Кривые зависимости активности холинэстераз от

Кривые зависимости активности холинэстераз от pH [c.300]

Рис. 1. Кривые зависимости активности от р5 при гидролизе ацетилхолина под действием холинэстераз [17а].

Здесь нужно подчеркнуть, что это различие систематически проявляется только по отношению к холиновым эфирам. Для других субстратов оба типа холинэстераз могут обнаружить ту или другую форму кривой зависимости активности от р5. [c.295]

Величину навески и разведение следует выбирать с таким расчетом, чтобы количество определяемого препарата в пробе соответствовало той части кривой, где наиболее четко выражена зависимость степени угнетения активности холинэстеразы от концентрации токсиканта. [c.132]

Из кривых зависимости активации от pH и свойств катионных ингибиторов в отношении обоих типов холинэстераз следует, что их активные поверхности весьма сходны. В чем же тогда причина различной избирательности обоих ферментов по отношению к субстрату [c.313]

ЯВЛЯЮТСЯ функцией р5 = —lg концентрации субстрата и обнаруживают коренное различие между ферментами обоих типов. Для истинного типа холинэстеразы кривая зависимости активности от р5 имеет колоколообразную форму, что указывает на автоингибирование при высоких концентрациях субстрата [18]. В случае псевдофермента эта зависимость изображается 5-об-разной кривой в результате того, что максимальная скорость не только достигается при оптимальной концентрации субстрата, но и сохраняется столь же высокой при больших концентрациях. [c.295]

В этой связи наиболее важные сведения были получены при изучении влияния pH на ферментативную активность. На рис. 2 представлены кривые зависимости активности от pH для истинной холинэстеразы (из Torpedo marmorata) и псевдохолинэстеразы (из сыворотки крови человека) с ацетилхолином в качестве субстрата. Обе кривые отличаются не только друг от друга, но также и от кривых, характерных для иных, неспецифичных эстераз [37]. Для правильной интерпретации таких кривых важно быть уверенным, что в комплексе фермент—субстрат только белок изменяется с изменением pH. Это как раз и имеет место в случае гидролиза ацетилхолина. Поэтому обе ветви колоколообразных кривых на рис. 2 могут быть интерпретированы как кривые титрования компонентов эстеразного активного центра. Наконец, должны присутствовать группы, одна с р/С порядка 5,8—7,0, а другая с р/С 8,5—9,5, причем первая группа является более обычной для всех эстераз, чем вторая. [c.301]

Рис. 5. Кривая зависимости активности от pH в системе холинэстераза из плазмы крови человека — ацетилтиохолин.

Интерпретация кривых зависимости активности истинной холинэстеразы и псевдохолинэстеразы от р5 [c.319]

Однако, как видно на рис. 2, эта кривая имеет растянутый максимум, расположенный между pH 7,5 и 9 (это справедливо для аце-тилхолинэстеразы, а не для сывороточной холинэстеразы) и совсем не похожа на кривую зависимости ингибирующей активности ТЭПФ от pH (см. рис. И, стр. 102). Как показали Бергманн и Шимони [14], это объясняется тем, что анионный центр так же, как и эстеразный, чувствителен к изменению pH, а основное отличие во взаимодействии этих двух веществ с активной поверхностью фермента заключается в том, что ацетилхолин реагирует с обоими центрами, а ТЭПФ только с эстеразным. Для подтверждения своей точки зрения они исследовали действие четырех ингибиторов, имеющих четвертичный атом азота, два из которых не могли реагировать с эстеразным центром, и обнаружили лишь небольшое изменение степени угнетения при возрастании pH от 7 однако при понижении pH угне- [c.31]

Способность тормозить ложную холинэстеразу изучалась на очищенной холинэстеразе сыворотки лошади но константе скорости ингибирования (ЛГп) (Яковлев и Волкова) и на неочищенной сыворотке но /50 (Фруентов). Действие на истинную холинэстеразу определялось на дефибрини-рованной крови коровы по /go (Фруентов). Данные представлены на рис. 3. Жирными линиями изображены данные, относящиеся к сульфониевым соединениям, тонкими — к соответствующим их аналогам с сульфидной серой. На рисунке видно, что все жирные линии легли выше, чем тонкие, т. е. появление заряда на любом расстоянии от эфирной серы усиливает антихолинэстеразное действие по всем показателям. Однако в зависимости от положения заряда это усиление выражено в разной стенени. Рассмотрим жирную и тонкую кривые для констант скорости ингибирования, полученных с очищенным энзимом. Максимальное увеличение (приблизительно в 400 раз) отмечено нри появлении заряда на расстоянии одной метиленовой группы от эфирной серы. При расстоянии в две метиленовые грунны увеличение уже несколько слабее выражено. При трех и особенно при четырех метиленовых группах—еще слабее. При расстоянии в четыре метиленовые группы сульфониевое соединение только в 7 раз активнее соответствующего сульфидного. [c.409]

Калибровочная кривая потенциал электрода — концентрация холинэстеразы была получена в оптимальных условиях (рис. 17.1), т. е. при концентрации субстрата АТС 2-10 моль/л в 0,5 М фосфатном буферном растворе. При низкой концентрации ффмента разность потенциалов АЕ пропорциональна его активности, в то время как при высокой концентрации фермента наблюдается экспоненциальная зависимость [622]. [c.204]

Хотя результаты многих опытов указывают на полную обратимость ингибирования холинэстеразы под действием таких карбаматов, как эзерин, простигмин и карбаминохолин, существуют немногочисленные данные, свидетельствующие о том, что процесс, хотя бы частично, может быть необратимым. Так, Коен и его сотрудники [51] нашли, что холинэстеразы после ингибирования эзерином необходимо диализовать в течение нескольких часов, прежде чем их активность начнет восстанавливаться. Аналогичным образом, в опытах по разбавлению с истинной холинэстеразой, выделенной из мозга крыс и ингибированной эзерином, было обнаружено, что большая часть утраченной активности оставалась нерегенерированной. Майерс и Кемп [20] показали, что расщепление диалкилкарбамоилфто-рида под действием холинэстераз очень похоже на гидролиз ОРР, т. е. ингибирование происходит медленно и регенерация ингибированного фермента изображается экспоненциальной кривой. На основании этих данных создается впечатление, что карбаматное ингибирование протекает через начальную обратимую стадию с образованием конечного необратимого соединения (например, серинкарбамата). Указания многих авторов, что эзерин и простигмин ведут себя как обратимые ингибиторы, могут быть объяснены тем, что были выбраны неблагоприятные условия реакции. Поскольку необратимая реакция является очень медленной, а самопроизвольная диссоциация комплекса фермент-ингибитор происходит довольно быстро (в зависимости от характера алкильных групп [52]), то опыты в малом интервале времени не могут дать необходимых сведений. [c.308]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология