Определение изоэлектрической точки белков

Табл. I. Определение изоэлектрической точки белка

Таблица 1. Шкала для определения изоэлектрической точки белка

Рис. 7.10. Вид графика, иллюстрирующего метод экспериментального определения изоэлектрической точки белка.

Среди высокомолекулярных соединений важное место занимают белки. Они играют основную роль во всех жизненных процессах, а продукты их переработки — в технике и производстве. Белки являются полимерными электролитами, так как их молекулы содержат ионогенные группы. Поэтому растворы белков имеют целый ряд особенностей по сравнению с растворами других полимеров. В состав молекул белков входят разнообразные а-аминокислоты, в общем виде формула их строения может быть записана в форме КНг — К — СООН. В водном растворе макромолекула представляет амфотерный ион КНз — К — СОО . Если числа диссоциированных амино- и карбоксильных групп одинаковы, то молекула белка в целом электронейтральна. Такое состояние бедка называют изоэлектрическим состоянием, а соответствующее ему значение pH раствора — изоэлектрической точкой (ИЭТ). Чаще всего белки — более сильные кислоты, чем основания, и для них ИЭТ лежит при pH < 7. При различных pH изменяется форма макромолекул в растворе. В ИЭТ макромолекулы свернуты в клубок вследствие взаимного притяжения разноименных зарядов. Б кислой и щелочной средах в макромолекуле преобладают заряды только одного знака, и вследствие их взаимного отталкивания молекулы распрямляются и существуют в растворе в виде длинных гибких цепочек. Поэтому практически все свойства растворов белков проходят через экстремальные значения в изоэлектрическом состоянии осмотическое давление и вязкость минимальны в ИЭТ и сильно возрастают в кислой и щелочной средах вследствие возрастания асимметрии молекул, минимальна также способность вещества к набуханию, оптическая плотность раствора в ИЭТ максимальна. Изучение всех этих свойств используется для определения изоэлектрической точки белков. [c.443]

Определение изоэлектрической точки белка удобно произвести на примере желатина. [c.32]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОЙ ТОЧКИ БЕЛКА [c.30]

Работа 94, Определение изоэлектрической точки белков (желатина) методом коагуляции [c.154]

Определение изоэлектрической точки белка. Белки являются а фотерными электролитами, т. е. они могут диссоциировать как кислот и как основания. Часть молекул белка в воде находится в ионизироваь ной форме, в виде биполярных ионов (амфионов). Ионы Н+ (протоны освобождающиеся в результате диссоциации кислотной группы, npi соединяются к NHa-rpynne, и таким образом молекула белка перехс дит в ионизированную форму [c.36]

Определение изоэлектрических точек белков, разделенных методом изоэлектрического фокусирования в геле. Чтобы определить изоэлектрическую точку белка, необходимо измерить pH содержащего его участка геля. [c.158]

Первоначально электрофорезом пользовались для определения изоэлектрической точки белков и их подвижности при различных значениях pH. Аппарат состоял из простой и-образной трубки, в которую помещали раствор испытуемого белка, забу-ференного до определенного pH. Безбелковый раствор того же буфера осторожно наслаивали на белковый раствор. Оба колена и-образной трубки соединяли с неполяризующимися электродами и наблюдали за движением границы белок—буфер под действием постоянного тока при напряжении около 100 в (фиг. 12) [c.89]

По этим соображениям становится понятной важность точного определения изоэлектрической точки белка, однако, поскольку связывание различного рода ионов (особенно многовалентных и органических) значительно изменяет положение изоэлектрической точки белка, она не является постоянной величиной. Для обозначения pH чистого белка в свободной от солей воде употребляется термин изоионная точка (р1). Прямое определение этой константы трудно, а часто и невозможно, осуществить, так как многие белки в отсутствие солей нерастворимы кроме того, проводимость обессоленных растворов крайне низка. Обычно изоионную точку определяют косвенно — путем измерения изоэлектрической точки при различных концентрациях нейтральных солей и экстраполяции к нулевой концентрации [38, с. 122]. К сожалению, в различных источниках наблюдается значительный разброс величин р1 для БСА, например, от 4,7 [94, с. 318] до 5,3 [95, с. 55]. [c.550]

В предыдущем разделе было указано (см. также стр. 221), что белки соединяются не только с ионами водорода, но также и с другими ионами, присутствующими в растворе, и что это явление оказывает влияние на электрометрическое титрование и определение изоэлектрической точки белков. Соединение белка с другими ионами обусловлено электростатическими силами ионизированных групп аниопы связываются с положительно заряженными группами белка, в то время как катионы притягиваются отрицательно заряженными группами СОО. Связывание посторонних ионов белковыми молекулами имеет огромное биологическое значение, так как часть неорганических ионов, присутствующих в тканевых жидкостях, связана именно таким образом. [c.86]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология