Искусственные хромосомы

Поскольку с помощью методов клонирования у дрожжей были выделены все элементы, необходимые для репликации и наследования хромосом — ориджины репликации, теломеры и центромеры,— то оказалось возможным создать искусственную хромосому, состоящую из соединенных в.месте двух теломер, центро.меры, последовательности ARS и ДНК наполнителя , роль которой может играть ДНК с любой последовательностью, например ДНК фага лямбда. Оказалось, что искусственная хромосома поддерживается в дрожжах, причем стабильность ее наследования не намного ниже, чем стабильность собственных дрожжевых хро.мосом. [c.72]

Возможно, подходящим терапевтическим вектором станет искусственная хромосома человека. Это связано с 1) возможностью включения в нее протяженных сегментов чужеродной ДНК вместе с полным набором регуляторных элементов для одного или нескольких терапевтических генов 2) возможностью использования геномного варианта терапевтического гена, обеспечивающего высокую эффективность его экспрессии 3) стабильностью терапевтического гена и его длительной экспрессией как в пролиферирующей, так и в неделящейся клетке-мишени. [c.501]

Дрожжевая искусственная хромосома (YA ] [c.36]

Искусственная хромосома дрожжей со вставкой 100-700 т.п.о. [c.88]

Искусственные хромосомы животных и человека [c.96]

Векторные системы, способные интегрировать крупные вставки (>100 т. п. н.), имеют большую ценность при анализе сложных эукариотических геномов. Без таких векторов не обойтись, например, при картировании генома человека или при идентификации отдельных генов. В отличие от библиотек с небольшими вставками, в геномной библиотеке с крупными вставками скорее всего будет представлен весь генетический материал организма. Кроме того, в этом случае уменьшается число клонов, которые нужно поддерживать, и увеличивается вероятность того, что каждый из генов будет присутствовать в своем клоне. Для клонирования фрагментов ДНК размером от 100 до 300 т. п. н. был сконструирован низкокопийный плазмидный вектор на основе бактериофага Р1 — химерная конструкция, называемая искусственной хромосомой на основе фага Р1. Был создан также очень стабильный вектор, способный интегрировать вставки длиной от 150 до 300 т. п. н., на основе Р-плазмиды (F-фактора, или фактора фертильности) Е. соИ, которая представлена в клетке одной или двумя копиями, с селекционной системой la Z векторов pU . Эта конструк- [c.76]

Искусственная хромосома содержит три основных элемента концевые участки (теломеры), центромеру и точки инициации репликации. Свойства теломерных областей хромосом человека хорошо изучены, чего нельзя сказать о центромерах и точках инициации репликации, и существовали опасения, что искусственную хромосому человека не удастся сконструировать, пока не будут досконально изучены все ее элементы. Однако уже получены и поддерживаются в трансфицированной культуре клеток стабильные линейные искусственные хромосомы человека (микрохромосомы), состоящие из множества ДНК-повторов (длиной около 1 м. п. н.) центромерной области Y-хромосомы, высокомолекулярных фрагментов геномной ДНК и теломерных участков. В их центромерную область был встроен ген устойчивости к неомицину, что позволило использовать среду G418 в качестве селективной. В нескольких G418-устойчивых клетках были обнаружены микрохромосомы длиной от 6 до 10 м. п. н. [c.501]

ДНК-элементов. Ясно, что создание искусственной хромосомы человека, содержащей тера-певтический(е) ген(ы), вполне реально, но основной проблемой станет доставка этой огромной молекулы ДНК в ядро клетки-мише-ни. Кроме того, экспрессия генов, входящих в состав ДНК-блоков, из которых построена ис-1сусственная хромосома, может оказывать вредные воздействия на клетки-мищени. Для начала в ткани пациента можно попытаться импланти- [c.502]

Наши нынешние надежды связаны с перекрестным зондированием с помощью Lorist-клонов из концов цепочек и дрожжевыми искусственными хромосомами (YA ). Такой подход позволяет обойти недостатки каждого метода и при этом сохранить их преимущества. Выяснилось, что по сравнению с космидами метод YA детерминирует большее разнообразие в распределении фрагментов, и мы надеемся, что именно этот путь окажется более эффективным для соединения цепочек друг с другом. [c.50]

В искусственные хромосомы, имеющие эти три необходимых компонента, обычно включают ген (нормальную, или доминантную аллель), контролирующий какой-нибудь этап метаболизма. Этот ген служит маркером при трансформации штамма дрожжей, мутантного по этому же гену. Подобные искусственные хромосомы, введенные в клетку при помощи трансформации, судя по данным гибридологического анализа, содержатся в ней в виде одной копии, имеют линейную структуру, реплицируются и распределяются в митозе и мейозе преимущественно подобно обычным хромосомам, если они представляют собой молекулы ДНК длиной около 50 ООО п. н. Стабильность таких искусственных минихромосом все же значительно уступает стабильности естественных хромосом. Синтетические минихромосомы теряются с частотой IX10 , в то время как хромосомы дрожжей утрачиваются с частотой около 1 X 10 . При меньших, чем 50 ООО п. н., размерах искусственные хромосомы теряются с частотой 1X10 и более. [c.143]

Искусственные хромосомы дрожжей YA . Первые минихромосомы дрожжей были получены А. Мюрреем и Дж. Шостаком в 1983 г. Мини-хромосомы дрожжей YA представляют собой кольцевые молекулы ДНК, содержащие большинство вышеупомянутых генетических элементов, которые позволяют им стабильно существовать во внехромосомном состоянии в клетках дрожжей (рис. 10). Типичный вектор включает в себя две теломерные последовательности нуклеотидов TEL (Tetrahymena), необходимые для репликации концов мини-хромосомы, и область начала репликации ARS1, соединенную с последовательностью центромеры (СЕМ). Все эти функциональные элементы требуются для репликации YA -вектора и его [c.88]

Искусственные хромосомы Р1. В заключение следует упомянуть о семействе векторов РАС (Р1-derived artifi ial hromosome), также часто используемых в современных исследованиях. Векторы этой серии содержат гены умеренного бактериофага Р1, обеспечивающие репликацию фаговой хромосомы в зараженных бактериальных клетках. Рекомбинантные ДНК на их основе (размер вставки 150-200 т.п.о.) также вводятся в бактериальные клетки с помощью электропорации. [c.94]

При субклонировании вставку рекомбинантной ДНК, выделенную из вектора изолированного клона, переносят в новый вектор, который дает возможность ее исследования в более простых условиях и с затратой меньших усилий. Если вставка была получена в фаговом, космидном векторе или с использованием искусственной хромосомы, что предполагает ее большой исходный размер, то она может быть переклонирована по частям в плазмидном векторе, и это может значительно облегчить ее дальнейшее исследование, например, с помощью секвенирования. [c.167]

Смотреть страницы где упоминается термин Искусственные хромосомы: [c.27] [c.76] [c.462] [c.502] [c.550] [c.550] [c.98] [c.142] [c.142] [c.86] [c.90] [c.92] [c.97] [c.98] [c.99] [c.100] [c.171] [c.411] [c.511] [c.513] [c.513] [c.513] [c.514] [c.515] [c.515]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология