Фракционирование пептидов на смоле дауэкс

Оптимальные условия разделения пептидной смеси, даже содержащей пептиды с известной структурой, подбирают опытным путем. Так, сравнивают эффективность разделения кислотных и основных пептидов на катионитах и анионитах. Фракционирование на смоле дауэкс-1 в значительной степени определяется суммарным зарядом пептидов, разделение на дауэксе-50 идет по более сложному механизму. Поэтому нейтральные пептиды предпочитают фракционировать на дауэксе-50. [c.403]

Фракционирование пептидов на смоле дауэкс 50-Х2 [c.404]

Сложную смесь пептидов приходится фракционировать по крайней мере в две стадии вначале на катионите, а затем на анионите. Такая последовательность удобна с практической точки зрения. При разделении на смоле даузкс-50 повторный эксперимент проводят на свежеприготовленной колонке, так как на последней стадии фракционирования смола дает усадку. Дауэкс-1 можно регенерировать непосредственно в колонке. На практике готовят две колонки на первой (дауэкс-50) ведут первичное фракционирование, на второй (дауэкс-1) разделяют отдельные фракции. Конечно, в случае необходимости первичное фракционирование можно вести и на дауэксе-1. [c.404]

Колоночная хроматография на иопообмеиных смолах применяется также и для фракционирования пептидов. После первых относительно малоуспешных работ по разделению пептидов на смоле Дауэкс 50X8 стали использовать для этих целей менее сшитую смолу Дауэкс 50X2, пористость которой лучше соответствовала размерам молекул пептидов. На этой смоле был проведен ряд успешных работ Хирса, Мура и Штейна [36, 37] по разделению ферментативных гидролизатов окисленной рибонуклеазы. Однако общим недостатком этих работ являлось использование солевых буферных растворов, что приводило к необходимости их последующего удаления из элюатов. Последнее осуществлялось или путем динитрофенилирования и экстракции полученных ДНФ-производных пептидов с помощью органических растворителей [38], или путем использования в качестве буферов растворов ацетата или формиата аммония, которые удалялись сублимированием или заменой натрия в элюатах на аммоний путем ионного обмена на сильно сшитой смоле в аммониевой форме с последующим удалением аммониевых солей путем сублимации [39]. [c.169]

В результате расщепления белка или полипептида, каким бы методом оно ни осуществлялось, всегда образуется смесь пептидов. В среднем наиболее короткие пептиды получают при химотрипсиновом гидролизе, а наиболее длинные — при обработке бромистым цианом (так как содержание метионина в большинстве белков очень мало по сравнению с суммарным содержанием крупных гидрофобных аминокислот). При фракционировании смесей пептидов наилучшие результаты дает метод ионообменной хроматографии на колонках. Если для разделения используют смолу дауэкс I или другую, сходную смолу основного характера, а для элюции — ниридин-ацетатный буфер с постепенно понижающимся значением pH (8—3), то первыми с колонки выходят основные пептиды наиболее кислые выходят последними (фиг. 12). Обратный порядок элюции имеет место при [c.72]

Элюирование пептидов с колонки, заполнетюй смолой дауэкс-50 (сульфополистирол), осуществляется с номон ью повышающегося градиента рИ и концентрации пиридина [58, -бО] (детали приведены в табл. 10.5). При pH 2 карбоксильные группы С-концевых остатков и боковых ценен аспарагиновой и глутаминовой кислот протонированы, как и Ы-концевые аминогруппы п боковые цепи аргинина, лизина, гистидина. В этих условиях пептиды сорбируются на сульфогруппах смолы. При повышении pH карбоксильные группы ионизируются и пептиды отделяются от смолы. Таким образом, фракционирование пептидов [c.355]