Антигены иммунизирующие

Рис. 9.2. Скрининг клеток, вырабатывающих моноклональные антитела. Вьщеляют клетки селезенки мыши, иммунизированной специфическим антигеном, и проводят их слияние с клетками миеломы, не вырабатывающими антитела. Слившиеся клетки отбирают по способности к росту на среде ГАТ (гипоксантин, аминоптерин, тимидин). Клетки, вырабатывающие специфические антитела к иммунизирующему антигену (клетки гибридомы), идентифицируют иммунологическими методами и субкультиви-руют, чтобы получить отдельные клоны. Из гибридомы, растущей в культуре и секрсти-рующей единственный тип молекул антител, получают моноклональные антитела.

Сродство гаптена по отношению к антителу может быть оценено пределом, до которого определенное количество гаптена ингибирует образование осадка при воздействии гомологичного контрольного антигена на антисыворотку, или же количеством гаптена, необходимого для растворения осадка, образованного известным количеством реагентов. В этих опытах присутствие небольшого количества примесей в г аптеке или антител против примеси, находящейся в иммунизирующем антигене, не оказывает заметного влияния на результат. [c.657]

Если иммунизировать животное чужеродными эритроцитами, то образуются антитела, обладающие способностью агглютинировать эритроциты, подобные тем, которыми производилась иммунизация. Антигенами, вызывающими образование этих агглютининов, служат так называемые группоспецифические вещества крови, которые мы уже упоминали в гл. XI. Агглютинины и другие антитела не разрушаются нагреванием до 56°, поэтому агглютинация не нарушается при прогревании иммунной сыворотки в течение 30 мин. при 56°. Между прогретой и непрогретой иммунной сывороткой имеется существенное различие при применении непрогретой сыворотки помимо агглютинации эритроцитов наблюдается также и гемолиз, прогретая же сыворотка ие обладает гемолитическим действием. Гемолиз вызывается находящимся в сыворотке термолабильным комплексом, получившим название комплемент. Обычным источником комплемента служит сыворотка морской свинки, которая содержит значительное количество этого комплекса. [c.347]

В ряде случаев для определения частоты соматического мутагенеза необходимо исследовать огромное число клеток, экспрессирующих один и тот же V-ren. Практический подход для идентификации такой группы состоит в характеристике иммуноглобулинов, получаемых от серии клеточных линий, осуществляющих иммунный ответ на одинаковый антиген. (Используемые для этой цели антигены представляют собой маленькие молекулы, имеющие дискретную структуру, которая, по-видимому, обусловливает стойкий иммунный ответ. Они отличаются от больших белков, отдельные части которых могут стимулировать образование разных антител. Эти маленькие молекулы получили название гаптенов. Для того чтобы придать им свойства антигена, их соединяют с инертным белковым носителем. Иммунизируя таким антигеном мышь, получают реактивные лимфоциты, которые соединяют путем слияния с миеломными клетками для получения гибридом. Такие гибридные клетки продолжают независимый синтез желаемого антитела.) [c.515]

В отличие от генов МНС класса I, впервые обнаруженных благодаря их влиянию на отторжение трансплантатов, гены МНС класса II были открыты в связи с их ролью в Т-клеточных иммунных ответах на специфические растворимые антигены. Когда животных иммунизировали простым антигеном, некоторые из них давали очень сильный Т-клеточный ответ, другие же вообще не реагировали. Генетические исследования показали, что способность отвечать на данный антиген контролируется одним геном-геном иммунного ответа (Ir) ответы на разные антигены часто определялись разными генами Ir. Первыми были картированы гены Ir, контролирующие ответ Т-хелперов на антиген, они составили локусы МНС класса П. Г ены Ir, контролирующие ответ цитотоксических клеток на антиген, были позднее картированы в области тех или иных локусов МНС класса I. [c.280]

В большинстве иммунных ответных реакций антитела идентичной специфичности, но разных классов образуются в ответ на введение иммуногена (иммунизирующего антигена) в строго хронологическом порядке. Один тип антиген-специфичной легкой цепи иммуноглобулина может соединиться с антиген-специфичной (1-тяжелой цепью с образованием молекулы IgM. Позднее та же антиген-специфичная легкая цепь соединяется с у-тяжелой цепью, имеющей идентичную вариабельную Ун-область, с образованием молекулы иммуноглобулина IgG с антигенной специфичностью такой же, что и у молекул IgM. Далее та же легкая цепь может связаться с тяжелой а-цепью, содержащей идентичную V . При этом образуется молекула IgA, у которой антигенная специфичность аналогична той, которую имела молекула IgG. Эти три класса иммуноглобулинов (IgM, IgG и IgA), синтезирующихся в ответ на один и тот же антиген, обладают идентичными вариабельными доменами в легких (V ) и тяжелых (V ) це- [c.324]

Антигенные гибриды оказались полезными, во-первых, для изготовления моноспецифических антисывороток в том случае, когда НА или NA иммунизирующего вируса соответствует только одному или другому антигену исследуемого вируса [61]. Подобные гибриды позволяли также проводить физическое разделение антигенов, что было невозможно при использовании родительского вируса, содержавшего эти антигены в инкорпорированном виде [73]. [c.25]

Теперь необходимо идентифицировать гибридные клетки, вырабатывающие антитела к иммунизирующему антигену. Для этого обычно проводят скрининг культуральных сред, содержащих секретируемые антитела. Среду из тех лунок, в которых есть растущие клетки, отбирают и переносят в лунки другой микротитровальной плашки, предварительно покрытые слоем молекул антигена-мишени. Если в культуральной среде находится антитело (первое антитело), распознающее один из эпитопов данного антигена, то оно свяжется с антигеном и останется в лунках после их промывания. Затем в лунки добавляют второе антитело, специфичное к мышиным антителам. Оно будет присоединяться к любому первому антителу, связанному с антигеном. [c.185]

Потенциально ко всем антигенным детерминантам всех компонентов иммунизирующего материала Изменяется от животного к животному и в процессе иммунного ответа [c.91]

Иммуноферментный метод. В данном методе используют антитела кролика против иммуноглобулинов мыши, меченные ферментом, и о результате реакции судят по появлению цветной реакции. Принцип метода следующий (рис. 44). Растворимый антиген или клетки связывают с лунками 96-луночного планшета для микротитрования, приливают культуральную жидкость, в которой могут быть антитела, и после инкубации добавляют конъюгированные с ферментом антитела против иммуноглобулинов мыши. После инкубации и отмывки в лунки наливают раствор субстрата. Если в культуральной жидкости были антитела против антигена, то они адсорбируются на антигене, на них в свою очередь адсорбируются конъюгированные с ферментом вторичные антитела и под действием фермента происходит разложение субстрата и переход его в окрашенный продукт. Таким образом, по появлению окраски судят о присутствии в культуральной жидкости антител к иммунизирующему антигену. [c.113]

Независимо от схемы иммунизации одним и тем же антигеном следует одновременно иммунизировать группу животных, так как обычно наблюдаются весьма большие индивидуальные различия в иммунном ответе. Чем больше группа иммунизируемых животных, тем выше вероятность получения антисыворотки достаточно высокого титра в наиболее короткий срок. Это особенно важно при получении антисыворотки к смеси белков, например при иммунизации кроликов белками сыворотки крови для получения антисыворотки, используемой в] иммунселектрофорезе. Именно в этом случае можно ожидать образования антител к ряду компонентов смеси. Для получения антисыворотки к белковым антигенам вполне достаточно иммунизировать 1%-ными белковыми растворами. Белок обычно растворяют в 0,15 М растворе ЫаС1 этим же раствором разбавляют сыворотку крови для иммунизации. [c.116]

Проведение анализа культуральных жидкостей на содержание в них антител к иммунизирующему антигену производят следующим образом. [c.113]

Метод является усложненным вариантом обычного двухцентрового или сэндвич -анализа, в котором образование комплекса детектируется не непосредственно введением в него меченного ферментом антитела, а с помощью содержащих ферментативную метку антивидовых антител. В качестве антивидовых (или вторичных) используют антитела, специфичные к глобулинам тех видов животных или птиц, которых иммунизировали антигеном для получения антисыворотки. Примером наиболее распространенных антивидовых конъюгатов являются меченные ферментом антитела кролика против иммуноглобулинов человека, меченые антитела козы (осла, барана и т. д.) против иммуноглобулинов кролика и т. д. [c.89]

Приготовление иммунной сыворотки требуемого качества нередко встречает серьезные затруднения. Животные-продуценты существенно различаются по способности синтезировать антитела, причем наряду с межвидовыми имеются значительные индивидуальные различия в иммунореактивности животных-продуцентов в пределах одного вида. Поэтому рекомендуется одним антигеном одновременно иммунизировать несколько животных тем самым повышается вероятность получения антисыворотки хорошего качества, дающей необходимое число полос преципитации. [c.148]

Получены убедительные подтверждения теории клональной селекции. Например, если лимфоциты животного, которое не было иммунизировано, инкубировать в пробирке с любым из нескольких меченых антигенов, например А, Б, В и Г, то только очень малая доля (< 0,01%) лимфоцитов будет связывать данный антиген. Это означает, что лишь немногие клетки несут специфичес- [c.12]

Миеломные клетки мыти оказались чрезвычайно удобными для изучения биохимии продукции иммуноглобулинов и дали очень многое для понимания структуры, механизмов секреции и их функции. Однако миеломная система как источник антител к большинству антигенов не оправдала надежды исследователей — не удавалось иммунизировать животных, а затем получать мышиные миеломы, продуцирующие антитела к иммунизирующему антигену. Из тысяч миеломных опухолей, индуцированных > мышей, лишь единичные вырабатывали иммуноглобулины, которые реагировали с известными антигенами (М. Potter и сотр., [c.92]

Образование антител можно исследовать количественно с помощью реакции преципитации. Животное, которое служит реципиентом-обычно это кролик,-иммунизируют каким-либо специфическим чужеродным белком, например яичным альбумином из куриньк яиц. Затем сыворотку крови иммунизированного животного антисыворотку), содержащую антитела, смешивают с небольшим количеством антигена, т.е. яичньш альбумином. При этом происходит помутнение, так как образуется осадок (преципитат), содержащий комплекс антиген-антитело. Если же с антигеном смешивается сыворотка неиммунизирован-ного животного, никакого осадка не образуется. [c.157]

Группировки, которые присоединяются к белкам и обусловливают новую специфичность их реакций, названы определителями или детерминантами. Вещество, использованное для иммунизации, и вещество, полученное из другого белка, который используется для контроля, названы соответственно иммунизи-pijfou uM и контрольным антигенами. Антитело против такого иммунизирующего антигена и контрольный антиген, содержащие тот же самый детерминант, называют гомологичными друг другу. [c.656]

Можно предположить, что взаимодействие антигенов, содер-жапщх изомерные детерминантные группы, с антисывороткой, содержащей антитела, образованные иммунизирующими антигенами. определяется пространственным соответствием изомерных детерминантных групп испытуемого и иммунизирующего антигенов. В данном случае (детерминанты I—III)—соответствием в расположении четырех групп Р, Q, и S в антигене и гомологичном ему антителе. [c.657]

В таком случае антисыворотка с (—)-виннокислотным антителом (детерминант иммунизирующего антигена 1) связывается, с жезо-виннокислотным антигеном (детерминант III) в соответствии с аналогией расположения трех заместителей (Р, Q и S), [c.657]

Хотя эксперименты, в которых в качестве индикаторов использовались меченные изотопами вещества, дали много ценных сведений относительно синтеза белка, тем не менее в этой области до сих пор еще остались нерешенными основные проблемы. На основании этих опытов невозможно решить, происходит ли непрерывное самообновление белков путем синтеза и последующего распада отдельных молекул белка или же оно обусловлено тем, что каждая из этих молекул, не распадаясь нацело, постоянно обменивает свои отдельные составные части. Подобный обмен может достигаться, например, путем временного размыкания пептидных связей и включения аминокислоты между концами раскрытых цепей. Для разрешения этой проблемы были использованы иммунологические методы. Как уже указывалось в гл. XIV, антитела находятся во фракции у глобулинов сыворотки. Если вызвать образование антител у кролика, иммунизируя его каким-либо антигеном, то вновь образованные иммунные т-глобулины можно отдифференцировать от f-глобулинов, присутствовавших до иммунизации, по их способности преципитировать соответствуюший антиген. Так, например, инъекция полисахарида пневмококков SIII приводит к образованию SIII-анти-тел во фракции глобулинов иммунной сыворотки. Если подопытным кроликам помимо антигена вводится N -глицин, то через небольшой промежуток времени меченая аминокислота обнару- [c.390]

На 127-е сутки хронического опыта (после 110 введений красителя) на фоне продолжающегося отравления часть крыс была иммунизирована брюшнотифозным антигеном. Иммунизацию проводили однократно подкожно в область правой паховой складкп полным брюшнотифозным антигеном производства Ленинградского научно-исследовательского института вакцин и сывороток (серия 385, получен из штамма S. typhi № 4446) в дозе 20 мг/кг. [c.295]

Основные положения теории клональной селекции получили убедительные подтверждения. Например, если лимфоциты животного, которое не было иммунизировано, инкубировать в пробирке с любым из несколькггх меченых антигенов, например А, В, С и В, то только очень малая доля (<0,01%) лимфоцитов будет связывать данный антиген Это означает, что лишь немногие клетки несут специфические рецепторы для А, В, С или В. Такую интерпретацию подтверждает другой эксперимент. Антиген А делают столь высокорадиоактивным, что любая связавшая его клетка получает летальную дозу облучения оставшаяся после этого популяция лимфоцитов уже не способна реагировать на антиген А, в то время как она продолжает нормально реагировать на В, С и В. Тот же эффект можно получить, если наполнить аффинную колонку (разд. 4.4.3) стеклянными шариками, покрытыми антигеном А, а затем пропускать через эту колонку лимфоциты. В таком опыте клетки с рецепторами для А связываются с шариками, тогда как остальные клетки проходят через колонку клетки, прошедшие через колонку, не взаимодействуют более [c.221]

Иммуноглобулины сами могут действовать как антигены, и можно получить антитела, которые будут узнавать антигенные детерминанты как константных, так и вариабельных участков цепей 1 . Антигенные детерминанты (эпитопы) вариабельных областей Ь- и Н-цепей, расположенные на антиген-связывающем участке антитела, называются идиотопами (рис. 18-38). Каждый специфический антиген-связывающий участок имеет свой характерный набор идиотопов, поэтому у животного, обладающего миллионами различных антиген-связывающих участков, будут также миллионы различных идиотопов. Поскольку в организме каждый отдельный идиотои присутствует в очень малом количестве, животное не толерантно к своим собственным идиотоиам, и если его надлежащим образом иммунизировать каким-либо из его собственных антител, организм животного будет давать и Т-, и В-клеточные иммунные ответы. [c.252]

Хотя, как указывалось выше, клеточные культуры и находили применение в иммунологии, в течение ряда лет использование этой системы осложнялось следующим обстоятельством. Клетки, синтезирующие интересующие исследователей антитела (например, клетки селезенки животных, иммунизированных специфическими антигенами), плохо росли в культуре или совсем не росли, а клетки миеломы продуцировали антитела с неизвестной специфичностью (разд. 15.4). Способность этих двух типов клеток к слиянию позволила в последнее время наладить крупномасштабное производство моноклональных антител (Kohler, Milstein, 1975). Если мышь иммунизировать неочищенным препаратом антигена и затем клетки ее селезенки гибридизовать с клетками миеломы, то среди полученных гибридных клеток найдется по крайней мере одна, продуцирующая антитела, специфические к исходному антигену. Эта клетка может быть клонирована (разд. 8.1) и трансплантирована в мышь в форме опухоли, продуцирующей высокоспецифические антитела в количестве, измеряемом граммами. Представляя безусловный интерес для иммунологов, это, кроме того, дает возможность биохимику получать антитела к материалу, который он не может должным образом очистить. Такие антитела могут быть, в частности, использованы для генетического анализа антигенов поверхности клеток человека (Barnstable et al., 1978). [c.12]

Постановка опытов заключается в следующем. Мышей иммунизируют антигеном в ПАФ или в виде преципитата на квасцах с месячными интервалами и отбирают животных, имеющих высокий титр антител в сыворотке. Этим мышам вводят антиген, через 10 сут забивают и извлекают селезенку. Готовят суспензию клеток селезенки и либо культивируют их вне организма, либо употоебляют в адаптивном переносе. Для культивирования 2-10 клеток помещают в чашку Петри диаметром 60 мм в присутствии 10 мкг антигена в среде культивирования и устанавливают на вращающуюся платформу для инкубации при 37°С в атмосфере азота (83%), С02(10%) и Ог(7%). Через четыре дня клетки собирают и используют для гибридизации. [c.102]

Основными методами скринирования культуральных жидкостей с целью выявления антител к иммунизирующему антигену [c.112]

Цитотоксические Т-клетки, как и Т-хелперы, распознают не собственно чужеродный антиген, а его комплекс с молекулами МНС. Однако о1раничения в данном случае касаются молекул I класса. Это заключение было сделано по результатам достаточно простых, но демонстративных опытов. Мышей с определенным гаплотипом иммунизировали одним из вирусов (рис. 7.9). От примированных животных получали Т-клетки, которые использовали в цитотоксическом тесте с клетками-мишенями. В тех случаях, когда [c.169]

Мышей с определенной характеристикой по локусу К или D иммунизировали одним из вирусов (условно вирусом А). От примированных животных получали Т-клетки, которые использовали в цитотоксическом тесте с клетками-мишенями, зараженными вирусом и относящимися по характеру локуса К (или D) либо к донору Т-клеток, либо к его аллельному варианту. Цитотоксическую реакцию оценивали по интенсивности выделения Сг из клеток-мишеней. Примированные Т-киллеры гаплотипа не дают реакции с генетически идентичными, интактными клетками-мишенями (1). Нет реакции и при заражении клеток-мишеней вирусом, отличающимся от вируса использованного при иммунизации (2). Цитотоксическая реакция положительная, если генетически идентичные Т-кил-лерам клетки-мишени заражают гомологичным вирусом (3). В то же время при использовании клеток-мишеней, отличающихся по локусу К от Т-киллеров, цитотоксическая реакция не развивается даже при наличии гомологичного вируса у клеток-мишеней (К" против К или К против К — 4,5). Аналогичные отношения выяапены для локуса D. В то же время генетические ограничения не проявляются по генам, контролирующим молекулы П класса. Из этих опытов следует, что Т-киллеры распознают как собственные молекулы I класса, так и чужеродный вирусный антиген [c.171]

Сцепленное распознавание. В условиях конкретной вирусной или бактериальной инфекции В- и Т-клетки должны распознать тот же самый комплексный антиген, но не обязательно те же самые эпитопы этого антигена. Понимание того факта, что В- и Т-клетки могут реагировать с разными эпитопами и что при этом помощь со стороны хелперных Т-клеток проявляется в полной мере, пришло из опытов по индукции гуморального иммуного ответа у хсивотных, иммунизированных комплексом гаптен носи-тель (рис. 9.18). Мышей иммунизировали конъюгатом NIP-OA (N1P [c.243]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология