Носитель твердофазный для антиген

Для проведения такого анализа необходимо эффективное отделение комплексов от свободных компонентов. Эта задача достаточно легко решаема, если антиген, либо антитело иммобилизовать на твердом носителе. Иммобилизация позволяет предотвратить агрегацию в растворе и разделить иммунные комплексы и свободные компоненты. Возможность прочного связывания на носителе антигенов или антител с сохранением их способности к специфическому образованию иммунных комплексов привела к созданию твердофазных иммунохимических методов, широко используемых в настоящее время в химическом анализе. [c.114]

Особую значимость для широкого внедрения твердофазного ИФА в практику имела разработка в качестве носителей для сорбционной иммобилизации антител и антигенов специальных полисти-рольных плат, содержащих 96 лунок. Факт сорбции антител на поверхности полистирола был установлен в середине 60-х годов и использован первоначально в методах РИА. Введение в практику ИФА полистирольных плат позволило значительно увеличить число-проводимых анализов и упростить методическую процедуру его выполнения. Были сконструированы специальные приборы, позволяющие автоматизировать стадии добавления реагентов, промывки и осуществлять одновременную регистрацию каталитической активности фермента-метки в каждой из лунок платы. [c.7]

К носителю с иммобилизованным антигеном добавляют раствор определяемого антигена и раствор, содержащий фиксированное количество меченных ферментом специфических антител. После инкубации и отмывки несвязавшихся с носителем компонентов определяют ферментативную активность на носителе. Метод является твердофазным, так как носитель с иммобилизованным антигеном используют на первой стадии анализа, включает лишь одну равновесную стадию инкубации, поэтому время анализа определяется в основном продолжительностью этой стадии, однако не дает возможности избежать контакта фермента-маркера с анализируемой средой. В связи с этим ограничения его применения могут возникать при необходимости анализа биологических жидкостей (сыворотка [c.95]

Гетерогенные методы ИФА включают стадию разделения свободного меченого компонента от образовавшегося комплекса со связываюш,им агентом. Задача разделения эффективно решается при использовании антител (или антигенов), иммобилизованных на нерастворимых носителях. Методы, основанные на данном подходе, известны под названием твердофазных методов ИФА. [c.201]

В связи с интенсивным применением иммобилизованных ферментов в биотехнологии методы получения различных нерастворимых производных соединений белковой и небелковой природы хорошо разработаны. Многие из них могут быть эффективными и для получения-иммобилизованных препаратов антител и антигенов (иммуносорбентов). Чаще всего для целей твердофазного ИФА приготовление иммуносорбентов осуществляют либо ковалентным связыванием, либо адсорбцией вещества на поверхности носителя. [c.201]

Описанный в разд. IV твердофазный РИА является очень чувствительной и удобной методикой определения липидных антигенов. Как уже было отмечено, некоторые антитела в условиях, при которых проводят эксперимент, имеют тенденцию к неспецифическому связыванию с твердофазным носителем, поэтому при первичных тестах следует использовать в качестве контроля носитель, не покрытый липидом. Это удваивает объем работы при скрининге супернатантов гибридом на связывание с липидными антигенами. [c.171]

Особое распространение получили методы, основанные на использовании антигенов и антител, меченных ферментами, — так называемый иммунофермеитный анализ. Они используются для изучения широкого круга соединений — антител, пептидных и стероидных гормонов, вирусных и бактериальных антигенов, различных белков и ферментов. Существуют гетерогенные (твердофазные) и гомогенные методы иммуноферментного анализа, принципиально различающиеся способом разделения компонентов иммунохимической реакции. Твердофазные методы основаны на применении антител или антигенов, иммобилизованных на нерастворимых носителях. [c.306]

Одним из важных моментов в проведении иммуноферментного анализа является разделение свободных и связанных с антителами меченых компонентов. В настоящее время разработано несколько вариантов решения данной проблемы. Наиболее распространен метод, основанный на иммобилизации антител на твердой подложке (стеики полистирольных пробирок или шариков, целлюлозные диски, гранулы макропористых носителей для хроматографии). Особенно перспективными оказались полистироло-вые пробирки или планшеты, содержащие 96 лунок. Сущность методов разделения основана на том, что одни из компонентов, например антитела, могут быть сорбционно иммобилизованы на поверхности измерительной кюветы. После проведения инкубации с образцом антиген сорбируется на поверхности, а все остальные компоненты остаются в растворе и могут быть легко отделены, например, с помощью пористых частиц под действием магнитного поля. Основными проблемами, возникающими при реализации твердофазных методов разделения, являются стандартизация поверхности и уменьшение неспецифического связывания меченых компонентов с носителем. [c.114]

Получение антигенов и антител, связанных с Носителем, является одной из суш,е-ственных процедур при разработке твердофазного ИФА, так как от степени сохранения стабильности и активности иммобилизованных препаратов зависят количественное характеристики метода и возможность его практического применения. Другой важной областью применения иммуноч сорбентов для целей ИФА является очистка антигенов и антител для последующей метки ферментом или использования в качестве стандартного образца. [c.201]

Твердофазные иммунореагенты вначале использовали для выделения антигенов и аитител. Впоследствии иммобилизованные антитела применили для радиоиммуноанализа белков [1, 2] и гаптенов [3,4 ], где с их помощью удалось упростить разделение свободного и связанного с антителами определяемого вещества. Реагенты (антитела или антигены) связывали с носителем или ковалентно, или с помощью пассивной адсорбции. Ковалентное связывание требует проведения химических реакций и тщательной очистки готового продукта. Связывание путем пассивной адсорбции занимает много времени, а полученные таким способом реагенты сложно ис- [c.52]

Ситуация резко изменилась после введения неизотопных меток для регистрации реакции антиген - антитело [5 ], и особенно после применения моноклональных антител в двухцентровом им-мунометрическом анализе белков [б ]. Необходимость создания высокочувствительных методов иммуноанализа для научных исследований, а также более простых методик для проведения анализов в поликлиниках, полевых условиях и для самодиагностики также содействовала бурному развитию твердофазных методов. Носители, применяемые в этих анализах, могут быть выполнены в виде трубок, шариков, мелких гранул, микропланшетов, полосок, пленок и электродов. [c.53]

Во всех рассматриваемых тест-системах в качестве твердофазного носителя, или подложки, использовали небольшие диски с изотиоцианатными группами на поверхности, с помощью которых ковалентно пришивают белки или иные антигены. Антигены, химически связанные с поверхностью таких дисков, можно лиофилизовать и хранить при 4°С в присутствии осушителя. В тех случаях, когда специально проверяли стабильность подобных препаратов при длительном хранении, было установлено, что при хранении в таких условиях существенного изменения свойств не происходит на протяжении 4 лет и более. Ковалентный способ иммобилизации обладает рядом пренму-ществ для него характерно равномерное распределение антигена по поверхности и почти полное предотвращение его вымывания с поверхности носителя в свободную фазу при проведении анализа. Если у применяемого способа таких преимуществ нет, то возникают серьезные проблемы при использовании антигенов нековалентно адсорбированных на поверхности носителя ( hes-sum, Denmark, 1978). [c.195]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология