Диэстераза селезенки

Гидролиз РНК диэстеразой селезенки приводит к образованию нуклеозид-З -фосфатов [38]. Следовательно, межнуклеотидная связь имеет характер (С-3 ) — (С-5 ), а не (С-2 ) — (С-5 ). Ферментативное разрушение РНК подробно рассматривается в гл. VI. [c.46]

Так как при ферментативном гидролизе нуклеозид-2, З -цикло-фосфатов не происходит инверсии при атоме Сг-, разрыв связи С —О маловероятен. При проведении гидролиза соответствующих субстратов в присутствии НгО было получено подтверждение разрыва рибонуклеазой и диэстеразой селезенки связи Р — О, т. е. атаки скорее на атом фосфора, чем на атом углерода [145]. [c.386]

Левый конец каждой из помещенных выше схем нуклеиновых кислот обозначим как головное звено, а нуклеозидную компоненту справа — как хвостовое звено. Из рассмотрения описанных выше механизмов очевидно, что хотя при щелочном гидролизе цепь разрывается с образованием нуклеозид-2 - и нуклеозид-З -фосфатов, в случае нуклеиновой кислоты первого типа хвостовое звено появляется в виде свободного нуклеозида, второго типа — головное звено освобождается в виде нуклеозид-2, 5 - и нуклеозид-3, 5 -дифосфатов, а хвостовое звено — в виде нуклеозида, в то время как из нуклеиновой кислоты четвертого типа головное звено освобождается в виде нуклеозид-2, 5 - и нуклеозид-3, 5 -дифосфатов, но не образуется свободного нуклеозида. Нуклеиновая кислота третьего типа дает исключительно нуклеозид-2 - и нуклеозид-3 -фосфаты. Ферментативный гидролиз диэстеразой селезенки (специфичной для эфиров нуклеозид-З -фосфатов) привел бы к тем же результатам. Однако при применении диэстеразы змеиного яда (специфичной для эфиров нуклеозид-5 -фосфатов) можно получить дополнительную информацию. Так, в случае рибонуклеиновой кислоты первого типа из головного звена получается нуклеозид, а из остальной части цепи — нуклеозид-5 -фосфаты из нуклеиновой кислоты второго типа [c.388]

Фиг. и. Участок полинуклео-тпднм цеш1 в молекуле РНК. Гидролиз в щелочной среде или диэстеразой селезенки вызывает разрыв связей, обозначенных буквой X. При гидролизе диэстеразой змеиного яда разрываются связи, обозначенные буквой р. [c.47]

Фиг. 39. Разрушение ДНК под действием ДНК-азы II, а затем диэстеразы селезенки с образованием дезоксирибонуклеозид-З -моиофосфатов.

Известно, что в присутствии только одного меченого трифосфата включение его в ДНК протекает очень медленно (стр. 199). Однако, если радиоактивность этого трифосфата достаточно велика, интенсивность его включения может быть все же точно измерена. Если пометить таким путем ДНК-затравку с помощью только одного С -дЦТФ и затем обработать ее дезоксирибонуклеазой II и диэстеразой селезенки (гл. VI), то 66—70% радиоактивности обнаруживается в виде меченого дезоксхщнтидина (фиг. 72, I), [c.210]

Следует заметить, что в этой схеме предполагается активация молекул воды, так же как и молекул органического субстрата. Гипотетический механизм в общих чертах может быть применен для объяснения действия ряда диэстераз (рибонуклеаза из такадиастазы, диэстеразы селезенки) на РНК (гидролиз до З -фосфатов без промежуточного образования 2, З -циклофосфата) и на 2, З -циклофосфаты (с образованием нуклеозид-2 -фосфатов), а также действия диэстеразы змеиного яда на полинуклеотиды (с образованием нуклеозид-5 - [c.382]

Вопреки имеющимся сообщениям, контролируемое выделение нуклеотидов из полимеров, содержащих несколько различных оснований, было бы более убедительной демонстрацией полезности метода, особенно потому, что помехи, возникающие в результате различных скоростей гидролиза участков с различной пурин-пири-мидиновой последовательностью, искажают, как следовало ожидать, точную интерпретацию. Недостаток действия диэстеразы селезенки заключается в способности фермента катализировать траисферазные реакции, приводящие к синтезу высщих гомологов, а недостаток диэстеразы змеиного яда — в том, что расщепление олигонуклеотидов, содержащих концевой З -фосфат, происходит постепенно, начиная с З -фосфатного конца молекулы, поскольку выделению нуклеозид-3, 5 -дифосфатов предшествует выделение нуклеозидов и нуклеотидов [382]. Даже высокоочищенные препараты диэстеразы змеиного яда сохраняют, по-видимому, некоторую эндонуклеазную активность. Тем не менее постепенное освобождение концевых нуклеотидов оказалось полезным для того, чтобы отличить концевое наращивание от истинного синтеза, когда меченые дезоксинуклеотиды включаются в цепи ДНК [383, 384]. [c.426]

Аналогично полиадениловая кислота расщепляется диэстеразой селезенки (или рибонуклеазой Т2) до смеси аденозин-З -фосфата и устойчивых к ферменту олигонуклеотидов, содержащих исключительно 2 —5 -межнуклеотидные связи. Синтетические гомополимеры инициируют ферментативную полимеризацию нуклеозид-5 -пирофосфатов под действием полинуклеотидфосфорилазы. Не [c.503]

В тех случаях, когда рестриктаза расщепляет ДНК с образованием З -выступающих концов, 5 -киназная метка фрагментов позволяет определить лишь меньшую часть узнаваемой последовательности. Для полной идентификации сайта необходимо провести анализ З -концевой структуры рестриктов. Робертсом [217] было предложено в таких случаях для введения З -концевой метки использовать терминальную трансферазу. Практически этот подход впервые был реализован в опытах по определению специфичности рестриктазы Крп I [274]. Анализ З -меченой ДНК проводится как и в случае 5 -концевой метки, с той лишь разницей, что для получения продуктов частичного гидролиза используются микрококковая нуклеаза и фосфо-диэстераза селезенки, т. е. нуклеазы, расщепляющие ДНК с образованием З -фосфатов. [c.176]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология