Присоединение первой аминокислоты к полимеру-носителю

Присоединение первой аминокислоты к полимеру-носителю [c.77]

Весьма перспективным методом синтеза пептидов является твердофазный метод, заключающийся в присоединении карбоксильной группы аминокислоты к нерастворимому полимеру посредством сложноэфирной связи. Затем к первой аминокислоте присоединяют следующую, предварительно отщепив защитную группу В результате образуется дипептид, по-прежнему присоединенный к носителю. Такие циклы можно повторять многократно, получая полипептиды необходимой длины. [c.24]

Тот факт, что все операции твердофазного пептидного синтеза проводятся в одном сосуде (после присоединения первой аминокислоты к носителю) и что эти операции включают только подачу жидкости, перемешивание и удаление жидкости фильтрованием, позволяет провести автоматизацию системы. Прибор, который автоматически осуществляет все эти операции, описан в работе [81] и за последние 3 года был использован для синтеза многих пептидов. Этот прибор, будучи загружен аминоацилированным полимером и снабжен запасом растворителей, реагентов и растворов БОК-аминокислот, может работать без присмотра в течение 24 час, и за это время удлинить пептидную цепь на полимере-носителе на 6 аминокислотных остатков. После того как аминокислотные резервуары будут промыты и заполнены растворами шести новых аминокислот, прибор может продолжать синтез в течение следующих 24 час. Прибор можно отрегулировать на программу с использованием карбодиимида или на программу с применением активированных эфиров каждому типу синтеза соответствуют различные программирующие барабаны. Этот прибор обеспечивает большой выигрыш во времени, особенно при синтезе длинноцепочечных пептидов. [c.156]

В первоначальном синтезе тетрапептида [71] кар-бобензоксигруппу на каждой стадии синтеза удаляли действием безводного бромистого водорода в уксусной кислоте (рис. 7), который обычно расщепляет бензиловые эфиры и поэтому отщепляет аминокислоту от обычного полимерного носителя. Для предотвращения этого нежелательного процесса отщепления Мэррифилд перед присоединением первой аминокислоты нитровал хлорметилированный полимер. Нитробензиловый эфир, который образуется при этерификации карбобензоксиаминокислпты нитрованным хлорметалированным полимером, устойчив к действию бромистого водорода в уксусной кислоте. Конечный [c.40]

Поскольку бромистый водород довольно плохо растворим в трифторуксусной кислоте, процесс отщепления проводят обычно, пропуская слабый ток безводного бромистого водорода в суспензию пептидил-полимера в трифторуксусной кислоте в течение 60— 90 мин. Отделение пептидов этим методом осуществляется превосходно. Так, при синтезе аналогов брадикинина выход очищенных пептидов составил 85% в расчете на первую аминокислоту, присоединенную к полимеру [128]. Выходы других пептидов колебались в пределах от 85 до 50%. Естественно, что выход снижается, если на какой-либо стадии реакция протекает неполно. Нельзя определять выход пептида после отщепления его от полимерного носителя по сухому весу неочищенного продукта, так как упомянутый реагент отщепляет от полимера также значительное количество непептидного материала, обычно нерастворимого в воде. Этим веществом непептидной природы, как правило, пренебрегают, поскольку его легко удалить любыми методами очистки. Хотя природа его подробно не исследована, можно предполагать, что это вещество представляет продукт разложения самого полимера. Было показано, что отщепление не вызывает перехода а-связи остатка аспарагиновой кислоты в ангиотензине в р-связь [65], хотя при получении одного пептида, содержащего связь остатка аспарагиновой кислоты с остатком серина, был получен в результате промежуточной циклизации р-аспарагиновый пептид [75]. Некоторые исследователи сомневаются в правильности и необходимости длительного отщепления. Почти все пептиды, которые можно отщепить от полимера, отделялись, в конечном счете, в первые несколько минут [30, 65] (см. стр. 88), а при отщеплении ангиотензина [65] в течение более 5 мин получали вещество, которое не расщеплялось лейцинаминопептидазой, хотя электрофоретически оно отличалось от р-аспарагинового пептида. Для отщеп- [c.34]

Два главных препятствия до сих пор ограничивают пределы возможностей автоматического ЖФ-метода Эдмана [32]. Первой проблемой является перенос остаточных аминокислот на каждый последующий цикл. Это явление происходит как из-за неполного присоединения реагента к белку, так и из-за неполного отщепления модифицированной N-концевой аминокислоты в виде 2-анилинотиазолинона другая проблема заключается в том, что па стадии кислотной обработки карбамоилпеп-тида (белка) происходит расщепление внутренних неустойчивых пептидных связей, приводящее к появлению новых полипептидных цепей, т. е. новых последовательностей. В результате этих двух процессов накопление фона ФТГ-аминокислот достигает такого уровня, что однозначная идентификация последовательности аминокислот основной цепи становится невозможной, Для снижения уровня остаточных пиков было предложено проводить и конденсацию, и отщепление АТЗ дважды в каждом цикле [31]. Однако такое изменение стандартной методики приводит к большим потерям пептида (вымывание из реактора). Для снижения этих потерь в реактор добавляют носители-белки или органические полимеры [78, 92], но, к сожалению, белки подвержены ацидолизу, в результате чего возникают ложные последовательности. Для снижения уровня остаточных аминокислот, появляющихся в результате неполного взаимодействия ФИТЦ с полипептидами (особенно если Pro—N-концевой остаток), повышают температуру реактора до 55°С [94]. [c.456]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология