Метод иммуноферментного анализ

Рис. 22. Принципиальные схемы гомогенных методов иммуноферментного анализа а—Г — свободный гаптен Е—Г — меченный ферментом гаптен АЬ — антитела 5 н Р — субстрат н продукт ферментативной реакции б — Ag—5 — меченный субстратом антиген Ag — свободный антиген Е — фермент Р — продукт ферментативной реакции символ х — ингибирование ферментативной реакции

Методы иммуноферментного анализа [c.77]

Метод иммуноферментного анализа занял прочное место среди методов биохимического микроанализа. Однако следует иметь в виду, что его возможности еще до сих пор остаются неисчерпанными. С одной стороны, с каждым годом расширяется перечень соединений, для определения которых удобен этот метод, с другой — происходит непрерывный процесс его совершенствования увеличиваются чувствительность, точность и специфичность, уменьшается время анализа, упрощается методика, разрабатываются способы автоматизации с помощью биохимических роботов и компьютеров. Важное значение для совершенствования иммуноферментного анализа как метода имеет более детальное изучение физико-химических свойств ферментов и создание высокочувствительных методов детекции нх активности. [c.122]

В связи с интенсивным развитием промышленной биотехнологии, методы иммуноферментного анализа находят все более широкое применение в контроле технологических процессов и качества биотехнологической продукции. Так, например, в микробиологических производствах методы иммуноферментного анализа могут быть применены для быстрого выявления высокоэффективных микроорганизмов — продуцентов различных физиологически активных веществ (ферментов, антибиотиков и т.д.), контроля наличия посторонних микроорганизмов и бактериофагов в ферментерах, определения загрязненности воздуха промышленных помещений на наличие в нем вредных веществ, [c.121]

В зависимости от поставленных задач в методах иммуноферментного анализа употребляются различные детектирующие системы. Наиболее широкое применение находят методы фотометрического анализа. С помощью различных хромогенных субстратов определяют пероксидазу, р-галактозидазу, щелочную фосфа- [c.113]

Хемилюминесцентные методы иммуноферментного анализа. Использование катализаторов в качестве маркеров в люминесцентном иммуноанализе является наиболее перспективным направлением, поскольку относительно катализатора реакции квантовый выход гораздо выше, чем относительно субстрата, и, следовательно, этот подход принципиально позволяет повысить чувствительность метода. [c.133]

Антигены, меченные субстратами и кофакторами, также нашли применение в гомогенных методах иммуноферментного анализа. Сущность этих методов (уравнения 6, 7, 8) заключается в том, что при взаимодействии меченого антигена с антителами субстрат становится не доступным для действия фермента, в результате чего продукт ферментативной реакции не накапливается в системе (рис. 22, б) [c.115]

Методы иммуноферментного анализа уже сейчас находят широкое применение в различных областях медицины, сельского хозяйства,, контроле технологических процессов и качества медицинских и пищевых продуктов, научных исследованиях. [c.120]

Без методов иммуноферментного анализа невозможно представить себе развитие клеточной инженерии. В частности, получение гибридом целиком базируется на использовании иммуноферментного анализа при клонировании клеток. При генноинженерных работах эти методы позволяют быстро отбирать клоны-продуценты. Методы иммуноферментного анализа эффективны при решении фундаментальных проблем онкологии, вирусологии, биохимии и физиологии. [c.122]

Все указанные достоинства люминесцентных систем позволили рассматривать их как эффективную систему детекции в иммунохимическом анализе. Соединение люминесцентного анализа с методами иммуноферментного анализа обеспечило быстрое развитие нового направления — люминесцентного иммуноанализа (ЛИА). [c.125]

Подобного рода проблемы очень часто возникают, например, при разработке методов иммуноферментного анализа лекарственных препаратов, стероидных и белковых гормонов. В зависимости от способа получения антисыворотки антитела могут быть специфичны либо только к одному лекарственному препарату (гап-тену), либо к целой группе близких по структуре химических соединений. В этих случаях распространен способ оценки специфичности, основанный на сравнении связывания антител в данной концентрации (или в определенном разведении иммунной сыворотки) одного и того же количества гомологичного и гетерологичного гаптена. При этом концентрация образовавшегося иммунного комплекса для гомологичного гаптена принимается равной единице, а связывание всех гетерологичных гаптенов оценивается как доля от соответствующего связывания гомологичного гаптена. [c.37]

Истинные значения констант связывания важны для определения термодинамических характеристик процесса взаимодействия антиген--антитело. Для практических целей, в частности для разработки методов иммуноферментного анализа, достаточно знать эффективные значения, характеризующие свойства используемых антител. [c.41]

При подготовке русского издания трудность представлял перевод некоторых терминов, не имевших эквивалента в научной литературе на русском языке. Поэтому в ряде случаев мы вводили новые термины, которые с нашей точки зрения достаточно точно отражают смысл процесса. Следует отметить, что сами авторы употребляют иногда отнюдь не общепризнанные термины, а также много произвольных сокращений. Для того чтобы облегчить их восприятие, в конце книги мы приводим список сокращений. Большое количество экспериментального материала, методик, аналитических характеристик разных методов иммуноферментного анализа делают данную книгу ценным пособием как для тех, кто разрабатывает новые методы анализа, так и для тех, кто использует уже готовые диагностические наборы и хочет знать, по какому научному принципу они составлены. [c.6]

Особое распространение получили методы, основанные на использовании антигенов и антител, меченных ферментами, — так называемый иммунофермеитный анализ. Они используются для изучения широкого круга соединений — антител, пептидных и стероидных гормонов, вирусных и бактериальных антигенов, различных белков и ферментов. Существуют гетерогенные (твердофазные) и гомогенные методы иммуноферментного анализа, принципиально различающиеся способом разделения компонентов иммунохимической реакции. Твердофазные методы основаны на применении антител или антигенов, иммобилизованных на нерастворимых носителях. [c.306]

С точки зрения способа выполнения все методы иммуноферментного анализа (ИФА) можно разбить на две группы 1) системы, не требующие разделения компонентов (гомогенные методы), и 2) системы, для которых такое разделение необходимо (гетерогенные методы). В системах, не требующих разделения, ферментативную активность анализируемого раствора измеряют без предварительного физического разделения меченых лиган- [c.12]

При разработке методов иммуноферментного анализа можно использовать несколько классов модуляторов ферментов. Например [c.66]

В этой главе описан метод иммуноферментного анализа без разделения компонентов, основанный на способности специфических антител против лиганда ограничивать конформационную подвижность связанного с ним апофермента. В результате такого воздействия апофермент теряет возможность сворачиваться в каталитически активную конформацию. [c.97]

Методы иммуноферментного анализа с помощью индикаторных полосок полностью удовлетворяют этим требованиям, пригодны для использования вне лаборатории и, что особенно важно, могут применяться с различными хромогенными субстратами. ферментные метки в отличие от флуоресцентных и радиоактивных легко детектировать по продуктам катализируемых ими реакций. Это делают визуально или с помощью простых портативных приборов. Очевидно, что индикаторные полоски — очень удобные матрицы для реагентов, позволяющие упростить обработку образцов и разделение компонентов реакционной смеси. [c.130]

МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА В ОТНОШЕНИИ РЕСНИРАТОРНО- СИНЦИТИАЛЬНОГО ВИРУСА [c.420]

В медицинской диагностике методы иммуноферментного анализа все активнее внедряются для обнаружения микробных и вирусных возбудителей, а также антител против них. Весьма сложной является проблема обнаружения таких возбудителей паразитарных инфекций, как гельминты, малярийный плазмодий, и других организмов, имеющих сложный и изменчивый антигенный состав. Но и в этих случаях выбор наиболее диагностически значимых антигенов позволяет проводить эффективную диагностику. Все шире применяется иммуноферментный анализ в диагностике неинфекционных болезней, таких, как диабет, р [c.120]

Методы иммуноферментного анализа нашли применение в диагностике вирусных заболеваний растений. Известно, что вирусные поражения приводят к сильному снижению урожайности плодово-ягодных культур, картофеля, злаковых. Для эффективной борьбы с вирусными инфекциями необходимо иметь высокочувствительные методы массового анализа растений. Имйуно-ферментный анализ оказался самым результативным. Его использование в растениеводстве позволяет сократить время получения безвирусного посадочного картофеля, проводить быстрое определение зараженности плодовых деревьев, отбирать новые вирусоустойчивые сорта в селекции растений. В комплексе с другими агротехническими мероприятиями иммуноферментный анализ способствует повышению урожайности сельскохозяйственных культур более чем в два раза, при этом увеличиваются сроки хранения, улучшаются вкусовые качества и другие качественные показатели пищевых продуктов. [c.121]

Клонирование гибридом методом предельных разведений. Содержимое лунок, показавших положительный результат при тестировании, изучают под микроскопом и оценивают, содержат ли они одну или большее число гибридом. Клетки разводят до концентрации 3 клетки/мл и распределяют по 0,2 мл в 96-луночные микроплаты, в которых содержится 5-10 филерных клеток (макрофагов или тимоцитов) на лунку. Отдельные клоны клеток, выросшие в лунках через 10 дней, тестируют методами иммуноферментного анализа, как описано выше. [c.168]

Определение пероксидазной метки с помо1цью усиленной хемилюминесценции отличается высокой чувствительностью, специфичностью и простотой и может быть положено в основу при разработке удобных и. быстрых методов иммуноферментного анализа, выполняемых с помощью недорогих портативных приборов. [c.176]

Все описанные выше методики относятся к числу гетерогенных. Известны и гомогенные методы иммуноферментного анализа с амперометрическим определением. Так, концентрацию антнэпи-лептического препарата фенитоина можно измерять с помощью [c.215]

Если весь процесс иммуноферментного анализа условно разделить на три основные стадии - формирование специфического комплекса антиген — антитело (иммунохимический процесс), введение в него метки и ее визуализация тем или иным физическим способом, то можно заметить, что основное внимание в данной книге фокусируется на второй и третьей стадиях, представляющих преимущественно энзимологический аспект проблемы. В книге рассмотрены практически все известные способы регуляции активности ферментов, как химические (с помощью активаторов, ингибиторов, субстратов, простетических групп), так и физические (путем изменения активности ферментов при образовании комплекса антиген — антитело, с помощью ультразвука, конформационных и диффузионных ограничений). Главное достоинство монографии состоит в том, что в ней, по-видимому, впервые комплексно рассмотрены возможности регуляции активности ферментов, которые могут быть использованы для создания методов иммуноферментного анализа. В этом смысле оправдано английское название книги Enzyme-mediated immunoassay , которое буквально переводится, как Иммунный анализ, опосредованный через ферменты . [c.5]

В этой главе мы рассмотрели новый метод иммуноферментного анализа без разделения компонентов. Этот метод, названный ИФАКО, основан на способности специфических антител против лиганда ограничивать конформационную гибкость связанного с лигандом белка. В условиях ограниченной подвижности белок не может свернуться в каталитически активную конформацию. [c.101]

FAD С образованием каталитически активного ко 1плекса ДНФ—АпоГО FAD (реакция IIJ). Таким образом, количество продуктов, выделяющихся в реакции IV, пропорционально количеству определяемого вещества. Данные, приведенные на рис. 7-4—7-5, свидетельствуют о появлении нового метода иммуноферментного анализа без разделения компонентов (гомогенного метода). [c.102]

В Исследовательском институте Syva разработаны два типа гомогенных методов иммуноферментного анализа для высокомолекулярных веществ. Методы первого типа связаны с применением -галактозидазы и макромолекулярного субстрата (Gibbons et al., 1980). Методы второго типа основаны на использовании ферментных каналов (Litman et al., 1980) с участием двух или большего числа ферментов. В этой главе мы рассмотрим принципы, особенности, ход выполнения и клинические приложения методов обоих типов. [c.103]

Очевидно, что неинструментальные количественные методы очень удобны в тех случаях, когда решающее значение приобретают портативность оборудования и скорость определения. Этим требованиям не удовлетворяет большинство методов иммуноферментного анализа, в которых иммуноспецифический сигнал связан с активностью ферментной метки. Поскольку ферментативные реакции зависят от времени и температуры, методы, основанные на измерении активности, обычно требуют специальной калибровки, точного контроля времени и температуры. Все это в совокупности с трудностью визуального определения малых изменений поглощения или отражения неизбежно приводит к использованию довольно сложных приборов. [c.149]

Методы иммуноферментного анализа с применением индикаторных полосок, рассмотренные в этой главе, относятся к группе быстро развивающихся методов анализа на месте , требующих минимального оборудования. Фермент-зависимые иммуно-химические индикаторные полоски высокочувствительны и позволяют легко и быстро определять низкомолекулярные лекарственные препараты, а также высокомолекулярные белковые антигены. Можно разработать как качественные, так и количественные методы для самых разнообразных аналитических и клинических целей. Иммунохроматографический метод, обеспечивающий точное визуальное определение концентрации лекарственных средств в цельной крови и требующий от пользователя лишь минимальных навыков, отражает современную тенденцию к упрощению анализа. Мы надеемся, что тенденция к простоте у удобству анализа сохранится и что в новых разработках усилия будут направлены на дальнейшее уменьшение числа манипуляций, продолжительности анализа и его восприимчивости [c.159]

Одним из генов, имеющих фармакологическую ценность, является ген, кодирующий гранулоцит-колоний-стимулирующий фактор (Г-КСФ) человека. В настоящее время с нашим участием ведутся исследования по анализу экспрессии гена Г-КСФ, находящегося под контролем промотора и 3 -фланкирующей области гена а у-казеипа быка (Дворянчиков и др., 2000) в молоке полученных нами трансгенных мышей (работа проводится совместно с исследователями государственного университета г. Рио-де-Жанейро, Бразилия). Методом иммуноферментного анализа у трансгенных самок в лактирующей молочной железе обнаружен рекомбинантный белок на уровне 0,1-0,3 мкг в мл. Были проведены тесты на биологическую активность белка в молоке трансгенных мышей с помощью Г-КСФ-зависимой миелоид-ной линии клеток мышей, первичной культуры костного мозга мышей и человека в агаре. Оба теста выявили стимулирующую активность молока в разведении, соответствующей концентрации 1-2 пкг/мл рекомбинантного белка (Dvoryan hikov et al., 2003). Предполагается, что данная генетическая [c.189]

К счастью, потенциометрические методы иммуноферментного анализа не обязательно являются гетерогенными по своей сути. Гомогенные методы удобнее, чем гетерогенные, так как включают меньшее число операций. Фононг и Рехнитц [6] описали метод гомогенного потенциометрического иммуноферментного анализа для человеческого иммуноглобулина О с использованием СО2-электрода. В этом методе получают конъюгат IgG, меченный ферментом, и затем ингибируют активность последнего, связывая конъюгат с антителами к IgG. Используемая ферментная метка, хлоропероксидаза, несколько необычна. Это гем-содержащий фермент, который катализирует ряд реакций галогенирования органических молекул в присутствии пероксида водорода и соответствующего галогенида, например бромирования (3-кетоадипиновой кислоты. Этот процесс сопровождается образованием СО2, что и используют в данном аналитическом методе [c.62]

Скрининг - выявление частоты нераспознанной заболеваемости с помощью быстродействующих тестов. Как правило, скрининг предполагает плановое тестирование в рамкг х всей популяции или отдельных групп внутри популяции. Серологический тест на наличие у человека антител к ВИЧ стал широко доступен с 1985 г. В массовой практике тестирования и скрининга чаще всего используются методы иммуноферментного анализа, которые, однако, могут давать как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты. [c.344]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология