Цитотоксичность, методы определения

Оценку цитотоксичности можно производить путем подсчета жизнеспособных клеток (разд. 8.2.4), но при большом числе проб этот метод утомителен, поскольку требует многих часов наблюдения клеток в микроскопе. Более простой метод, который недавно был автоматизирован благодаря введению коллектора надосадочной жидкости Titertek (см. приложение 3), основан на определении радиоактивного хрома, выделяемого клетками в среду при гибели. Коллектор надосадочной жидкости состоит из абсорбирующих цилиндров, расположенных таким образом, что они могут вставляться в лунки пластинки для микротитрования Titertek/Linbro (см. приложение 3). После того как надосадочная жидкость из лунок абсорбируется цилиндрами, их переносят в счетные флаконы и определяют количество радиоактивного хрома, выделяемого клеточным монослоем. [c.16]

Разработаны различные методы для определения эффекторных функций лимфоцитов, в частности продукции антител, цитотоксичности и опосредованной Т-клетками помощи и супрессии. [c.542]

Методы определения цитотоксичности 9.4.1. Опредепенне белка в клеточном монослое [c.287]

I. Нуклеотиды. Наиболее широко используемыми методами количественной оценки цитОтоксичности лекарственных веществ являются определения включения Ш-тимидина в ДНК и Н-ури-дина в РНК [10, 13, 14, 16]. В кратковременных опытах без периода восстановления эти методы страдают рядом недостатков, связанных с тем, что включение Н-тимидина не всегда отражает истинную способность клеток синтезировать ДНК. К числу этих недостатков относятся следующие. [c.271]

Аналитическое и препаративное фракционирование клеток рассмотрено в двух главах, посвященных проточной цитометрии н элютриационному центрифугированию. Методы анализа на клеточном и субклеточном уровнях приведены в главе, посвященной гибридизации in situ. В главе, посвященной органной культуре, подчеркнуто значение клеточных взаимодействий и сохранения гистологической структуры ткани и приведены стандартные методы ведения органной культуры. Наконец, в главе, посвященной определению жизнеспособности клеток и оценке цитотоксичности, рассматриваются проблемы токсикологии и скрининга противоопухолевых препаратов, а также стандартные методы оценки выживаемости клеток в культуре. [c.7]

Определение количества белка является относительно простым методом оценки числа клеток. Этот метод особенно удобен в монослойной культуре, и важное его преимущество заключается в том, что промытые препараты могут храниться долгое время в замороженном виде это не искажает конечный результат и облегчает скрининг. Завышенная оценка числа клеток может иметь место при изучении действия некоторых препаратов, подавляющих репликацию, но не влияющих на синтез белка (например, 5-бромдезоксиуридин и метотрексат). Для монослойной культуры была разработана специальная модификация метода Лоури, использующая феноловый реагент фолина [30]. Рекомендуется также метод с амидо-черным, при котором линейность стандартной кривой сохраняется в более широком диапазоне концентраций [3]. Вывод о цитотоксичности при использовании этого метода можно делать, если изменение накопления белка в культуре в течение времени показано в нескольких точках если же точка одна, то воздействие лекарственного препарата должно быть длительным и должен существовать период восстановления. [c.276]

Несмотря на различие методов, используемых для определения цитотоксичности и жизнеспособности, при их применении к биопсийному материалу опухолей человека, были получены одни и те же уровни корреляции между чувствительностью in vitro и ответами in vivo. Было проведено немало сравнительных анализов, при которых в качестве стандарта для сравнения выбирался процесс образования клонов. В табл. 8.3 обобщены результаты этих исследований. Оказалось, что при адекватном определении цитотоксичности результаты совпадают с данными теста на клоногенность. [c.276]

Предлагаемый протокол описывает систему определения цитотоксичности лекарств при промежуточной продолжительности их воздействия. В основе лежит метод, впервые разработанный Фрешни с сотрудниками [29]. Условия инкубации и период восстановления могут варьировать в зависимости от задач опыта. [c.288]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология