Конъюгат пероксидаза хрена с IgG

В химических методах получения конъюгатов белок-фермент можно выделить две группы по типу сшивающих реагентов — гомо-бифункциональных и гетеробифункциональных. Кроме того, для получения конъюгатов белков с пероксидазой хрена широко используется пврйодатный метод. В последнее время все большее распространение получают нехимические методы синтеза конъюгатов белок-фермент, основанные на образовании иммунологической связи антиген-антитело. [c.182]

Рисунок 21. Определения малых количеств человеческой ДНК методом гибридизации биотинилированного олигонуклеотида с образцами иммобилизованной ДНК. Визуализация образовавшегося ассоциаты происходит путем связывания с биотином конъюгата Пероксидазы хрена со Стрептавидином и дальнейшего окисления хромогена ТМВ.

Получение конъюгата антител с пероксидазой хрена (Ат-ПХ) [c.268]

Рис. 2.9. Применение ELISA для тестирования специфичности антисыворотки к IgG человека. В лунках панели адсорбирован антиген (2,5 мкг/мл) ряды А и В —IgG человека, С и D —IgM человека, Е и F —IgA человека (все антигены получены из нормальной сыворотки) G и Н —легкие цепи х. Исследуемая сыворотка добавлена в двукратных последовательных разведениях (начиная с 1 100) от вертикального ряда 2 до ряда 12 (ряды А и В) или до вертикального ряда 9 (другие горизонтальные ряды). Лунки вертикальных рядов 10—12 (ряды С—Н) содержат разведения антисывороток, специфичных к адсорбированным на дне этих лунок антигенам. В реакции использовали конъюгат пероксидазы хрена с кроличьей антисывороткой к IgG овцы. Вертикальный ряд 1—контроль (только конъюгат). Исследуемая антисыворотка взаимодействует только с IgG человека. Реакция в лунках рядов G и Н идет вследствие примеси IgG, обнаруженной в препаратах >с-цеси, т. е. метод позволил определить и чистоту антигена

Синтез конъюгата пероксидазы хрена с IgG по методу Накане. [c.183]

Конъюгат пероксидазы хрена с антигеном [c.136]

Синтез конъюгата IgG с пероксидазой хрена с помощью глутарового альдегида (двухстадийный метод). [c.184]

Наиболее широко распространенными ферментами, используемыми для конъюгации со вторичными антителами, являются пероксидаза хрена и ш елочная фосфатаза. Пероксидаза хрена - первый фермент, использованный для иммунологического выявления при иммуноблоттинге. Преимуш ествами данной системы является относительная дешевизна как ферментного конъюгата, так и субстратов, используемых для развития окраски. В то же время чувствительность данной системы ниже, чем у других, используемых в настояш ее время систем. К тому же окрашенные [c.67]

Синтез конъюгатов с применением глутарового альдегида разработан в основном для пероксидазы хрена, щелочной фосфатазы и глюкоамилазы. Недостатком метода является невысокий выход конъюгата (1—10%) и поляризация белков, в результате чего теряется иммунологическая активность. К достоинствам метода относится его простота и то, что качество получаемого конъюгата удовлетворяет необходимым требованиям. [c.184]

Для получения конъюгата антител с пероксидазой хрена используют антивидовые антитела к ферменту, которые образуют так называемый иммунопероксидазный комплекс (пероксидаза—антитела [c.190]

Рис. 10-17. Влияние соотношения гаптен/фермент и концентрации конъюгата на аналитический сигнал. А. Для анализов использовали по 20 мкл калибровочных образцов сыворотки, содержащих теофиллин. Ферментный реагент содержал конъюгат теофиллина с пероксидазой хрена 0,1 (кружки), 0,2 (треугольники) или 0,4 (квадраты) мкг/мл (5,4 молекул гаптена на молекулу фермента). Анализы выполняли, как описано в разделе Материалы и методы . Б. То же самое, что А, но ферментный реагент содержал конъюгаты (0,2 мкг/мл) разного состава 5,9 (кружки), 8,0 (ромбы), 11,8 (треугольники) или 14,0 (квадраты) молекул гаптена на молекулу фермента. Публикуется с разрешения издательства (Zuk et al., 1985).

Добавить 30 мл предварительно нагретого Отмывающего раствора и 180 мкл конъюгата (Пероксидаза хрена — стрептавидин). Инкубировать на водяной бане-шейкер при -1-50ОС ( 1°С) при 50-60 об/мин. в течение 10 минуг ( 1 мин.). После инкубации раствор слить. [c.194]

Синтез конъюгата пероксидазы хрена с IgG с помощью SPDP. [c.189]

Перйодатный метод (метод Накане). Этот метод был впервые предложен японскими исследователями Накане и Каваои (1974) и с тех пор наиболее употребим для получения конъюгатов антител или белков с пероксидазой хрена. Суть метода состоит в модификации пероксидазы хрена с образованием активных альдегидных групп, которые затем реагируют с аминогруппами антител с образованием основания Шиффа. Альдегидные группы в пероксидазе возникают при окислении перйодатом натрия углеводных компонентов фермента, аминогруппы которого предварительно или блокированы I-фтор-2,4-динитробензолом или протонированы [c.182]

Поскольку антигенами могут быть самые различные соединения, вполне возможно, что пероксидаза при участии своих субстратов — фенолов, аминосоедннений и перекиси водорода — может выполнять окислительно-восстановительный акт, в результате которого идет утилизация ненужных клетке соединений. Это подтверждается тем, что фермент отличается очень широкой субстратной специфичностью и диапазон субстратов до конца не выяснен. Например, пероксидаза хрена может окислять ароматические диамины до реакционноспособных хинондииминов [ laiborne, Fridovi h, 1979], которые вступают в реакцию с белками и дают конъюгаты этих аминов. [c.28]

Известно несколько примеров получения конъюгатов IgG с пероксидазой хрена, щелочной фосфатазой, глюкозооксидазой и р-/)-галактозидазой с применением в качестве гомобифункциональ-ного сшивающего реагента п-бензохинона. Метод основан на реакции п-бензохинона с амино- и тиогруппами белка, скорость которой зависит от pH. Благодаря этому был разработан двухстадийный способ получения конъюгатов, когда п-бензохиноновое производное белка получают при pH б, выделяют, а затем смешивают с другим белком при pH 8. Одна из возможных схем реакции следующая [c.185]

Ниже описывается вариант ИФМ с использованием пероксидазы хрена. Конъюгат иммуноглобулинов с пероксидазой готовят следующим образом (L. Hudson, F. Hay, 1980). [c.113]

ИФА, основанный на эффекте ингибирования субстратом фер-мента-метки. В качестве метки антигена используют пероксидазу хрена. Принцип метода основан на значительном отличии ферментативной активности исходного конъюгата и конъюгата в комплексе со специфическими антителами при детекции метки в присутствии 35 мМ перекиси водорода, которая является субстратом пероксидазы. Пероксидаза нативная и в конъюгате с антигеном в значительной степени ингибируется уже при концентрации перекиси 10 мМ, но сохраняет активность в конъюгате при связывании с соответствующими антителами. Новый подход апробирован на примере а-фетопротеина, ферритина, рг-микроглобулииа, дигоксина, иммуноглобулина Е. При длительности 20—30 мин метод позволяет определять до 10 нг/мл а-фетопротеина, что сопоставимо с чувствительностью гетерогенного ИФА. [c.118]

В качестве метки в иммуноферментном анализе широко применяют пероксидазу хрена, методы получения и стабилизации конъюгатов с которой хорошо изучены. Пероксидазу хрена чаще всего определяют колориметрически, но для этой цели можно также использовать различные хеми- и биолюминесцентные реакции (см. табл. 12.1). [c.168]

Атпх) ВЫПОЛНЯЛ функции конъюгата М—Л, а индикаторным ферментом была пероксидаза хрена. [c.61]

Инкубируют 1—2 ч с аккуратным встряхиванием в растворе ФСБ—твин, содержащем вторые антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена. Поскольку данный метод представляет собой качественный анализ, для которого наиболее важным фактором является чувствительность, мы рекомендуем использовать высокополимерные конъюгаты (Tsang et al,, 1984а), [c.346]

В ферментативной иммунохроматографии также используются конъюгат фермента с определяемым веществом и специфические антитела против последнего. Однако в отличие от EMIT здесь определение не связано с изменением активности конъюгата в комплексе с антителом. Принцип метода ферментативной иммунохроматографии представлен на рис. 6.4. Определенный объем пробы смешивают с раствором, содержащим конъюгат фермент -гаптен и соответствующий ферментный реагент. В рассматриваемом примере сопряженным ферментом является пероксидаза из корней хрена, а ферментным реагентом - глюкозооксидаза. Глюко- [c.84]

Смотреть страницы где упоминается термин Конъюгат пероксидаза хрена с IgG: [c.119] [c.145] [c.58] [c.201] [c.29] [c.12] [c.73] [c.183] [c.187] [c.61] [c.65] [c.94] [c.202] [c.210] [c.54] [c.63] [c.361] [c.413] [c.198] [c.58]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология