Отбор рекомбинантов

ОТБОР РЕКОМБИНАНТОВ. ГЕНЕТИЧЕСКИЕ КАРТЫ [c.305]

Таким образом, с помощью данной конструкции можно проводить клонирование, секвенирование и экспрессию генов под контролем сильных промоторов, а также прямой отбор рекомбинантов и сайт-специфический мутагенез. [c.154]

Последняя величина измеряется независимо в той же серии экспериментов путем отбора рекомбинантов по двум признакам Ad+Sm . С помош,ью этой величины мы и производим нормировку вероятности. Поделив на нее измеренную вероятность сложного события, получаем искомую величину — вероятность рекомбинации между точками z и Ad. Таким способом мы избавляемся одним ударом от всех трудноизмеримых величин — от вероятности конъюгации а и вероятности пропикновепия локуса в зиготу w х). Все эти параметры автоматически исключаются, когда мы делим вероятность сложной рекомбинации на T Ad-sm- На рпс. 110 нанесены расстояния в рекомбинационных единицах, а в табл. 18 приведены результаты генетических экспериментов (многократных рекомбинаций), на основании которых эти расстояния вычислены. [c.331]

С этой целью они смешивали культуры Hfr- и F -бактерий в соотношении 1 клетка Hfr-штамма на 10 Р -клеток (при плотности примерно 10 бактерий в 1 мл) и инкубировали смесь в течение различных периодов времени. Из инкубационной смеси брали пробы, разводили их и высевали на минимальный глюкозный агар, содержащий метионин и стрептомицин (для отбора рекомбинантов Thr+ Leu" Str ), или на минимальный га-лактозный агар, содержащий треонин, лейцин, метионин и стрептомицин (для отбора рекомбинантов Gal Str ). Полученный ими результат показан прерывистой линией на фиг. 110. Как видно из этого графика, число рекомбинантов возрастает прямо пропорционально времени, прошедшему с момента, когда родительские культуры были смешаны, и до образования плато, что наступает примерно через 1 ч, когда на 100 клеток Hfr насчитывалось 18 рекомбинантов Thr Leu" Str и 5 рекомбинантов Gal+ Str Это значение максимальной частоты рекомбинации, очевидно, b JIOO раз превышает те значения, которые были получены ранее Кавалли и Хейсом в скрещиваниях с Hfr-штаммами, и, следовательно, показывает, что более 10% клеток любой популяции Hfr способны переносить часть своего генетического материала в реципиентную F"-клетку. Сплошной линией на фиг. ПО показаны результаты примерно такого же-опыта по изучению кинетики переноса генов. Однако в этом случае в метод была внесена небольшая, но чрезвычайно важная модификация пробы из конъюгационной смеси клеток Hfr и F, так же как и в первом случае, разводили через определенные промежутки времени после начала контакта между родительскими клетками, но перед высевом на селективный агар разведенные пробы в течение 2 мин перемешивали в смесителе Уоринга. Под действием возникающего в жидкости срезывающего уси- [c.223]

Для выполнения этого теста штамм AF Mef высевали в очень незначительной концентрации (250 клеток/мл) в минимальную среду, содержащую ограниченные количества метионина. Половину этой суспензии делили на 50 небольншх частей и как эти части, так и остающуюся другую половину культуры инкубировали до тех пор, пока не истощался метионин и плотность во всех культурах не достигала примерно 2-10 клеток/мл. Содержимое каждой индивидуальной культуры, а также 50-кратное количество общей культуры смешивали с избытком бактерий из культуры штамма ВР Thr" Leu Str и производили отбор рекомбинантов Thr+ Leu" Str в каждом из этих 100 скрещиваний при высеве на минимальный агар, содержащий метионин и стрептомицин. Общин результат такого флуктуационного теста представлен в табл. 15. Можно [c.228]

Технически легкий и селективный перенос космидных клонов (обусловленный использованием упаковки in vivo) удобен для отбора рекомбинантов, поскольку только последовательно- [c.78]

Постановка опыта трансформации (рис. 40). Реципиент — штамм Вас. subtilis Str (сенная палочка, чувствительная к стрептомицину). Донор—ДНК, выделенная из штамма Вас. subtilis Str (устойчивого к стрептомицину). Селективная среда для отбора рекомбинантов (трансформантов) — питательный агар, содержащий 100 ЕД/мл стрептомицина. [c.71]

Трансдукция — это перенос генетической информации от клетки донора к клетке-реципиенту, который осуществляется фагом. Это явление впервые описали в 1952 г. Н. Циндер и Дж. Ледерберг. Оно основано на том, что в процессе размножения фагов в бактериях иногда образуются частицы, которые наряду с фаговой ДНК или вместо нее содержат фрагменты бактериальной ДНК- Такие частицы называются трансдуцирую-щими. По морфологии и адсорбционным свойствам они ничем не отличаются от обычных фаговых вирионов, но при заражении ими новых клеток они передают им генетические детерминанты предыдущего хозяина. Таким образом, чтобы осуществить трансдукцию (или трансдукционное скрещивание), необходимо размножить фаг на клетках штамма-донора, а затем заразить им клетки штамма-реципиента. Отбор рекомбинантов, которые называются здесь трансдуктантами, проводят на селективных средах, где не могут расти исходные реципиентные клетки. [c.98]

Фенотипический отбор рекомбинантов можно осуществлять также либо используя спасение маркера определенных мутантов VA , либо идентифицируя мутантные клоны, возникающие в результате инсерции в целевые вирусные гены чужеродных последовательностей. Так, X. Шида с соавторами в 1987 г. показали, что встройка экзогенных фрагментов в ген гемагглютинина VA может быть выявлена по отсутствию адсорбции куриных эритроцитов в бляшках вариантов НА . [c.393]

Вариант ЛИВП штамма Lister VA на хори-оналлантоисных оболочках куриных эмбрионов образует белые оспины. В лаборатории С. Н. Щелкунова продемонстрировано (1989 г.), что рекомбинант, полученный введением в состав генома гена SPI-2 вируса оспы коров, формирует красные геморрагические оспины. Данный ген также можно использовать в качестве фенотипического маркера для отбора рекомбинантов VA . [c.393]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология