Пример определения последовательности аминокислот в пептидах

В книге изложены современные химические методы, применяемые в исследованиях по биохимии белка. В сжатой форме автор дает описание различных методов и на конкретных примерах показывает возможности их успешного использования. Большое внимание уделяется описанию методов исследования состава и структуры индивидуальных белков хроматографии на бумаге, ионообменной хроматографии аминокислот и пептидов (на смолах), высоковольтного электрофореза на бумаге, определения последовательности аминокислот в белках и др. Описание отдельных методов сопровождается большим числом иллюстраций, изображающих используемую аппаратуру. [c.4]

Перечисленные методы определения аминокислотных последовательностей в пептидах и белках громоздки и, как правило, связаны с большим расходом вещества. В связи с этим в последние годы усилия многих ученых направлены на поиски новых подходов к решению этой проблемы. Существенным вкладом явилось появление секвенатора Эдмана (см. стр. 75). Кроме того, плодотворно развивается масс-спектрометрический метод изучения последовательности аминокислот в пептидах и низкомолекулярных белках. Возможность применения этого метода была подтверждена на примере синтетических олигопептидов Было установлено, что [c.85]

Итак, после расщепления полипептидной цепи каким-либо энзимом (например, трипсином) и разделения продуктов гидролиза перечисленными методами можно получить большое количество гомогенных пептидных фрагментов. Затем следует определить аминокислотную последовательность в этих фрагментах. Если пептиды короткие, то эта задача выполняется сравнительно легко, путем определения аминокислотного состава и последовательности нескольких аминокислот с К- или С-конца фрагмента. Если же пептид состоит из большого числа аминокислот, то его приходится дополнительно расщеплять на более мелкие участки с помощью второго протеолитического фермента (например, химотрипсина). Дозируя глубину расщепления в каждом опыте путем подбора длительности реакции, величины pH и температуры, можно получить ряд пептидов различного размера, причем многие из них будут частично перекрывать друг друга. Сопоставляя эти фрагменты, можно воспроизвести последовательность аминокислотных остатков в исходном большом пептиде. Конкретный пример такого анализа приводится ниже. [c.84]

ПРИМЕР ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ АМИНОКИСЛОТ В ПЕПТИДАХ [c.492]

Замена всего одной аминокислоты на другую в линейной последовательности из 100 и более аминокислот может привести к снижению или полной потере биологической активности пептида, а это повлечет за собой весьма серьезные последствия (в качестве примера можно привести серповидноклеточную анемию см. гл. 6). Многие наследуемые нарушения метаболизма обусловлены именно одиночными заменами такого типа. С развитием новых мощных методов определения структуры белков и ДНК удалось выяснить биохимическую основу многих наследуемых болезней, связанных с нарушениями метаболизма. [c.34]

Под первичной структурой подразумевают определенную последовательность фрагментов аминокислот в полипептидной цепи Как отмечалось выше, в отличие от полисахаридов, составленных из фрагментов одного (иногда 2-3) моносахарида, полипептиды содержат фрагменты до 22 разных аминокислот Представление о возможных комбинациях фрагментов в полнпептидных цепях дают следующие примеры Так, если из остатков разных аминокислот составить комбинации, в которых при одинаковом конечном числе фрагментов меняется только порядок их расположения, то число комбинаций составит из 5 аминокислот — 20 комбинаций, из 8 — свыше 40 тысяч, из 12 — около 500 млн, для пептида, состоящего из 15 аминокислотных остатков 22 различных аминокислот, возможны 22 вариантов Общее число различных белков всех видов живых организмов на Земле составляет величину порядка 10 °-10 , то есть реализуются далеко не все возможные варианты [c.881]

Вейганд и сотр. [17] предлагали проводить десульфирование путем нагревания пептидов с никелем Ренея в 90%-ном метаноле, в результате чего из каждого остатка цистеина образуются производные аланина. Все другие серусодержащие аминокислоты также претерпевают элиминирование серы метионин, например, превращается в а-аминомасляную кислоту. Другим примером из работы Вейганда и сотр. [17] является определение последовательности глутатиона. Тетраэтиловый эфир дисульфида ди-Н-ТФА-глутатиона сначала десульфировали, а затем после частичного гидролиза, метилирования и трифторацетили- [c.148]

Степень рацемизации прн конденсации и стерическую однородность полученного пептида нельзя ставить в непосредственную связь друг с другом. Так, к примеру, считают, что процесс протекает без рацемизации, если в результате операций очистки происходит более или менее полное разделение стереонзомеров. Из большого числа 0Ш1санных тестов рацемизации ясно, что идеального метода определения рацемизации нет. Все химические тесты испытываются на модельных пептидах. Поэтому распространение полученных результатов на огромное множество пептидных последовательностей, полученных нз 20 протеиногенных аминокислот, по меньшей мере спорно. За неимением лучших методов новые методы сочетания следует испытывать на нескольких различных модельных системах. [c.175]

Очевидно, что представленные структуры гомологичны друг другу, но проявляют при этом различные активности. Не только удаление части полипептидной цепи, но и замена одного аминокислотного остатка другим в пределах определенной аминокислотной последовательности может привести к изменению смысла сигнала на противоположный в частности, ингибирующий сигнал YY становится стимулирующим при замене нескольких аминокислот. В то же время некоторое удлинение пептида на С-конце позволяет существенно пролонгировать его действие при сохранении специфической активности, что было показано на примере АКТГ4 [о и тафцина (Пономарева-Степная и др., 1984 По-таман и др., 1992). Создается впечатление, что N-конец НП более семантически значим, чем участки его С-конца. [c.68]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология