Диэстераза змеиного яда

Фиг. 14. Разрушение тетрануклеотида диэстеразой змеиного яда с образованием нуклеозида, содержащего основание Н1, нуклеозид-5 -монофосфатов, содержащих основания Кг и Кз, и нуклеозид-3, 5 -дифосфата, содержащего основание К4.

При обработке тимидин-3, 5 -циклофосфата водным раствором едкого натра в жестких условиях образуется смесь тимидин-3 -(—80 о) и тимидин-5 -фосфатов ( 20 о). Гидролиз под действием диэстеразы змеиного яда протекает довольно медленно, но и в этом случае образуются оба изомерных нуклеотида. В противоположность тимидин-5 -фосфату гликозидная связь в тимидин-3, 5 -цик-лофосфате легко разрывается при кислотном гидролизе. Был также обнаружен гипсохромный сдвиг максимума в ультрафиолетовом спектре поглощения [77]. [c.136]

Неспецифическая диэстераза змеиного яда, атакует ДНК и РНК. Реакция идет с обязательным участием свободной З -ОН-группы Е. Расщепление в точках Ь осуществляется [c.167]

Диэстераза змеиного яда гидролиз [c.343]

I из поджелудочной железы или диэстеразы змеиного яда), то освобождаются У- или 5 -нуклеотиды, Эти дезоксирибонуклеотиды соединены в нуклеиновых кислотах в длинные цепи. В ДНК молекулы пентозы чередуются с молекулами фосфорной кислоты с каждым сахаром связано одно из четырех оснований. Такая полинуклеотидная цепь не одинакова в обоих направлениях, т.е. обладает полярностью на одном ее конце находится фосфатная группа в положении 5, а на другом-свободная гидроксильная группа в положении 3. [c.34]

Фиг. 38. Разрушение ДНК под действием ДНК-азы I, а затем диэстеразы змеиного яда с образованием дезоксирибонуклеозид-5 -монофосфатов.

Расщепление цепи в точке а под действием диэстеразы змеиного яда дало бы смесь нуклеозид-б -фосфатов, из которых только АМФ был бы меченым. Щелочной гидролиз или гидролиз диэстеразой из селезенки (в точках Ь) дал бы такую смесь нуклеозид-З -фосфатов, в которой радиоактивной была бы часть каждого из нуклеотидов. [c.254]

Левый конец каждой из помещенных выше схем нуклеиновых кислот обозначим как головное звено, а нуклеозидную компоненту справа — как хвостовое звено. Из рассмотрения описанных выше механизмов очевидно, что хотя при щелочном гидролизе цепь разрывается с образованием нуклеозид-2 - и нуклеозид-З -фосфатов, в случае нуклеиновой кислоты первого типа хвостовое звено появляется в виде свободного нуклеозида, второго типа — головное звено освобождается в виде нуклеозид-2, 5 - и нуклеозид-3, 5 -дифосфатов, а хвостовое звено — в виде нуклеозида, в то время как из нуклеиновой кислоты четвертого типа головное звено освобождается в виде нуклеозид-2, 5 - и нуклеозид-3, 5 -дифосфатов, но не образуется свободного нуклеозида. Нуклеиновая кислота третьего типа дает исключительно нуклеозид-2 - и нуклеозид-3 -фосфаты. Ферментативный гидролиз диэстеразой селезенки (специфичной для эфиров нуклеозид-З -фосфатов) привел бы к тем же результатам. Однако при применении диэстеразы змеиного яда (специфичной для эфиров нуклеозид-5 -фосфатов) можно получить дополнительную информацию. Так, в случае рибонуклеиновой кислоты первого типа из головного звена получается нуклеозид, а из остальной части цепи — нуклеозид-5 -фосфаты из нуклеиновой кислоты второго типа [c.388]

В 1958 г. Хорана предложил для последовательной деструкции цоли-дезоксирибонуклеотидов использовать избирательный ферментативный гидролиз. Были найдены два специфических фермента, которые избирательно расщепляли 3 -5 -связь дизамещенного эфира по месту связи Ссз)—О или С сз)—С ("5) — О. Фосфодиэстераза селезенки расщепляла эту связь по месту С(5)—О, оставляя С (з)-фосфат, диэстераза змеиного яда — связь С (3) —О, оставляя С (5)-фосфат. Так как в полимерной цепи ДНК или соответствующего олигонуклеотида с одного края всегда находится нуклеотид со свободной С (3)-гидроксильной группой, а с другой стороны цепь заканчивается нуклеотидом со свободным С (Г)-гидроксилом, то, очевидно, можно, действуя тем или иным ферментом, последовательно разрушать цепь с одного из ее концов, идентифицируя отщепляющиеся мононуклеотиды с помощью бумажной хроматографии. [c.254]

I960)] или панкреатической ДНКазы с последующей обработкой диэстеразой змеиного яда. [c.80]

Применение методов хроматографии на бумаге для быстрого анализа пуриновых и пиримидиновых оснований [76, 77] в гидролизатах небольших количеств рибонуклеиновых кислот вскоре показало, что молярная эквивалентность этих оснований скорее была исключением, чем общим правилом. Еще более важным было наблюдение, что разделение смеси нуклеотидов в щелочном гидролизате рибонуклеиновой кислоты при помощи ионообменной хроматографии дает изомерные пары нуклеотидов, являющихся, как позже было показано, нуклеозид-2 - и пуклеозид-З -фосфатами [78]. Хотя эти изомеры не подвергались взаимопревращению в щелочи, кислота легко катализировала миграцию фосфатного остатка между 2 - и З -гидроксильными группами. Таким же методом были обнаружены 5 -фосфаты аденозина, цитидина, гуанозина и уридина (среди прочих продуктов) после гидролиза кишечной фосфодиэстеразой рибонуклеиновых кислот, предварительно обработанных рибонуклеазой [79]. Со значительно более высокими выходами нуклео-зид-5 -фосфаты получены при действии диэстеразы змеиного яда на рибонуклеиновые кислоты из дрожжей и печени теленка гидролизаты содержали также свободные нуклеозиды и нуклеозид-2 (3 ),5 -ди-фосфаты [80]. [c.373]

Рибонуклеозид-2 - и рибонуклеозид-З -фосфаты получают, подвергая РНК щелочному гидролизу и разделяя образующиеся нуклеотиды при помощи ионообхмепной хроматографии. Гидролиз РНК под действием диэстеразы змеиного яда (стр. 92) приводит к образованию нуклеотид-5 -фосфатов, которые могут быть разделены хроматографически с использованием вспомогательной шкалы. Нуклеозид-5 -фосфаты можно выделить также из кислоторастворимой фракции животных тканей. В большинстве тканей содержание нуклеотидов аденина значительно выше, чем нуклеотидов других оснований. [c.26]

Не участвуют в межнуклеотидных связях, но-видимому, и гидроксильные группы, поскольку, по данным электрометрического титрования, эти группы не замещены. Уже в ранней работе Гулланда и Джексона было высказано предположение, что меж-нуклеотидные связи расположены при С-5. Это подтвердили Кон и Волкин [371, которые нри обработке РНК диэстеразой змеиного яда получили смесь 5 -фосфатов всех 4 нуклеозидов и хроматографически их разделили. [c.46]

Фиг. и. Участок полинуклео-тпднм цеш1 в молекуле РНК. Гидролиз в щелочной среде или диэстеразой селезенки вызывает разрыв связей, обозначенных буквой X. При гидролизе диэстеразой змеиного яда разрываются связи, обозначенные буквой р. [c.47]

Изучение продуктов постепенного разрушения s-PHK диэстеразой змеиного яда привело к заключению, что 5-рибозилурацил [c.58]

Диэстераза змеиного яда вызывает гидролиз РНК до нуклео-зид-5 -монофосфатов (фиг. 36), начиная от З -гидроксильного конца цепи. Она гидролизует также олигонуклеотиды, образующиеся в результате действия дезоксирибонуклеазы I на ДНК, при-водя к образованию дезоксирибонуклеозид-5 -фосфатов (фиг. 38). Наличие концевых З -фосфорильпых групп придает субстрату устойчивость. [c.92]

Фиг. 72. Концевое и неконцевое включение одной молеку.чы дЦМФ. Диэстераза из селезенки разрывает связь в точке Ь, диэстераза змеиного яда —

Добавление некоторого ограниченного числа нуклеотидных единиц к концу молекулы имеющегося полирибонуклеотида не может рассматриваться как полинуклеотидный синтез. Тем не менее эта реакция близка к нему, имеет большое значение и хорошо сейчас изучена. В 1956 г. было показано, что в присутствии фосфорилирующей системы Р -аденозин-5 -мопофосфат целиком включается в РНК в цитоплазме печени крыс [149]. После гидролиза диэстеразой змеиного яда был получен меченый 5 -АМФ, а после щелочного гидролиза — меченые цитидип-2 - и цитидин-З -монофосфаты. Это говорит о том, что в РНК АМФ преимущественно присоединяется к ЦМФ. Подобные наблюдения на различных биологических объектах были проведены многими исследователями. Эти данные наряду с данными о том, что основная часть включенного аденина освобождается после щелочного гидролиза в виде нуклеозида, свидетельствуют о том, что АМФ присоединяется к концу цепи РНК. На важность этих наблюдений впервые обратили внимание Замечник, Хоглэнд и их сотрудники [150—152] в Бостоне, работавшие с растворимой, т. е. транспортной, РНК (s-PHK) цитоплазмы печени крысы. s-PHK отличается от РНК рибосом или микросом своеобразной способностью акцептировать нуклеотиды, присоединяясь к ним своей концевой группой, Такое присоединение нуклеотидов к концу цепи РНК обязательно предшествует прикреплению аминокислот в процессе биосинтеза белка. Все s-PHK из тканей животных, дрожжей и бактерий ведут себя в этом отношении одинаково. [c.251]

Первый нуклеотид, инозиновая кислота (по-гречески — мышечная ткань), был выделен Либихом [2] в 1847 г. из мясного экстракта отчасти как результат полелп1ки, поднятой Берцелиусом по поводу наличия креатина в сыром и вареном мясе). С тех пор было выделено большое число мононуклеотидов, как правило, 5 -фосфаты, хотя в яде тигровых змей и родственных видов был найден также аденозин-З -фосфат 13]. Эти соединения выделяют прямой экстракцией тканей или организмов 14—9], в которых они обычно присутствуют в небольших количествах в качестве промежуточных соеди-нени1 обмена. Однако основным источником мононуклеотидов являются их полимерные производные, нуклеиновые кислоты. При щелочном гидролизе в мягких условиях [10, 11] рибонуклеиновой кислоты образуется смесь 2 - и З -фосфатов нуклеозидов, которую можно легко разделить с помощью ионообменной хроматографии 112], Для выделения аналогичных 5 -эфиров требуется применение ферментативного гидролиза, как правило, с использованием фосфо-диэстеразы змеиного яда 113, 14]. Подобная ферментативная обработка дезоксирибонуклеиновой кислоты после предварительной обработки дезоксирибонуклеазой приводит к дезоксинуклеозид-5 -фосфатаы [15—17]. Очищенная диэстераза змеиного яда значи- [c.123]

Следует заметить, что в этой схеме предполагается активация молекул воды, так же как и молекул органического субстрата. Гипотетический механизм в общих чертах может быть применен для объяснения действия ряда диэстераз (рибонуклеаза из такадиастазы, диэстеразы селезенки) на РНК (гидролиз до З -фосфатов без промежуточного образования 2, З -циклофосфата) и на 2, З -циклофосфаты (с образованием нуклеозид-2 -фосфатов), а также действия диэстеразы змеиного яда на полинуклеотиды (с образованием нуклеозид-5 - [c.382]

Вопреки имеющимся сообщениям, контролируемое выделение нуклеотидов из полимеров, содержащих несколько различных оснований, было бы более убедительной демонстрацией полезности метода, особенно потому, что помехи, возникающие в результате различных скоростей гидролиза участков с различной пурин-пири-мидиновой последовательностью, искажают, как следовало ожидать, точную интерпретацию. Недостаток действия диэстеразы селезенки заключается в способности фермента катализировать траисферазные реакции, приводящие к синтезу высщих гомологов, а недостаток диэстеразы змеиного яда — в том, что расщепление олигонуклеотидов, содержащих концевой З -фосфат, происходит постепенно, начиная с З -фосфатного конца молекулы, поскольку выделению нуклеозид-3, 5 -дифосфатов предшествует выделение нуклеозидов и нуклеотидов [382]. Даже высокоочищенные препараты диэстеразы змеиного яда сохраняют, по-видимому, некоторую эндонуклеазную активность. Тем не менее постепенное освобождение концевых нуклеотидов оказалось полезным для того, чтобы отличить концевое наращивание от истинного синтеза, когда меченые дезоксинуклеотиды включаются в цепи ДНК [383, 384]. [c.426]

После гидрогенолиза бензильной группы и обработки щелочью в очень мягких условиях образовалась смесь продуктов, из которой аденилил-2 5 -уридин (аденозин-2 -уридпп-5 -фосфат) выделяли с помощью ионообменной хроматографии. В противоположность щелочеустойчивому ди(нуклеозид-5 )-фосфату, который был описан выше, этот диэфир обнаружил многие свойства, характерные для рибонуклеиновых кислот. При щелочном гидролизе этого динуклеозидфосфата образуются уридин и смесь аденозин-2 -и аденозин-З -фосфатов ферментативный гидролиз диэстеразой змеиного яда приводит к аденозину и уридип-5 -фосфату а при окислении перйодатом с последующим выдерживанием при pH 10 получаются урацил и аденозин-2 -фосфат [8. [c.477]

Смотреть страницы где упоминается термин Диэстераза змеиного яда: [c.254] [c.75] [c.81] [c.83] [c.86] [c.51] [c.86] [c.210] [c.230] [c.231] [c.317] [c.318] [c.321] [c.321] [c.322] [c.385] [c.389] [c.396] [c.410] [c.424] [c.424] [c.425] [c.443] [c.443] [c.444] [c.478] [c.502]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология