Белки реконструкция самосборка

Влияет ли отсутствие одного белка на способность других белков к самосборке Для изучения этого вопроса используется частичная реконструкция. В этом случае необходимо устранить из среды определенный белок, а затем проследить, будут ли оставшиеся белки способны формировать частицы. Такой подход возможно осуществить независимо от того, образуется ли в результате частичной самосборки функционально активная или неактивная частица. [c.110]

Роль конкретного белка в процессе самосборки рибосомной субчастицы возможно проанализировать, если попытаться осуществить реконструкцию рибосомы в отсутствие этого белка. Таким путем было установлено, что при исключении некоторых белков из реакционной смеси процесс полностью прекращается. Следовательно, именно эти белки необходимы для самосборки. Другие белки необязательны, субчастицы, образующиеся в их отсутствие, по физическим параметрам могут быть нормальными, но по их способности осуществлять синтез белка они оказываются дефектными по ряду функций. [c.110]

Удалось не только изолировать структуры, подобные триадам, в которых по обе стороны мембранных трубочек локализовались мембранные пузырьки с электронноплотным содержимым (что указывало на их принадлежность к терминальным цистернам), но и осуществить их диссоциацию и последующую реконструкцию. Более того, после реконструкции области контактов между мембранными трубочками и пузырьками содержали ножки , подобные выявляемым в триадах клеток. В формировании контакта участвует, по-видимому, белок с молекулярной массой 34 кД. Этот белок, очищенный до гомогенного состояния, обеспечивает самосборку триад (рис. 17). Пока не ясно, выполняет ли он просто функцию склеивающей субстанции, прикрепляя терминальные цистерны к Г-трубочкам, или катализирует образование триады. Самое удивительное, однако, что этот фактор, способствующий самосборке триады, является не просто структурным белком, а типичным ферментом гликолиза — глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназой. [c.58]

Основные научные работы относятся к биохимии нуклеиновых кислот и биосинтезу белков. Совместно с А. Н. Белозерским предсказал (1957) существование информационной РНК. Дал (1959— 1961) первое качественное описание макромолекулярной структуры высокомолекулярных РНК. Установил структурные превращения рибосом и сформулировал один из основных принципов их строения (1963). Обнаружил (1963—1966) возможность искусственной реконструкции (самосборки) рибосом. Открыл (1964) информосомы. Предложил (1968) модель молекулярного механизма работы рибосомы в процессе биосинтеза белка. Экснериментально показал (1970—1974) совместно с Л. П. Гавриловой возможность создания упрощенной системы биосинтеза белка на структурно модифицированных рибосомах вне клетки ( неэнзиматическая трансляция). [c.474]

Условиями для самосборки служат умеренная ионная сила (ниже 0,5), достаточная концентрация Mg2+ (от 10 до 30 мМ) и повышенная температура. М. Номура с сотр., осуществившие полную реконструкцию биологически активных 30S субчастиц Е. соН из индивидуальных РНК и белка, использовали 0,3—0,3 J М КС1 с 20 мМ Mg b, инкубируя смесь при 40°С в течение 20 мин. Они нашли, что оптимальной является ионная сила около 0,4. Очевидно, более высокие ионные силы подавляют взаимодействия белков с РНК, а при более низких ионныу силах возрастает вклад конкурирующих неспецифических взаимодействий основных белков с отрицательно заряженным полинуклеотидом. Относительно высокая концентрация Mg2+ необходима, по-видимому, прежде всего для поддержания третичной и вторичной структуры РНК, служащей каркасом для размещения белков. Вообще, следует отметить, что так называемый буфер для реконструкции Номура служит в то же время средой, в которой рибосомная РНК достаточно компактна в изолированном состоянии и поддерживает свою специфическую форму. Повышенная температура оказывается также очень важной для реконструкции и требуется, как считают, для облегчения структурной перестройки промежуточного рибонуклеопротеидного комплекса от менее компактной к более компактной конформации. [c.130]

V Одновременно с вышеуказанными белками, еще до перехода в более компактное состояние, к 16S РНК и к образующемуся комплексу могут Присоединяться белки S20, S6-S18, S5, S9, S11, S12, S13 и S19. Тем не lienee на рис. 79, дающем схему последовательности и взаимозависимости присоединения белков в процессе реконструкции 30S субчастицы Е. соИ, их включение в рибонуклеопротеид представлено как стадия III самосборки, так как они, даже если присоединены, не строго обязательны для компактизации, и могут присоединяться также и после нее. Кроме того, как видно из схемы, большинство белков, присоединяющихся на этом этапе самосборки, зависит от присутствия предыдущего набора белков. Так, связывание белков S9 и SI9 определяется присутствием белка S7 на РНК Присоединение белков S6-S18 требует присутствия белка S15, а также, по-видимому, в меньшей мере белка S8. В свою очередь, белок S11 зависит от белков S6-S18. Присоединение белка S5 наводится белками S8 и S16. (Еще раз следует подчеркнуть, что [c.131]

Поскольку при реконструкции in vitro рибосомные субчастицы необходимо инкубировать при повышенной температуре, очевидно, что можно получить холодочувствительные мутации, нарушающие процесс самосборки. Такие мутации отбирают среди бактериальных клеток, в которых синтез белка протекает нормально при обычной температуре, но прекращается при пониженной тем- [c.109]

Было обнаружено, что отпочковывание неклатриновых окаймленных пузырьков в такой бесклеточной системе требует наличия смеси белков из цитозоля и АТР, из чего следует, что это активный процесс, а не простая самосборка. Необходимые для транспорта компоненты эволюционно крайне консервативны, так как в экспериментах по реконструкции цитозоль животной клетки можно с успехом заменить цитозолем дрожжей или растений Таким образом, для идентификации молекул. [c.85]

Ф. Рихарде в 1958 г. открыл хорошо известные сейчас рекомбинантные системы, состоящие из нескольких белковых фрагментов, способных спонтанно собираться посредством невалентных взаимодействий в биологически активные структуры, подобные родительским белковым молекулам [160]. Обратимо и без помощи других веществ происходит сборка рибосомных частиц. A. . Спирин и соавт. [161, 162], М. Номура и соавт. [163, 164], подобрав соответствующие условия, наблюдали полную реконструкцию биологически активных 50S и 30S частиц из изолированных рибосомных РНК и двух наборов из 32 и 21 индивидуального рибосомного белка. При исследовании самосборки частицы 30S Номура и соавт. [165, 166] обнаружили, что процесс начинается с автономной компактизации рРНК из состояния 16S в состояние 22S и образования каркаса для размещения белков. Их последующее присоединение сопровождается четырьмя конформационными переходами из менее компактного в более компактное состояние (22S 23S 25S 28S 30S). [c.409]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология