Пептиды кислые, фракционирование

Примечания. 1. Основные белки и пептиды анализируют в кислой среде (pH 4,3). Для их фракционирования требуются следующие растворы. [c.91]

А. ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ КИСЛЫХ ПЕПТИДОВ НА КОЛОНКЕ С АМБЕРЛИТОМ 1К-4В [c.195]

Область применения. Эта смола используется в основном для фракционирования небольших пептидов и выделения кислых аминокислот и пептидов из смеси. [c.195]

Наибольшей скоростью прохождения колонки обладают компоненты, не способные проникнуть в зерна гелевой фазы. Сефадексы 0-10 и 0-15 служат для фракционирования низкомолекулярных веществ, первый из них используется для веществ с молекулярным весом до 700, а второй — до 1500. Гели сефадекса 0-25 не способны поглощать, а следовательно, и задерживать перемещение по колонке веществ с молекулярным весом 3500— 4500. Этот предел для сефадекса 0-50 лежит в области значений молекулярных весов 8000—10000, а для сефадекса 0-75 эта величина достигает 40000—50000. Медленно перемещаются по колонке низкомолекулярные вещества, для которых коэффициент распределения между гелевой и жидкой фазами приближается к единице. Во многих случаях компоненты смеси при хроматографическом разделении на сефадексах следуют в порядке уменьшения их молекулярных весов. Однако наблюдается иногда и специфическое сорбционное взаимодействие разделяемых веществ с матрицей сефадекса, что влечет за собой увеличение коэффициента распределения К и снижение скорости перемещения по колонке. Так, замедление движения хроматографических зон наблюдается у основных пептидов и аминокислот в основных растворителях и кислых аминокислот и пептидов в кислых растворителях. Наблюдается также повышение степени удерживания в колонке ароматических веществ при гельфильтрации [22]. Ряд белков, таких как рибонуклеаза, лизоцим, трипсин, бычий сывороточный альбумин, в отсутствие солей также сорбируется и удерживается сефадексом при хроматографии. В связи с этим целесообразно проводить элюирование на сефадексах растворами солей или кислот. [c.202]

Карбоксиполипептидаза представляет собой единственную пептидазу, полученную в настоящее время в кристаллическом виде. Она получена из сока, вытекающего при оттаивании замороженной поджелудочной железы, фракционированным осаждением сернокислым аммонием при слегка кислой реакции [96]. Молекулярный вес карбоксиполшептидазы 33 800 [47]. Этот фермент расщепляет пептиды, содержащие свободные карбоксильные группы, причем наличие свободных аминотрупп не обязательно [97]. Карбоксиполипептидаза может расщеплять не только пептидные, но также и эфирные связи [25, 52]. [c.294]

Ионофорез можно определить как электрический перенос ионов относительно небольших размеров от, очевидно, применим к разделению пептидов [338, 339]. Ионофорез может быть проведен в простом приборе с тремя ячейками. Нейтральный раствор пептида помещают в среднюю ячейку, а два электрода располагают в боковых отделениях, которые заполняют водой или соответствующим раствором соли. Пептиды, суммарный заряд которых положителен, перемещаются по (направлению к катоду, в то время как пептиды, заряд которых является нулевым или очень слабым, остаются в центральной ячейке. Таким образом можно обе группы пептидов разделить и подвергнуть дальнейшему фракционированию. Кислые пептиды стремятся проникнуть в анодное отделение, в котором они обычно подвергаются значительному распаду. Эффективность разделения снижается диффузией и элек-троэндосмотическими явлениями. Результаты ионофореза можно заметно улучшить двумя путями применением дополнительного анодного отделения [340] или стабилизированием фронтов миграции с помощью твердого вещества, пропитанного каким-либо буферным раствором. В последнем случае как на кислотной, так и на щелочной стороне образуется ряд четких границ [341, 342]. Удовлетворительное фракционирование пептидов цистеино-вой кислоты и продуктов неполного гидролиза шерсти было достигнуто на силикагеле [343]. Силикагель можно заменить агар-агаром [344], асбестом [345], стеклянным порошком [346, 347] или бумагой. На бумаге можно осуществлять либо простой Ионофорез [348, 349], либо ионофорез в сочетании с хроматографиче-ским разделением [350, 351]. При надлежащем использовании ионофорез на бумаге является, повидимому, хорошим [c.150]

В результате расщепления белка или полипептида, каким бы методом оно ни осуществлялось, всегда образуется смесь пептидов. В среднем наиболее короткие пептиды получают при химотрипсиновом гидролизе, а наиболее длинные — при обработке бромистым цианом (так как содержание метионина в большинстве белков очень мало по сравнению с суммарным содержанием крупных гидрофобных аминокислот). При фракционировании смесей пептидов наилучшие результаты дает метод ионообменной хроматографии на колонках. Если для разделения используют смолу дауэкс I или другую, сходную смолу основного характера, а для элюции — ниридин-ацетатный буфер с постепенно понижающимся значением pH (8—3), то первыми с колонки выходят основные пептиды наиболее кислые выходят последними (фиг. 12). Обратный порядок элюции имеет место при [c.72]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология