Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Глюкозооксидаза, иммобилизация

    Принцип потенциометрического определения концентрации глюкозы реализован в сенсоре, предложенном в работе [39] (см. также гл. 10). Глюкозооксидазу иммобилизуют непосредственно на поверхности платинового рабочего электрода методика иммобилизации включает удерживание в полиакриламидном геле, сшивание глутаровым альдегидом в альбуминовом носителе или связывание с платиной через тамма-аминопропилтриэтоксисилан [55]. [c.324]


    При измерениях в неподвижном растворе можно использовать три различных способа иммобилизации энзима в электродном устройстве [21 ]. В первом энзимный слой представляет собой раствор глюкозооксидазы (100 мг/мл) и пероксидазы (50 мг/мл). Во втором способе энзимная смесь физически закреплена в полиакриламиде, который полимеризуется под влиянием света на нейлоновой сетке. Третий способ заключается в том, что смесь энзимов химически связана с матрицей из полиакриловой кислоты. Во всех случаях энзимный слой на Г-селективном мембранном электроде закрывается чашечкой, сделанной из диализной бумаги. Электроды хранят в фосфатном буферном растворе при pH = 6. [c.329]

    Из приведенных выше примеров наиболее хорошо изучена, по-видимому, глюкозо-оксидазная редокс-электродная система [3, 10-12]. Глюкозооксидаза катализирует реакцию между р-В-глюкозой и О2 с образованием глюконолактона и пероксида водорода. Как отмечено во введении, в биокаталитических ферментных редокс-элект-родных системах оксидоредуктазный фермент иммобилизован на поверхности электрода, а определяемое вещество находится в растворе. Другие редокс-системы могут включать 1) иммобилизацию кофактора фермента, например порфирина или флавина, на поверхности электрода в расчете на то, что содержащиеся в пробе апоферменты смогут катализировать окисление или восстановление иммобилизованных редокс-цент-ров 2) иммобилизацию фермента и медиатора на поверхности электрода. Работая с глюкозооксидазой, мы иммобилизовали фермент на электроде из благородного металла или углерода. Предполагается, что потенциал этих электродов зависит от концентрации глюкозы, кислорода и пероксида водорода в растворе, а также наличия функциональных групп на поверхности платины или углерода. Ниже приведена методика и результаты работы с глюкозооксидазным редокс-электродом. [c.134]

    В этих методах применяются мечение антигенов или антител и иммобилизация на твердой подложке одного из реагентов [34] под таким названием разработано много вариантов [113]. Иммобилизация выполняется на дне пробирок или чаще в микрокюветах, вмонтированных в пластиковые планшеты. Для мечения часто используют пероксидазы, щелочные фосфатазы, глюкозооксидазу. Возможно использование реакций конкуренции между мечеными и немечеными реагентами пример такого рода схематически представлен на рисунке 4.9. Можно описать еще один вариант метода, не основанный на реакциях конкуренции  [c.106]


    Иммобилизация глюкозооксидазы на трубке VI6 посредством глутарового альдегида. Трубку VI6 длиной 50 см активируют путем циркуляции в ней 57о (об./об.) раствора глутарового альдегида в фосфатном буфере (pH 8,0, / = 0,15) при комнатной температуре в течение 1 ч. Продукт (трубка VIII6) промывают водой. Трубку УП1б длиной 50 см заполняют раствором глюкозооксидазы (3 мг) в фосфатном буфере (3 мл pH 8,0, / = 0,15) циркуляцию раствора фермента в трубке продолжают в течение 4 ч при комнатной температуре. Трубку промывают фосфатным буфером (pH 8,0), 0,5 М Na l и дис- [c.33]

    Скорость формирования окраски на индикаторной полоске зависит от содержания иммобилизованных антител и глюкозооксидазы, а его можно регулировать, изменяя концентрации белков при иммобилизаций. Для изучения влияния концентрации антител на интенсивность окраски мы получили индикаторные полоски с различным содержанием антител против морфия при одинаковой активности глюкозооксидазы (4 мМЕ/см ) и использовали эти полоски для анализа отрицательных образцов мочи (рис. 10-3). С увеличением концентрации антител интенсивность [c.137]

    На первой стадии глюкоза окисляется растворенным кислородом до -глюконолактона с образованием стехиометрического количества перекиси водорода, которая на второй стадии количественно окисляет о-дианизидин Существует большое количество модификаций метода с фотометрическим определением начальной скорости реакции на второй стадии или по конечной точке реакции, с использованием других субстратов пероксидазы — ферроцианида и других. В ряде модификаций вторая стадия проводится неферментативным способом. Помимо фотометрического широко используется также потенциометрический и амперометрический методы определения глюкозы с помощью глюкозоокси-дазы. Наиболее традиционным является применение кислородного электрода Кларка в сочетании с глюкозооксидазной мембраной. Совместная иммобилизация в мембране глюкозооксидазы и /3-глюкозидазы позволяют определять с помощью ферментного электрода активность целлюлазного комплекса Однако чувствительность ферментных электродов, как правило, ниже, чем у фотометрического метода с использованием глюкозооксидазы. [c.133]


Библиография для Глюкозооксидаза, иммобилизация: [c.467]   
Смотреть страницы где упоминается термин Глюкозооксидаза, иммобилизация: [c.32]    [c.143]    [c.198]    [c.232]    [c.233]    [c.235]   
Аффинная хроматография Методы (1988) -- [ c.32 , c.75 ]




ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Иммобилизация



© 2024 chem21.info Реклама на сайте