Метод зонального электрофореза

МЕТОД ЗОНАЛЬНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА [c.10]

КОМБИНИРОВАННЫЕ МЕТОДЫ ЗОНАЛЬНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА [c.148]

Разработан ряд электрофоретических методов для анализа белков и их смесей. В методе движущейся границы, или фронтального электрофореза, определяется скорость перемещения в электрическом поле резкой границы между раствором исследуемого вещества и растворителем. Для препаративного разделения смесей более удобен метод зонального электрофореза, в котором раствор исследуемого вещества помещают вначале в виде узкого слоя между двумя слоями растворителя. За достаточно большой промежуток времени вещества с различной подвижностью расходятся на значительное расстояние, их зоны перестают перекрываться и продукты разделения могут быть [c.172]

Преимущества методов зонального электрофореза в сравнении с методами свободного электрофореза заключаются в следующем [c.10]

При разложении амилозы гидролизом в кислой среде значительно-увеличивается активность иода, необходимая для образования комплекса [26]. Эта активность была измерена методом потенциометрического титрования. Моулд [58] измерил минимальную концентрацию иода, необходимую для полнохо образования комплексов мальтодекстриповых фракций, выделенных из продуктов гидролиза амилозы методом зонального электрофореза в присутствии иода и иодид-иона. Для образования йодного комплекса фракциями, у которых Р = 10- -25 (оранжевого), 25 ч- 40 (красного) и 40 ч- 90 (голубого), необходимо, чтобы концентрация иода в 0,001 М растворе иодида калия была соответственно равна 15-10 , 3,2-10" и 1,0-10 М, в то время как для образования комплекса амилозой, не подвергавшейся гидролизу, достаточна концентрация иода 1-10 М. Комплекс , образованный мальтодекстрином Р — = 40 -т- 90), содерн ал сначала ионную группировку 21 з у1 , которая затем, при добавлении иода до окрашивания системы в голубой цвет, изменилась на ЗТ -г/ у — не определен). Гильберт и Марриотт [34] установили также. Что ионные группировки, необходимые для образования голубого комплекса амилозы, содержат минимум три молекулы иода. [c.537]

Метод зонального электрофореза имеет и некоторые недостатки. С его помощью нельзя произвести прямого определения скорости миграции белков. Между исследуемыми белками и поддерживающей средой возможны нежелательные взаимодействия, в результате которых часть белка адсорбируется в среде. Адсорбция происходит сильнее всего на бумаге, менее выражена на ацетат-целлю-лозной мембране и практически ничтожна в агаровом геле. [c.12]

При различных патологических изменениях в организмах часто наблюдаются определенные изменения в составе и электрофоретическом поведении извлеченных из организма белковых смесей. Данные электрофореза, таким образом, существенны при физиологических и клинических исследованиях. Правда, для целей клинической диагностики предпочитают пользоваться простыми и быстрыми методами зонального электрофореза (особенно электрофореза на бумаге). [c.64]

По этим причинам получили широкое распространение методы зонального электрофореза, свободные от указанных ограничений, а в ряде случаев обладающие и более высокой разрешающей способностью (электрофорез в гелях). [c.65]

Этот метод зонального электрофореза был впервые предложен в 1952 г. Кункелем и Слейтером [727] и впоследствии успешно применялся во многих областях, таких, как разделение ли- [c.47]

Анализ полученных препаратов фермента методом зонального электрофореза в полиакриламидном геле обнаруживает единственную отчетливую белковую полосу. [c.13]

Метод зонального электрофореза в градиенте плотности и в гелях описан в ряде работ [83, 535, 536, 802]. [c.25]

Таким образом, метод зонального электрофореза весьма тонкий физический метод исследования свойств и структуры вирусной частицы и служит ценным дополнением к методам ультрацентрифугирования. [c.26]

Однако первая стадия наиболее ответственна, поскольку сама вероятность каталитического акта строго определяется возможностью образования комплекса Михаэлиса. Первично образующееся соединение фермента с субстратом носит название комплекс не вследствие его прямого отношения к классу комплексных соединений, как это понимается в химии, а, скорее, потому, что реальная природа этого соединения пока неизвестна. В огромном большинстве случаев также неизвестны достаточно точно те химические взаимодействия, которые обеспечивают образование комплекса неизвестны и механизмы первичного перераспределения электронов в молекуле субстрата на стадии возникновения первичного комплекса. Более того, до сравнительно недавнего времени мы не имели прямых экспериментальных доказательств реальности существования самих комплексов, которое вытекало в основном из кинетических данных. В 1943 г. были проведены спектральные исследования, свидетельствовавшие о возможности образования промежуточных фермент-субстратных соединений например, в опытах Чанса [13] спектрофотометрическим методом было показано образование комплекса пероксидазы с Н2О2. Были попытки обнаружить фермент-субстратный комплекс методом зонального электрофореза [14]. Однако все эти результаты получены непрямыми методами. В 1963 г. японским авторам Яги и Озава [15] удалось получить прямые доказательства реальности комплекса Михаэлиса. Они выделили стабильный в анаэробных условиях кристаллический комплекс оксидазы D-аминокислот (D-аминокислота О 2 — окси-доредуктаза, КФ 1.4.3.3) с D-аланином (рис. 6). Этот комплекс содержал, помимо апофермента и субстрата, флавинадениндинукле- [c.48]

При зональном электрофорезе необходимо принимать специальные меры для предотвращения конвекционного перемешивания зон. Это достигается применением поддерживающих пористых сред различных гелей, порошков, бумаги и т. д. В последнее время начал распространяться метод зонального электрофореза, в котором роль поддерживающей среды играет так называемый градиент плотности. Поддерживающая среда влияет на скорость электрофоретического перемещения, притом часто неконтролируе- [c.41]

В опытах по регенерации инсулина первостепенное значение имеет предварительное выделение обеих цепей в форме, свободной от взаимного загрязнения. Глицильную цепь очищают методом зонального электрофореза в целлюлозном порошке. Последний сперва промывают 0,1 М лимонной кислотой в 8 7И растворе мочевины, а затем во влажном состоянии выкладывают в виде пластины [c.110]

Принципы метода электрофореза и некоторое применение его при физическом исследовании вирусных частиц были описаны в разделе Физические методы исследования вирусных частиц . Электрофорез применяют также для очистки вирусов. Так, Брекк [218] в 1955 г применил метод зонального электрофореза в градиенте плотности сахарозы для очистки вируса желтой мозаики картофеля, а Крамер и Полсон [271] ддя очистки вирусов животных. Он был успешно использован для очистки вируса энцефалита мышей [224], полиомиелита [650], энтеровирусов человека 652], вируса лихорадки долины Ряфт 503] и вируса 5GB0 [655]. Однако этот очень ценный метод не нашел еще широкого применения в вирусологической практике, по-видимому, из-за некоторых технических трудностей. [c.85]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология