Хроматофокусирование

Ионообменная хроматография. Для разделения белков на субъединицы по суммарному заряду используют методы ионообменной хроматографии, электрофореза (разд. 1.3.2.3), изоэлектрического фокусирования и хроматофокусирования (разд. 1.3.2.4). [c.39]

Иное дело при хроматофокусировании. Здесь на колонку в процессе всей элюции подается буфер с неизменным pH, и тем не менее pH подвижной фазы по высоте колонки оказывается существенно неодинаковым. Это происходит за счет участия в определенпп pH элюента буферных свойств ионогенных групп обменника. Диапазон изменения pH по высоте колонки может составлять несколько единиц. В процессе элюции распределение pH вдоль колонки медленно изменяется. Первоначально ее уравновешивают щелочным буфером, а во время элюции подают кислый буфер неизменного состава. Благодаря буферному эффекту ионогенных групп обменника происходит постепенное, продвигающееся сверху вниз закисление жидкой фазы, что составляет основу фракционирования. Постараемся представить себе, чем обусловлено такое изменение. [c.327]

Недавно Энтиан и соавторы описали разделение методом хроматофокусирования трех изоферментов энолазы из дрожжей. Все они являются гидрофобными белками. Для улучшения растворимости и сохранения нативности изоферментов колонку РВЕ 94 уравновешивали [c.335]

Хроматофокусирование с применением колонок MonoQ — это новый метод, который характеризуется высоким разрешением он может оказать большое влияние на разработку схем разделения смесей белков. Большим достоинством метода является возможность использовать различия в заряженности белков при pH, близких к р/ этих же белков. Детальное описание принципиальных основ разделения по этому методу можно найти в литературе фирмы Pharma ia. [c.221]

В этой главе рассматриваются аналитические приемы, получившие широкое применение в химии белка (если они не обсуждаются в других разделах книги). Неискушенному читателю может показаться, что здесь дано слишком много альтернативных методов и в иекоторых случаях вполне достаточно было бы привести один из них. Автор признает возможность такого рода критических замечаний, но подчеркивает, что нет такого метода который оказался бы в одинаковой степени пригодным для всех белков, поскольку, с одной стороны, весьма различны природа исследуемых объектов и их доступность в количественном отношении с другой — лаборатории, занимающиеся изучением белков, резко отличаются друг от друга по оснащенности реактивами, приборами и другими техническими средствами. В целях сокращения объема рассматриваемого здесь материала некоторые из методов, например изотахофорез и хроматофокусирование, ие обсуждаются. [c.243]

Хроматофокусирование - метод ионообменной хроматографии, использующий для разделения градиент pH, формируемый в слое сорбента внутри колонки. Метод успешно применяют для разделения цвиттер-ионных биологических макромолекул [1-3], а в последние годы - для концентрирования и разделения переходных металлов на комплексообразующих сорбентах [3, 4]. В большинстве публикаций, посвященных хрома-тофокусированию, рассмотрено фор ирование нисходящих градиентов pH внутри анионообменных колонок, и лишь в отдельных случаях - восходящих градиентов внутри катионообменных колонок [3]. Нисходящие градиенты pH внутри катионообменных колонок в хроматофокусиро-вании ранее не получали. Однако именно такие сорбенты, например, с карбоксильными группами, представляют особый интерес для концентрирования и разделения переходных и щелочно-земельных металлов с использованием техники хроматофокусирования. В данной работе рассмотрена возможность формирования нисходящего градиента pH внутри карбоксильной катионообменной колонки. [c.137]

В качестве буферного элюента, обеспечивающего плавное снижение pH в анионообменной колонке, в хроматофокусировании обычно применяют специально синтезированные Полибуфер-74 или -96, представляющие собой полиамфоли-ты с набором первичных и вторичных аминогрупп и карбоксильных групп [2, 3]. Раствор По-либуфера-96 (1 20) имеет pH 8.0, поэтому для создания необходимой кислотности элюента следует добавить H I (конц.) до pH 3. Согласно [2,6], в данных условиях полиамфолитные макромолекулы в составе элюента находятся в свернутом состоянии, а при подкислении НС1 (конц.) приобретают сз ммарный положительный заряд и в результате разворачиваются в линейную конформацию вследствие взаимного отталкивания одноименно заряженных звеньев. [c.138]

Содержание макромолекул Полибуфера в подвижной фазе при прохождении через колонку снижается до тех пор, пока сорбент не будет насыщен ими. В данном случае при / О насыщение достигается быстро, поскольку макромолекулы находятся в развернутой конформации. В результате карбоксильные группы сорбента оказываются экранированными, и значение pH эффлюента резко снижается от 8.2 до 4.5—4.7. Для разделения методом хроматофокусирования полученный градиент не подходит из-за протяженного начального участка и последующего резкого снижения pH. В хроматофокусировании предпочтительнее получать линейные плавные градиенты pH, поэтому требуется сократить начальный участок, избежать подъема на нем, а участок снижения pH сделать более пологим, протяженным в единицах объема эффлюента. Уменьшение ионной силы стартового раствора от 0.1 до 0.01 при сохранении остальных условий эксперимента привело к уменьшению подъема pH (до 7.8 по сравнению с 8.2) на начальном участке градиента (рисунок, кривая 2), однако основные особенности профиля сохранились, что также делает этот градиент не пригодным для использования в анализе. [c.138]

Смотреть страницы где упоминается термин Хроматофокусирование: [c.277] [c.326] [c.326] [c.326] [c.326] [c.330] [c.330] [c.332] [c.333] [c.334] [c.335] [c.335] [c.127] [c.128] [c.129] [c.129] [c.130] [c.154] [c.154] [c.220] [c.113] [c.139]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология