Гемоглобины осаждение

Получение гистидина гидролизом гемоглобина и осаждение его хлорной ртутью в щелочном растворе впервые осуществил Френкель Гистидин может быть также осажден в виде серебряного производного [c.162]

В виде бикарбоната железо содержится в железистых минеральных водах, на которые направляются больные с недостатком гемоглобина в крови. Железистую воду пьют через соломинки, чтобы она не соприкасалась с зубами в противном случае зубы чернеют от осаждения на них сернистого железа, получающегося путем взаимодействия ионов Ре и сероводорода, образующегося в ротовой полости вследствие разложения остатков пищи. [c.503]

На рис. 4 дан снимок молекул гемоглобина крови человека, сделанный при помощи электронного микроскопа. Ясно видно, что все молекулы имеют сферическую форму. Это объясняется тем, что нитевидные молекулы при осаждении свертываются в клубок. Таким образом, этот снимок не дает представления об истинной форме молекул. Как известно, вес шара пропорционален кубу радиуса измеряя радиус молекулярного шара на электронно-микроскопическом снимке, можно определить вес молекулы, хотя такое определение, конечно, неточно. Более целесообразно подсчитать общее число молекул в осадке на пленке, зная вес вещества. Этот метод скорее применим для демонстрации положения о дискретности материи или для наглядного подтверждения существования молекул, чем для определения их размеров. [c.50]

Гордон с сотрудниками 25] применили принцип методов 10, 6 и 12 к производству альбумина из человеческой плаценты в большом, масштабе для удаления ионов цинка, связанных с протеином, применялись иониты, В отличие от плазмы, ткань плаценты более сложна, так как кроме протеинов плазмы крови в ней присутствуют гемоглобин лизатов красных телец и протеины ткани. Получаемый из этого материала альбумин был загрязнен гемоглобином, основную массу которого можно было осадить из 0,15-м. раствора хлорида натрия 0,002 молями ионов цинка при 0° и рН=7,2 в присутствии ионов бикарбоната. Затем большая часть ионов цинка удалялась из сравнительно чистого раствора альбумина осаждением 40%-ным этанолом в присутствии ионов цитрата, как комплексообразователя остальной цинк удалялся на колонне с ионитом. [c.615]

Методом высаливания были осаждены и получены в кристаллическом состоянии различные виды гемоглобинов. Гемоглобины быка и человека кристаллизуются с трудом они очень хорошо растворимы и обычно не осаждаются при удалении соли, как это удается сделать в случае гемоглобина лошади и других упомянутых выше гемоглобинов. Карбоксигемоглобин человека кристаллизуется из концентрированных буферных растворов фосфатов калия при 25° дли проведения кристаллизации используют отрицательный температурный коэффициент растворимости и другие свойства, представленные на рис. 5 [29]. В настоящее время для кристаллизации гемоглобинов новорожденного и взрослого человека из концентрированных растворов фосфатов или сульфата аммония (ом. рис. 7) различными исследователями предложен ряд методов, сходных между собой в том отношении, что все они основаны на использовании явления высаливания [203, 239, 240]. Гемоглобин быка может быть выделен в кристаллическом состоянии как этими методами, так и осаждением из водного раствора этиловым спиртом (стр. 62). Гемоглобины, например гемоглобин лошади, которые выкристаллизовываются из разбавленного раствора соли, можно получить в кристаллическом виде также с помощью высаливания (рис. 3). [c.55]

Описаны приемы локализации протеолитической активности после электрофореза в крахмальном [655, 1120] и полиакриламидном гелях [57] с использованием методики включения субстрата в гель. Возможность применения этой методики для указанной цели была недавно изучена [37]. Чтобы предотвратить миграцию белкового субстрата вовремя электрофореза, эти авторы использовали в качестве субстрата казеин, осажденный кислотой. Нерастворимый казеин обрабатывали ультразвуком и образовавшиеся мельчайшие частицы смешивали с гелеобразующим раствором. Конечная концентрация казеина в геле составляла 0,1% (масса/объем). После электрофореза гель инкубировали в течение 2—12 ч при 37°С в 0,1 М буфере трис-НС1 (pH 7,5). Казеин пригоден только при электрофорезе в кислой среде, поскольку в щелочной среде он мигрирует. В этом случае вместо казеина можно использовать препарат гемоглобина, приготовленный путем осаждения и обработки ультразвуком. Окрашивание гелей белковым красителем (напри-, мер, нигрозином) увеличивало контрастность полос. [c.303]

Катодная реакция изучалась в нескольких направлениях. В частности, исследовалась возможность использоваиия гемоглобина крови, содержащего красящее вещество гематин, в качестве переносчика кислорода. В некоторых случаях для этого процесса применялись специальные катализаторы восстановления кислорода. Хороший результат показал катализатор на основе РГ, осажденной на М0О2. В качестве катода также может быть использован обычный воздушный электрод с известными катализаторами. В обоих случаях процесс осложняется малым содержанием кислорода в крови и наличие.м в ней ионов С1 . Помимо низкой концентрации реагентов, использование плазмы крови в ТЭ ограничено высокой вязкостью крови и недостаточными ее буферными свойствами. [c.354]

Среда LIT для культивирования Trypanosoma ruzi имеет следующий состав (г/л) печеночного экстракта, хлоридов натрия и калия — по 4,0, фосфата натрия — 8,0, триптозы (триптона) — 5,0, глюкозы — 2,0 г, бычьей крови — 200 мл. Среду инактивируют в течение 1 ч при 62 °С. После охлаждения добавляют 20 мл гемоглобина (10 мл осажденных эритроцитов быка + 90 мл дистиллированной воды), доводят pH среды до 7,2 и стерилизуют фильтрацией через фильтр Зейца под давлением. Готовую среду разливают в пробирки или колбы Эрленмейера по 10 мл, куда засевают по одной капле исследуемого материала и инкубируют при 26 — 28 °С, оберегая посевы от высыхания. [c.347]

Исследуя водные экстракты различных растений, Любименко в больщинстве случаев обнаруживал устойчивый белково-хлорофилльный характер этих растворов. Об этом свидетельствовали качественные реакции с растворами, аналогичные реакциям на белок (осаждение танином, спиртом, ацетоном и т. д.). Обработка раствора хлорофилла кислотами и веществами, вызывающими коагуляцию белков, также вела к потере их стойкости. От кипячения же раствор становился мутным, хотя осадок и не выпадал, а раствор приобретал еще более ярко-зеленый оттенок. Все это привело Любименко к убеждению, что в полученном из листьев водном коллоидальном растворе существует тесная связь между зеленым пигментом и белком и это соединение хлорофилла с белком в живых хлоропластах представляет собой цветной (зеленый) белок типа гемоглобина. Таким образом,— писал он,— связь пигмента с белками пластид более тесного характера, и потому мысль о химическом соединении в данном случае напрашивается сама собой. Если вспомнить, что и сходное с хлорофиллом красящее вещество крови также связано хи1 ически с белками, то мысль, что хлорофилл живых пластид есть цветное белковое соединение, не покажется невероятной 9 . Предполагаемому хлорофилл-белковому комплексу Любименко дал название натур ального, или естественного, хлорофилла в отличие от хлорофилла в молекулярном растворе. [c.183]

Для получения препаратов гемоглобина центрифугируют цельную кровь, удаляют плазму и промывают кровяные тельца изотоническим раствором соли. Затем их гемолизируют прибавлением воды, диэтилового эфира или толуола [118—120] и центрифугируют для осаждения стромы. Если для гемолиза красных кровяных телец был применен эфир или толуол, то значительная часть стромы остается взвешенной между водным слоем и слоем органического растворителя. В этих случаях раствор гемоглобина может быть отделен при помощи сифона. Осаждение гемоглобина из его растворов производится путем осторожного прибавления спирта при низкой температуре. Некоторые гемоглобины почти нерастворимы в не содержащей солей воде и осаждаются в кристаллическом виде при диализе другие можно осадить, пропуская через их растворы ток кислорода и углекислоты (углекислота служит для поддержания слегка кислой реакции раствора). Простетическая группа гемоглобина, отщепляющаяся при действии на гемоглобин кислот, одинакова у всех гемоглобинов и миоглобинов. Она носит название про-тогема и представляет собой соединение протопорфирина с железом. СНдС-ССН=СН2 [c.242]

Третьим катализатором, содержащим в качестве активной группы протогемин, является цитохром. Это вещество впервые было обнаружено в мышцах Мак-Муном [119], однако в течение долгого времени его считали продуктом распада гемоглобина или миоглобина. Кейлину и Хартри [120] удалось выделить его в чистом виде. Метод, которым воспользовались эти авторы, заключался в осаждении цитохрома из трихлоруксусного экстракта мышц сернокислым аммонием, с последующим диализом для удаления трихлоруксусной кислоты и перекристаллизацией цитохрома при помощи фракционированного осаждения сернокислым аммонием. Выделенный препарат получил название цитохрома с. Два других цитохрома а и Ь идентифицированы только спектроскопически и пока еще не получены в чистом виде. [c.298]

Белки обладают не только видовой, но также и органной специфичностью. Так, например, белки сыворотки отличаются серо-логически от гемоглобина или от мышечных белков того же самого животного. Впрочем, некоторые фракции глобулинов, выделенные дробным осаждением сернокислым аммонием, очень сходны между собой, и при помонш реакции преципитации их удается различить лишь с большим трудом [7]. Ферритин (см. гл. XI) видоспецифичен, но не обладает органной специфичностью [8]. [c.330]

В последние 10 лет в нескольких лабораториях были разработаны методы получения высокоочищенной карбоангидразы из эритроцитов [34—42]. Они заключаются в осаждении гемоглобина смесью хлороформ—этанол [37, 39, 42] с последующей хроматографией на колонке, заполненной ДЭАЭ-целлюлозой [34, 37, 42], ДЭАЭ-сефадексом [43] или гидроксилапатитом [37, 39, 42]. Белок хорошо переносит лиофилизацию, и в большинстве методов она используется на той или иной стадии выделения. Накопленный опыт препаративной работы выявил некоторые особенности методов очистки фермента. Обработка смесью хлороформ—этанол существенно не меняет большинство физико-химических свойств. Но, как показал рентгеноструктурный анализ, воздействие этой смеси на фермент С человека снижает качество кристаллов [22, 23]. Для удаления гемоглобина лучше использовать гель-фильтрацию [37] или хроматографию на ДЭАЭ-сефадексе [43]. Качество кристаллов повышается, если проводится электрофоретическая очистка фермента [23] и если не применяется лиофилизация [22, 23]. [c.562]

Пикриновая кислога (см. № 2) (избыток при определении гемоглобина методом осаждения) [c.213]

Образование желчных пигментов. Билирубин образуется при распаде гемоглобина, который протекает в клетках ретикулоэндотелиальной системы — купферовских клетках печени, гистиоцитах соединительной ткани любого органа. Вначале происходит разрыв ме-тинового мостика между 1-м и 2-м пиррольными ядрами порфиринового кольца с одновременным окислением двухвалентного железа в трехвалентное. Образуется пигмент вердоглобин. Затем он теряет железо и глобин, порфириновое кольцо разворачивается в цепи и образуется пигмент зеленого цвета — биливерДин. Биливердин ферментативным путем восстанавливается в красно-желтый пигмент — билирубин. Образовавшийся пигмент называют свободным, или неконъюгированным. Он нерастворим в воде, поэтому в крови транспортируется в комплексе с альбумином. Для определения свободного билирубина в крови необходимо предварительное осаждение белка спиртом. Только после этого билирубин вступает во взаимодействие с диазореактивом, поэтому его иначе называют непрямым билирубином. Свободный (непрямой) билирубин не проходит через почечный барьер и в мочу не попадает. В печени он соединяется (конъюгирует) с УДФ-глюкуроновой кислотой. Эта реакция катализируется ферментом УДФ-глюкуронилтрансферазой. Образующийся глюкуронид билирубина получил название связанного, или конъюгированного, билирубина. Он растворим в воде, дает прямую реакцию с диазореактивом, поэтому иначе его называют прямым билирубином. Прямой (связанный) билирубин — это нормальный компонент желчи, попадающий в кровь в очень небольшом количестве. Он может проходить через почечный барьер, но в крови его очень мало, поэтому в моче он не определяется обычными лабораторными методами. Вместе с желчью прямой билирубин попадает [c.439]

С целью осаждения гемоглобина к 1 мл гемолизата добавить [c.265]

Источником гемоглобина может служить любой образец свежей крови, обработанный антикоагулянтом. Для приготовления гемолизатов используют также капиллярную кровь. Осажденные эритроциты трижды промывают солевым раствором (3— 5-кратный объем по отношению к осадку). Гемолиз проводят в стеклянных пробирках, добавляя к клеткам 1—1,5 объема дистиллированной воды и 0,4 объема ССЦ. Смесь встряхивают 4 мин и центрифугируют. Прозрачную надосадочную жидкость затем фильтруют через фильтровальную бумагу и разбавляют до нужной концентрации [598, 753]. Лизис клеток можно ускорить, добавив после дистиллированной воды небольшое количество сапонина или путем их замораживания и оттаивания в дистиллированной воде. Однако обработка клеток вторым способом приводит к осаждению гемоглобина Н. Этот аномальный гемоглобин и некоторые другие нестабильные гемоглобины могут денатурироваться во время интенсивного встряхивания с ССи. Для предотвращения денатурации таких гемоглобинов содержащие их эритроциты лизируют в 4 объемах дистиллирован- [c.320]

Экстракт можно легко получить из осажденных центрифугированием эритроцитов после промывания их изотоническим раствором Na l (0,9%, 0,15 М) и повторного центрифугирования. Клетки разрушают осмотическим шоком в воде (2 объема воды на 1 объем отцентрифугированных клеток). Однако около 90% белка, переходящего в раствор, составляет гемоглобин, и если вы занимаетесь очисткой другого белка, то очень полезно применить метод селективного удаления гемоглобина. Для денатурации гемоглобина успешно применяется смесь этанол-хлороформ [7]. [c.44]

Часто приводимым примером осаждения белка органическим растворителем, но на этот раз не смешивающимся с водой, является денатурация гемоглобина хлороформом (ср. [7] и, например [36]). Очистка ферментов эритроцитов осложняется тем, что более 90% общего белка эритроцитов составляет гемоглобин. Встряхивание гемолизата со смесью этанол — хлороформ приводит к полной денатурации гемоглобина. Незначительное количество хлороформа смешивается с водной фазой и оказывает сильное специфическое денатурирующее действие на молекулы гемоглобина. Таким образом, первой стадией выделения эритроцитарного фермента часто служит обработка гемолизата хлороформом, что приводит к удалению основного загрязняющего белка — гемоглобина. [c.90]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология