Карбоангидразы методы получения

Существование комплексов с мостиковым металлом также продемонстрировано с помощью рентгеноструктурного анализа (карбоксипептидаза) [23] (гл. 15) и инфракрасной спектроскопии (карбоангидраза) [24] (гл. 16). Однако данные, доказывающие существование мостиковых комплексов, полученные с помощью этих методов, не позволяют установить, участвуют ли такие комплексы в катализе. Выяснить это можно сравнением кинетических и термодинамических свойств мостикового комплекса с аналогичными параметрами, полученными при изучении самих процессов катализа. В связи с этим метод ЯМР имеет существенные преимущества перед другими методами (разд. 2.3). Однако важность этого критерия не может быть преувеличена, поскольку в одном случае был обнаружен комплекс с мостиковым металлом, не принимающий участия в катализе [25]. [c.446]

У разных типов карбоангидразы величина и знак полос эллиптичности для комплексов с этим сульфамидом сильно различаются [30]. Очевидно, это является следствием различной молекулярной структуры областей, окружающих активный центр. К такому же заключению приводят и результаты, полученные методом Я МР с С1 [ 122, 123] и комплексометрическим титрованием [86]. Подобные структурные расхождения могут служить причиной неодинаковой удельной активности у изоферментов и видовых вариантов карбоангидразы [77]. [c.599]

В последние 10 лет в нескольких лабораториях были разработаны методы получения высокоочищенной карбоангидразы из эритроцитов [34—42]. Они заключаются в осаждении гемоглобина смесью хлороформ—этанол [37, 39, 42] с последующей хроматографией на колонке, заполненной ДЭАЭ-целлюлозой [34, 37, 42], ДЭАЭ-сефадексом [43] или гидроксилапатитом [37, 39, 42]. Белок хорошо переносит лиофилизацию, и в большинстве методов она используется на той или иной стадии выделения. Накопленный опыт препаративной работы выявил некоторые особенности методов очистки фермента. Обработка смесью хлороформ—этанол существенно не меняет большинство физико-химических свойств. Но, как показал рентгеноструктурный анализ, воздействие этой смеси на фермент С человека снижает качество кристаллов [22, 23]. Для удаления гемоглобина лучше использовать гель-фильтрацию [37] или хроматографию на ДЭАЭ-сефадексе [43]. Качество кристаллов повышается, если проводится электрофоретическая очистка фермента [23] и если не применяется лиофилизация [22, 23]. [c.562]

Наиболее близким к Со(Н)-карбоангидразе по спектральным свойствам оказался недавно полученный комплекс Со(II) с координационным числом 5 [93—96]. В результате этого появились мнения о том, что и в белке для кобальта характерно координационное число пять. Однако по данным рентгеноструктурного анализа с разрешением 2 А координационная сфера Со(II) напоминает сильно искаженную тетраэдрическую конфигурацию (рис. 16.20, Б) [98]. Подобная структура наблюдалась и у недавно исследованных методом дифракции рентгеновских лучей кристаллов б с-ацето-быс-(этилентиокарбамид)кобальта(И) [97]. При комнатной температуре спектр этого соединения очень похож на спектры Со(II)-карбоангидразы. [c.582]

Приведенный выше метод введения функциональных групп в поливинилпирролидон слишком сложен. Более простой путь к таким конъюгатам заключается в использовании сополимеров винилпирролидона и других гидрофильных мономеров с функциональными мономерами. Так, окрашенный растворимый полимерный конъюгат карбоангидразы (5.2) был получен азид-ным методом из фермента и полимера-иосителя ( Хромоэнз акрила ), выпускавшегося в промышленном масштабе [25] [c.169]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология