Иммуноблоттинг

При проведении иммуноблоттинга сложную смесь антигенов вначале подвергают гель-электрофорезу, а затем фракционированные пептиды переносят (блоттинг) на лист нитроцеллюлозы для идентификации индивидуальных антигенов при помощи специфических антисывороток. Производя предварительное разделение в геле с додецилсульфатом натрия или в геле для изо-электрического фокусирования можно получить данные о размерах и изоэлектрической точке исследуемых антигенов, а также о сходстве между ними (родстве) (рис. 29.13). [c.531]

Иммунный комплекс. Продукт реакции антиген-антитело, который может также содержать в своем составе компоненты системы комплемента. Иммуноблоттинг (вестерн-блоттинг). Метод идентификации белков и определения их свойств с использованием антител. [c.558]

Условия проведения электрофореза и иммуноблоттинга см. в подписях к рис. 8. Слева обозначены мол. массы RAB-полипептидов. [c.28]

А разработка принципиально новых способов диагностики инфекционных и неинфекционных болезней (иммуноферментный, радиоиммунный анализы, иммуноблоттинг, гибридизация нуклеиновых кислот). Создание на основе этих способов тест-систем для индикации, идентификации микроорганизмов, диагностики инфекционных и неинфекционных болезней (опухоли, сердечно-сосудистые, аутоиммунные, эндокринные и др.), а также выявления нарушений при некоторых состояниях (беременность, переливание крови, пересадка органов и т.д.). [c.18]

Иммуноблоттинг — определение антигенов или антител с помощью известных сывороток или антигенов. Метод основан на вьщелении антигена с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, последующем переносе вьщеленного антигена из геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозу (блот-пят-но) и выявлении на подложке искомого антигена с помощью ИФА. Используется как диагностический метод. [c.181]

Процесс иммуноблоттинга состоит из пяти шагов [c.63]

Рис. 18. Денатурирующий электрофорез в ПААГ (А) и иммуноблоттинг (В) белков с первичными антителами против стрессового белка.

При проведении иммуноблоттинга возможны осложнения, связанные с фоновыми явлениями трех типов [c.66]

Наиболее широко распространенными ферментами, используемыми для конъюгации со вторичными антителами, являются пероксидаза хрена и ш елочная фосфатаза. Пероксидаза хрена - первый фермент, использованный для иммунологического выявления при иммуноблоттинге. Преимуш ествами данной системы является относительная дешевизна как ферментного конъюгата, так и субстратов, используемых для развития окраски. В то же время чувствительность данной системы ниже, чем у других, используемых в настояш ее время систем. К тому же окрашенные [c.67]

В общем смысле под иммуноблоттингом понимают анализ смеси белков, перенесенных на твердую подложку-мембрану, с которой они связываются ковалентными связями, с последующей иммунодетекцией. Анализировать можно смесь белков, непосредственно нанесенную на подложку, — дот-блот анализ (от англ. dot — пятнышко) — либо после ее предварительного фракционирования методами электрофокусирования, диск-электрофореза или двумерного электрофореза — Вестерн-блот анализ (Western blotting). Такая методология применяется также для отбора клонов бактерий, фагов или вирусов, экспрессирующих продукты целевых клонированных генов. Перенос белков на мембрану осуществляется либо пассивно, либо с использованием аппаратуры для электропереноса. На эффективность переноса белков на мембрану влияет множество факторов, таких как молекулярная масса белков, пористость геля, время переноса и состав используемого буферного раствора (транс-буфера). В зависимости от задач и условий проведения эксперимента подбираются условия переноса, обеспечивающие наилучшие результаты. [c.57]

Иммуноблоттинг с антителами на RAB-полипептиды показал, что из всех перечисленных выше митохондриальных дегидринов только белковая фракция с мол. массой 63 кД является гомологичной RAB (рис. 10). [c.27]

С целью поиска и установления закономерностей синтеза и накопления стрессовых полипептидов в мицелии и плодовых телах изучаемых штаммов, нами были проведены иммуноблоттинга суммарных грибных белков в присутствии антител против стрессовых полипептидов, иммунохимически [c.38]

Иммуноблоттинг с антителами против БХШ 310 позволил обнаружить две субъединицы 56 и 66 к Да, иммунохимически [c.45]

Лабораторная диагаостика. Вирусологическая и серологическая диагностика сводится к определению в жидкостях и тканях организма (сыворотка крови, лимфоциты, макрофаги, сперма, слюна, содержимое влагалища и др.) вируса или его антигенов, а также антител к ВИЧ в сыворотке крови. Вирус выделяют в культуре клеток лимфоцитов, что довольно трудно в обычных условиях. Антитела к ВИЧ определяют в основном с помощью ИФА, подтверждая положительные результаты, используя метод иммуноблоттинга (см. главу 9). [c.278]

Для увеличения чувствительности при иммуноблоттинге используются системы с биотинилированными вторичными антителами. Данный метод использует сродство биотина и авидина. Поскольку стрептавидин связывает несколько молекул биотина, связывание фермента с интересующими белковыми зонами усиливается. Другое преимущество данной системы - способность обнаруживать белки, связанные с положительно заряженной нейлоновой мембраной. Данная система обладает в 10-50 раз более высокой чувствительностью, а также не требует наличия метанола в буфере для переноса. [c.68]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология