Деполяризация флюоресценции

Необходимо отметить, что использование деполяризации флюоресценции для измерения коэффициентов вращательной диффу- [c.511]

ЗИИ никогда не может быть совершенно однозначным, так как мы не можем в обш,ем случае произвольно пренебрегать возможностью того, что флюоресцирующее место на макромолекуле способно вращаться само, не говоря уже о вращении молекулы в целом. В итоге вероятно, что наиболее плодотворный результат даст применение этого метода совместо с другими методами определения макромолекулярной конформации (т. е. радиуса инерции, вязкости, двойного лучепреломления и т. д.). Деполяризация флюоресценции будет тогда скорее мерой свободы внутреннего вращения, а не мерой общей формы или конформации. [c.512]

Следует отметить, что выводы, сделанные нами на основании вискозиметрических данных, можно подтвердить с помощью ряда других фактов. Например, данные по седиментации и диффузии , приведенные на рис. ПО, подтверждают то же заключение относительно разворачивания молекул сывороточного альбумина в кислом растворе, что и данные рис. 153. Исследуя изменения оптического вращения и деполяризации флюоресценции можно получить другие доказательства. [c.587]

Ценную информацию о молекулярной организации биообъектов и патологических изменениях в тканях, клетках и субклеточных частицах можно получить, измеряя поляризацию люминесценции. При освещении объекта поляризованным светом люминесценция оказывается тоже поляризованной. Степень поляризации флюоресценции (Р)— доля поляризованного света флюоресценции в общей суммарной интенсивности флюоресценции. Если за время жизни возбужденного состояния молекула не успевает повернуться (например, находится в замороженном растворе), то она испустит квант флюоресценции, поляризованный точно так же, как поглощенный квант. Степень поляризации при этом будет максимальной (Ро). В жидких растворах, однако, за время т ориентация молекул успевает измениться и происходит деполяризация. Молекула поворачивается тем быстрее (и тем больше деполяризация), чем меньше вязкость (т ) ее ближайшего окружения. Связь между Р и 11 установлена Перреном и Яблонским [c.40]

Поглощение возбуждающего излучения приводит к изменению электронного состояния в определенном месте поглощающей молекулы, и это в свою очередь приводит к местному изменению дипольного момента в определенном направлении (см. раздел 5г, где рассмотрено соответствующее явление поглощения в инфракрасной области). Если возбуждающее излучение поляризовано, возможность поглощения зависит от ориентации мест поглощения, и она будет максимальной, если направление изменения дипольного момента параллельно направлению колебания вектора излучения Е, и уменьшается до минимального значения, равного нулю, если эти направления перпендикулярны. С другой сторонь, излучение, испускаемое (как флюоресценция) из данного места, будет всегда поляризованным параллельно ориентации изменения дипольного момента. Если, следовательно, все места поглощения в конкретном образце являются неподвижными, так что их ориентации не меняются между поглощением и испусканием, то тогда флюоресцирующее излучение, появляющееся от возбуждения поляризованным светом, будет частично деполяризовано, причем степень деполяризации легко рассчитывается из соотношения между первоначальной ориентацией и поглощающей способностью. [c.511]

В растворах молекул, имеющих поглощающие места, происходит, однако, вращательное движение. Поскольку этот процесс беспорядочный, он ведет к нарушению ориентации флюоресцирующих мест за время, которое проходит между поглощением и излучением, и это в свою очередь ведет к деполяризации флюоресцирующего излучения, которая больше, чем рассчитанная для процесса, описанного в последнем абзаце. Наблюдаемая деполяризация является, таким образом, мерой свободы вращения того места молекулы, которое является ответственным за флюоресценцию. Если молекула жесткая и неспособна к внутренним вращениям, деполяризация, очевидно, становится мерой коэффициентов вращательной диффузии. Детальный анализ такого использования деполяризации был представлен Вебером . Следует заметить, что этот метод может быть применен ие только к макролю-лекулам, которые являются естественно флюоресцирующими, но также к таким, которые могут быть превращены в флюоресцирующие с помощью химической реакции (или адсорбции) с флюоресцирующими молекулами небольшого размера. [c.511]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология