или слегка розовый цвет. [c.242]

ИФА без разделения компонентов можно сделать гораздо более удобным и, вероятно, более надежным, если все необходимые для анализа реагенты поместить на одной и той же твердой полимерной матрице (например, в виде индикаторной полоски). В этом случае экспериментатору нужно только погрузить полоску в исследуемый раствор на заданное время и затем оценить результат реакции визуально или с помощью прибора. [c.23]

При выполнении анализа по любому из этих двух вариантов на индикаторную полоску наносят до 70 мкл разбавленного образца и регистрируют увеличение флуоресценции за определенный промежуток времени (3—15 мин). Интенсивность флуоресценции растет с увеличением концентрации определяемого лиганда. [c.94]

Методы иммуноферментного анализа с помощью индикаторных полосок полностью удовлетворяют этим требованиям, пригодны для использования вне лаборатории и, что особенно важно, могут применяться с различными хромогенными субстратами. ферментные метки в отличие от флуоресцентных и радиоактивных легко детектировать по продуктам катализируемых ими реакций. Это делают визуально или с помощью простых портативных приборов. Очевидно, что индикаторные полоски — очень удобные матрицы для реагентов, позволяющие упростить обработку образцов и разделение компонентов реакционной смеси. [c.130]

ДОЛЖНЫ требовать от оператора специальной подготовки и тщательных манипуляций. Ниже мы опишем индикаторные полоски для определения морфия с использованием ферментных каналов и новой системы внутреннего стандарта, компенсирующей внешние факторы. [c.136]

Концентрацию антител против пероксидазы подбирают так, чтобы интенсивность окраски полоски сравнения соответствовала интенсивности окраски индикаторной полоски при концентрации определяемого вещества на уровне предела обнаружения. Результаты анализа определяют по отношению интенсивности окраски индикатора (I) к интенсивности окраски полоски сравнения (Н). Если индикаторная полоска окрашена интенсивнее, чем полоска сравнения (1/К>1,0), пробу считают отрицательной, в противном случае (1/Н 1,0) ее считают положи-, тельной. [c.137]

Скорость формирования окраски на индикаторной полоске зависит от содержания иммобилизованных антител и глюкозооксидазы, а его можно регулировать, изменяя концентрации белков при иммобилизаций. Для изучения влияния концентрации антител на интенсивность окраски мы получили индикаторные полоски с различным содержанием антител против морфия при одинаковой активности глюкозооксидазы (4 мМЕ/см ) и использовали эти полоски для анализа отрицательных образцов мочи (рис. 10-3). С увеличением концентрации антител интенсивность [c.137]

На рис. 10-5 показана зависимость интенсивности окраски индикаторной полоски, содержащей антитела против морфия, и полоски сравнения, содержащей антитела против пероксидазы, от концентрации морфия в образце. Интенсивность окраски индикаторной полоски обратно пропорциональна концентрации определяемого вещества в интервале от 5 до 1000 нг/мл. Предел обнаружения равен 5 —10 нг/мл, а при концентрации —70 нг/мл модуляция иммуноспецифического сигнала составляет 50% от максимальной. Как и ожидалось, интенсивность окраски полоски сравнения в исследованном интервале не зависит от концентрации морфия. Откладывая на графике отношение интенсивностей окраски индикатора и полоски сравнения, можно построить совершенно равноценную калибровочную кривую. Легко также заметить, что предел обнаружения, определяемый как концентрация вещества, при которой интенсивности окраски индикатора и полоски сравнения одинаковы, можно регулировать, увеличивая или уменьшая интенсивность окраски полоски сравнения. Таким образом можно изготовить индикаторные полоски [c.139]

Влияние температуры на формирование окраски показано на рис. 10-7. Интенсивность окраски индикаторной полоски и полоски сравнения возрастает при повышении температуры от О до 50 С. Влияние температуры на отношение 1/Н для положительных и отрицательных образцов мочи выражено значительно слабее врезка на рис. 10-7). При этом по отношению 1/К можно четко отличить положительные образцы (1/Н 1,0) от отрицательных (1/К>-1,0) во всем изученном интервале температур. [c.141]

Для индикации паров ртути в воздухе фильтровальную бумагу пропитывают 5 %-ным раствором сульфата меди и затем равномерно опрыскивают из пульверизатора 10 %-ным раствором иодида калия. Затем для обесцвечивания бумагу опускают в 10 %-ный раствор тиосульфата натрия, промывают водой, сушат и нарезают полосками. Индикаторные полоски помещают в месте возможного попадания паров ртути в воздухе на уровне человеческого роста. Если в течение рабочего дня (7—8 ч) бум 1жки не приобретут розового оттенка, то это означает, что содержание паров ртути в воздухе ниже ПДК. [c.84]

Из биохимических тестов часто применяют ниациновую пробу Конно, основанную на способности М. tuber ulosis в отличие от других микобактерий продуцировать ниацин (никотиновую кислоту). Для этого к культуре микобактерий на жидкой питательной среде добавляют 1 мл раствора K Nи 1 мл 5%-го раствора хлорамина Б. При наличии ниацина через несколько минут появляется ярко-желтое окрашивание. Для нейтрализации K N после учета результатов в пробирки добавляют 3 — 5 мл 10%-го раствора гидрокарбоната натрия. Для определения ниацина в экстрактах из агаровых культур используют также бумажные индикаторные полоски. [c.213]

Контроль за функциональным состоянием организма в условиях учебно-тренировочного сбора можно осуществлять с помощью специальных диагностических экспресс-наборов для биохимического анализа мочи и крови. Основаны они на способности определенного вещества (глюкозы, белка, витамина С, кетоновых тел, мочевины, гемоглобина, нитратов и др.) реагировать с нанесенными на индикаторную полоску реактивами и изменять окраску. Обычно наносится капля исследуемой мочи на индикаторную полоску Глюкотеста , Пентафана ,, Меди-теста или других диагностических тестов и через 1 мин ее окраска сравнивается с индикаторной шкалой, прилагаемой к набору. [c.462]

Вычисляют колииндекс с учетом объема воды, впитывающегося в полоску. Если индикаторная полоска впитывает 0,5 см испытуемой воды, то значение колииндекса получают умножением количества подсчитанных колоний на 2000. [c.250]

В идеале поверхность иммунореактивной индикаторной полоски должна быть однородной, не склонной к неспецифическим взаимодействиям и пригодной для контролируемой иммобилизации различных веществ с помощью удобных методов. В качестве матрицы для ковалентной иммобилизации реагентов мы выбрали листы хроматографической целлюлозы, так как они обладают подходящими химическими и физическими характеристиками. Целлюлоза гидрофильна, достаточно однородна, ей несвойственно неспецифическое связывание. Кроме того, она доступна в виде листов разной толщины и плотности. На целлюлозе с помощью целого ряда хорошо отработанных методов (Lilly, 1976) можно иммобилизовать большие количества ферментов и антител. Это позволяет получать индикаторные полоски, обладающие высокой стабильностью и иммунологической активностью. [c.132]

Определение морфия. Индикаторную полоску, содержащую антитела против морфия (10 мкг/см ) и глюкозооксидазу (4 мМЕ/см ), погружают в 2 мл образца (буферного раствора или мочи) и инкубируют 1 мин. Переносят полоску в 2 мл проявителя (содержащего в 1 л 0,1 моль фосфата натрия 0,2 моль хлорида натрия 2 г бычьего сывороточного альбумина, 300 мг 4-хлорнафтола 50 ммоль глюкозы 0,25 г тритона QS-44 300 мг конъюгата пероксидазы с морфием), встряхивают 3—5 с и выдерживают 1() мин. Вынимают полоску, промокают ее для удаления остатков жидкости и измеряют интенсивность окраски с помощью отражательного спектрофотометра марки Ma beth . Следует отметить, что анализ по существу не зависит от объема образца или проявителя важно только, чтобы они полностью покрывали поверхность полоски. Все стадии анализа проводят при комнатной температуре. [c.134]

Ферментативный иммунохроматографический метод. Добавляют 10—20 мкг образца (буферного раствора, сыворотки или цельной крови) к 1 мл ферментного реагента (приготовленного на 0,1 М натрий-фосфатном буфере, pH 7,0 и содержащего 0,2 моль хлорида натрия 0,2—1,0 мг конъюгата [теофиллин — пероксидаза] 100 мг глюкозооксидазы 2 г неиммунных IgG барана). В полученную смесь погружают край индикаторной полоски (4x90 мм), содержащей иммобилизованные антитела против теофиллина ( 30 мкг/см ),и дают растворителю подняться за счет капиллярных сил до противоположного края полоски (на это уходит 10 мин). Переносят полоску в проявитель (приготовленный на 0,01 М натрий-фосфатном буфере, pH 7,0, и содержащий в 1 л 0,02 моль хлорида натрия 0,5 г тритона QS-44 400 мг 4-хлорнафтола 0,05 моль глюкозы 2 г бычьего сывороточного альбумина). Через 5 мин на бумаге появляется голубая окрашенная область в форме ровной полосы или ракеты. Высота окрашенной области пропорциональна концентрации определяемого вещества. Для количественного анализа предварительно строят калибровочную кривую, отражающую зависимость высоты окрашенного фронта от концентрации теофиллина. [c.135]

Как показано на рис. 10-2, активную поверхность индикаторной полоски образуют антитела против морфия, иммобилизованные совместное глюкозооксидазой на подложке из целлюлозы. На первой стадии анализа полоску погружают в жидкий образец. Центры связывания на антителах заполняются молекулами антигена, причем степень заполнения пропорциональна его концентрации. Затем полоску переносят в проявляющий раствор, содержащий конъюгат [пероксидаза—морфий], глюкозу и хромогенный субстрат пероксидазы (4-хлорнафтол).При инкубации с проявителем конъюгат связывается с вакантными центрами на иммобилизованных антителах и катализирует окисление 4-хлорнафтола пероксидом водорода, генерируемым иммобилизованной глюкозооксидазой, с образованием нерастворимого голубого продукта, который остается на поверхности полоски. Через 10 мин визуально или с помощью отражательного спектрофотометра определяют интенсивность окраски. [c.136]

Многие свойства ферментных меток исключительно ценны для иммуноанализа в лабораторных условиях, однако нелабораторные методы предъявляют более жесткие требования. Ферментам присущи ограниченная термостабильность, зависимость катализа от времени и температуры, чувствительность к помехам со стороны образца. В лабораторных методах для преодоления этих недостатков применяют ячейки с регулируемой температурой, точно измеряют время и предварительно обрабатывают образцы. Чтобы упростить использование индикаторных полосок, мы создали систему внутреннего стандарта, в которой компенсируются изменения каталитической активности. Эта система, состоящая из совместно иммобилизованных глюкозооксидазы и антител против пероксидазы, отличается от индикаторной полоски для определения морфия только специфичностьк антител. Поэтому можно ожидать, что цветные реакции на обеих поверхностях в одинаковой степени зависят от температуры активности фермента и от помех со стороны образца. [c.137]

Рис. 10-3. Зависимость интенсивности окраски от концентрации иммобилизованных антител и глюкозооксидазы. Индикаторные полоски с различным содержанием антител на основндм графике) или глюкозооксидазы (на врезке) использовали для анализа отрицательных образцов мочи, как описано в разд. Материалы и методы . Публикуется с разрешения издательства (Litman et al., 1983).

Роль иммобилизованной глюкозооксидазы состоит в том, что она создает высокую локальную концентрацию пероксида водорода и поддерживает реакцию окисления 4-хлорнафтола, катализируемую пероксидазой. Поэтому можно предположить, что скорость формирования окраски на индикаторной полоске будет возрастать с повышением активности глюкозооксидазы, пока локальная концентрация пероксида существенно не превысит Км пероксидазы. При измерении интенсивности окраски индикаторных полосок с различным содержанием глюкозооксида-зы были получены результаты, согласующиеся с этим предположением (рис. 10-3, врезка). Интенсивность окраски увеличивается с ростом активности глюкозооксидазы и выходит на плато при 4 мМЕ/см . [c.138]

Рис. 10-4. Зависимость аналитического сигнала от продолжительности инкубации образцов. Представлена разность интенсивностей окраски индикаторных полосок и полосок сравнения (А, уел. ед.). Индикаторные полоски инкубировали в образцах мочи, содержащих морфий в концентрации 10 (светлые кружки), 100 (темные треугольники) или 500 (темные кружки) мкг/л, а контрольные — в образцах без морфия. Средняя интенсивность окраски отрицательных образцов равна 20,2 уел. ед. Публикуется с разрешения издательства (Litman et al., 1983).

Рнс. 10-6. Зависимость ннтенснвностн окра<жи от продолжительности проявления. Индикаторные полоски нн-кубировалн в отрицательных и положительных (20 мкг морфия/мл) образцах мочи и проявляли при 25 С в течение указанных промежутков времени. Светлые кружки — индикаторные полоски в отрицательных образцах темные кружки — индикаторные полоски в положительных образцах темные треугольники — полоски сравнения. Публикуется с разрешения издательства (Litman et al., 1983). [c.140]

Аскорбат представляет собой распространенный ингибитор пероксидазы, концентрация которого в биологических жидкостях у разных людей может изменяться в широких пределах. Влияние аскорбата на цветную индикаторную реакцию и реакцию сравнения изучали как модель помех, создаваемых образ цами (рис. 10-8). Хотя с увеличением концентрации аскорбата интенсивность окраски индикаторной полоски и полоски сравнения уменьшается, влиянием ингибитора на отношение 1/Нпрак- [c.141]

Рис. 10-8. Помехи со стороны образцов на примере влияния аскорбата на интенсивность окраски. Индикаторные полоски инкубировали в объединенных отрицательных или положительных (500 мг морфяя/л) образцах мочи, содержащих аскорбат в указанных концентрациях, и затем проявляли, как описано в разделе Материалы и методы . А. Интенсивность окраски полоски сравнения (светлые кружки) и индикаторной полоски для отрицательных (темные кружки) и положительных (темные треугольники) образцов. Б.. Отношение 1/R для отрицательных (темные кружки) и положительных (светлые кружки) образцов мочи. Публикуется с разрешения издательства (Litman et al., 1983)

Рис. 10-9. Разброс значений аналитического сигнала для отдельных образцов мочи, содержащих морфий (500 мг/л) и не содержащих его Данные представлены в условных единицах (уел. ед.) для индикаторной полоски (А) и в виде отношения I/R (Б). По оси ординат отложена доля общего числа образцов. Публикуется с разрешения издательства (Litman et al., 1983),

Индикаторные полоски с внутренним стандартом удовлетворяют большинству требований, предъявляемых к методам качественного анализа вве лаборатории. Гомогенная система детектирования позволяет исключить стадии разделения она удобна с точки зрения подготовки реагентов, которые используют в виде одной сухой полоски и одного жидкого Проявителя. Применение внутреннего стандарта компенсирует многие факторы окружающей среды и делает анализ малочувствительным к флуктуациям температуры, помехам со стороны образцов, нестойкости фермента и ошибкам в измерении времени. Метод, вероятно, не потребует специального обучения персонала, так как анализ выполняется без применения пипеток, без точного контроля времени й без йзмерения оптической плотности растворов. [c.144]

Методика анализа предусматривает смешивание образца с ферментным конъюгатом, погружение индикаторной полоски полученную смесь, инкубацию в течение 5 мин при воздействии ультразвуком и проявление с помощью цветных реакций в тече- ние 10 мин (см. раздел Материалы и методы ). При первой инкубации антиген одновременно связывается с иммобилизован-ными антителами и с конъюгатом антител и фермента. Окраши< вание в результате проявления происходит по тому же механизму, что и в описанном выше анализе Тйорфия. Однако в отличие от этого конкурентного анализа интенсивность окраски в двухцентровом сэндвич-методе пропорциональна концентрации антигена. [c.145]

Выяснение роли ультразвука мы начали с изучения зависимости скорости связывания ХГТЧ с индикаторной полоской от акустической мощности (рис. 10-11). На индикаторные полоски воздействовали ультразвуком разной мощности в течение 10 мин в присутствии 2 1-ХГТЧ (10 МЕ/л, или 1нг/мл). Было найдено, что количество связавшегося 1-ХГТЧ прямо пропорционально акустической мощности. [c.145]

Затем мы изучили влияние ультразвука на кинетику связывания при различных концентрациях антигена. Индикаторные полоски инкубировали в растворах, содержащих 2 1-ХГТЧ (1, 10, 100 и 1000 МЕ/л), в течение указанных промежутков вре- [c.145]

Мы разработали принципиально иной подход, в котором иммуноспецифический сигнал связан не с активностью фермента, а с положением ферментной метки на индикаторной полоске (Zuk et al., 1985). Предложенный нами ферментативный иммунохроматографический метод, как будет показано ниже, мало зависит от температуры, точности измерения времени, а также от помех со стороны образцов. Мы обсудим характеристики визуального анализа теофиллина в цельной крови. [c.149]

При выполнении анализа образец, содержащий антиген, добавляют к ферментному реагенту и какое-то время перемешивают, Затем край индикаторной полоски погружают в полученную смесь ферментного реагента с раствором антигена и дают жидкости подняться по полоске под действием капиллярных сил. На этом этапе полоска поглощает ограниченное и воспроизводимое количество раствора. Антиген и ферментный конъюгат, перемещаясь по полоске, иммунологически связываются с иммобилизо- [c.150]

Рис. 10-15. Остроконечность цветного фронта и краевые эффекты. Смешивали 12,5 мкл калибровочного образца сыворотки с 1 мл ферментного реагента и определяли теофиллин, как описано в разделе Материалы и методы . А. Индикаторные полоски с прямыми краями. Б. Индикаторные полоски с зубчатыми краями. Здесь и на следующих рисунках указаны концентрации теофиллина в исходных, неразбавленных образцах. Публикуется с разрешения издательства (Zuk et al., 1985).

Справочник химика 21

Химия и химическая технология