Антитела антивидовые

Рис. 20. Схема связывания антител против антигена (Ад) и фермента-маркера (Е) с помощью антивидовых антител против Рс-фрагмента

Для определения специфичности гибридом используют, как правило, непрямой метод ИФА с использованием антивидовых антител, конъюгированных с ферментной меткой. В нашем случае используются [c.320]

АГ — иммобилизованный антиген АТ — определяемые антитела АЛТ—Е — конъюгат антивидовых антител с ферментной меткой [c.320]

Антивидовое антитело Антиген —( 1Ь [c.86]

Метод является усложненным вариантом обычного двухцентрового или сэндвич -анализа, в котором образование комплекса детектируется не непосредственно введением в него меченного ферментом антитела, а с помощью содержащих ферментативную метку антивидовых антител. В качестве антивидовых (или вторичных) используют антитела, специфичные к глобулинам тех видов животных или птиц, которых иммунизировали антигеном для получения антисыворотки. Примером наиболее распространенных антивидовых конъюгатов являются меченные ферментом антитела кролика против иммуноглобулинов человека, меченые антитела козы (осла, барана и т. д.) против иммуноглобулинов кролика и т. д. [c.89]

Для того чтобы меченые антивидовые антитела не связывались с иммобилизованными на поверхности, необходимо использовать при образовании сэндвич -комплекса антитела, полученные от разных видов животных (на схеме такие антитела обозначены каК [c.90]

Данная схема является одной из наиболее распространенных-в ИФА антител, так как обладает всеми достоинствами сэндвич -метода, но отличается универсальностью меченого реагента, что дает возможность выявлять антитела к разным антигенам. Данный подход позволяет решать проблемы серодиагностики заболеваний человека и сельскохозяйственных животных, используя ограниченный набор антивидовых иммуноферментных конъюгатов, что значительно облегчает задачу производства реагентов для ИФА. [c.91]

Метод с использованием меченого антигена и иммобилизованных антивидовых антиТел. Схема метода [c.91]

В связи с этим применение в анализе меченых антивидовых антител упрощает процедуру получения реагентов для анализа, так как позволяет, используя одни и те же конъюгаты, осуществлять определение разных антигенов и антител различной специфичности. Кроме того, чувствительность анализа ряда антигенов в этом случае может быть выше, чем при применении меченых специфических антител, вследствие возможности связывания не одной, а нескольких меченых молекул. Однако такой подход методически усложняет проведение анализа из-за введения дополнительных стадий инкубации и промывки носителя. [c.101]

Для получения конъюгата антител с пероксидазой хрена используют антивидовые антитела к ферменту, которые образуют так называемый иммунопероксидазный комплекс (пероксидаза—антитела [c.190]

В качестве примера приведем схему определения кроличьих антител против какого-либо антигена ПАП-методом. К иммобилизованному антигену добавляют исследуемую пробу. После инкубации и отмывки несвязавшихся компонентов к носителю добавляют антивидовые антитела (например, сыворотку крови осла, иммунизированного IgG кролика). Проводят повторную инкубацию, отмывку и вводят в систему антитела кролика против пероксидазы. Смесь инкубируют, носитель отмывают и на последней стадии добавляют пероксидазу, образующую специфический комплекс с соответствующими антителами, который выявляют обычными методами. Одним из вариантов схемы является добавление на стадии 5) не антител против пероксидазы, а заранее приготовленного ПАП-комп-лекса. Схема метода [c.103]

Одним из подходов является проведение стадии узнавания определяемого соединения специфическими антителами в растворе и дальнейшее разделение компонентов путем перевода образовавшегося специфического комплекса в нерастворимое состояние. По приведенной выше классификации такие методы относятся к гомогенно-гетерогенным. Разделение компонентов чаще всего достигается с помощью образующих преципитат антивидовых антител. Возможно использование в качестве осадителя полиэтиленгликоля и других соединений. Недостатком метода является длительность процесса разделения, в ряде случаев лимитирующего время всего анализа, и необходимость тщательного подбора условий осаждения. [c.112]

Конкурентный метод с использованием меченых антивидовых антител [c.251]

Иммобилизованный антиген инкубируют с пробой, содержащей антитела, отмывают и добавляют антивидовые антитела, ковалентно связанные с биотином. Затем вносят авидин, образующий прочный комплекс с биотином, отмывают избыток белка и добавляют фермент с ковалентно пришитым биотином, который взаимодействует с другим центром связывания авидина. (Другим путе1 (1 является использование антивидовых антител, ковалентно связанных с авилином, что упрощает анализ и сокращает его длительность. [c.105]

Рис. 48. Влияние концентрации иммобилизованного антигена иа калибровочные графики в методе ИФА с использованием меченых антивидовых антител

Вторая иммунохимическая стадия анализа включает взаимодействие меченых антивидовых антител со специфическим комплексом антиген — антитело, сформированном на носителе. Основные требования к этой реакции аналогичны рассмотренной ранее второй стадии сэндвич -метода анализа. Очевидно, что оптимальными являются условия, обеспечивающие линейную пропорциональность между концентрациями специфических антител в комплексе (которая изменяется от нуля до значения концентрации иммобилизованного антигена) и связавшихся с ними меченых антивидовых антител при минимальном фоновом сигнале. [c.254]

Определение антител чаще всего проводят методом твердофазного ИФА, основанным на инкубации сыворотки с иммобилизованным антигеном, с последующим выявлением связавшихся специфических антител препаратом антивидовых антител, меченным ферментом. [c.262]

Непрямой ИФА чаще всего применяют для количественного определения в сыворотке специфических антител, вырабатываемых против патогенов. В этом методе (рис. 2-13) лиганд или антиген, иммобилизованный на твердом носителе, инкубируют с анализируемым образцом, затем твердую фазу промывают и инкубируют с антивидовыми антителами к иммуноглобулинам, содержащими ферментную метку (Атг—Ф). После отделения твердой фазы измеряют активность связанного с ней фермента, которая прямо пропорциональна концентрации антител (Ат) в исследуемом образце. [c.27]

Высокоспецифичным для диагностики ВИЧ-инфекции является метод иммунноблотинга (см. подразд. 1.4.5). При этом проводится электрофоретическое разделение вирусных белков с последующим перенесением их на мембрану из нитроцеллюлозы. Затем мембрана обрабатывается исследуемой сывороткой. Заключительный этап исследования состоит в выявлении антител к различным белкам ВИЧ. Для этого в систему добавляют антивидовые меченые сыворотки. Индикацию образующихся иммунных комплексов проводят с использованием ИФА или РИА. Результаты иммуноблотинга считают положительными при обнаружении антител к определенным вирусным антигенам р24, рЪ1, а также к gpЛ или к gp]20. [c.308]

В роли антигенов могут выступать и сами иммуноглобулины (антитела). В этом случае организм вырабатывает антитела, которые часто называют вторичными. Например, при иммунизации <ролика иммуноглобулинами другого вида животного вырабатываются вторичные (антивидовые) антитела. В иммуноферментном анализе существует большая группа методов (в том числе так iaзывaeмый метод двойных антител ), в которых используют ме-1енные ферментом вторичные антитела. [c.14]

На первой стадии иммобилизованные антивидовые антитела связывают из раствора все антитела соответствующего вида. Наличие антител определенной специфичности в образовавшихся иммунохимических комплексах выявляют титрованием антигенсвязывающих центров конъюгатом соответствующего антигена с ферментом. Метод основан на выявлении из множества связавшихся с иммуносорбентом антител молекул только одной специфичности, поэтому возможность его эффективного применения снижается при способности меченого антигена к неспецифическому связыванию с иммобилизованными на носителе белками или адсорбировавшимися на них после первой инкубаций иммуноглобулинами. [c.92]

Метод ОТНОСИТСЯ к гомогенно-гетерогенным, так как первая стадия взаимодействия антител с определяемым и меченым антигеном проходит в растворе. После установления в системе равновесия в раствор вносят носитель с иммобилизованными вторичными антителами, которые сорбируют образовавшиеся на первой стадии специфические иммунохимические комплексы. Часто отделение образовавшегося комплекса достигается за счет образования преципитата в присутствии растворимых антивидовых антител, необходимая для полноты осаждения концентрация которых предварительно должна быть точно подобрана. После проведения стадии отмывки несвязавшихся компонентов определяют ферментативную активность на носителе или в Преципитате. В литературе этот подход часто называют методом двойных антител (англ. double antibody assay). [c.98]

Отметим, что ПАП-метод может быть формально отнесен к слассифицированным ранее методам с использованием меченых 1НТИВИД0ВЫХ антител, только в данном случае используется не ко- алентный конъюгат антивидовое антитело — фермент, а последо- ательно получаемый комплекс антивидовое антитело — антитело с пероксидазе — пероксидаза. Недостатком ЦАП-метода является длинение схемы анализа, частичное ингибирование пероксидаз- ой активности при образовании комплекса с антителами, возмож-юсть диссоциации комплекса антитело—фермент при разведениях, тромывках, изменениях pH и ионной силы среды. [c.104]

Исследуемые антитела взаимодействуют с иммобилизованным штигеном. После промывки добавляют конъюгат антивидовых ан- ител с лектином в присутствий избытка специфического для лекти-[а углевода (например, метил-р-О-маннозида в случае конканава-[ина А) для предотвращения связывания лектина с углеводным сомпонентом антител и иммобилизованного антигену. [c.108]

Данный подход находит широкое применение на практике, так как позволяет определять разные антигены (как MOHO-, так и полидетерминантные) с использованием одних и тех же меченых антител. Анализ проводят следующим образом. К иммобилизованному на носителе антигену добавляют определяемый антиген и специфические антитела. В процессе инкубации иммобилизованный и определяемый антигены конкурируют за центры связывания антител. В результате на носителе образуется комплекс антиген — антитело, концентрация антител в котором пропорциональна начальной концентрации определяемого антигена. После удаления избытка несвязавшихся компонентов к носителю добавляют меченые ферментом антивидовые антитела, образующие комплекс со специфическими антителами. После удаления избытка меченых антител регистрируют концентрацию метки на носителе (см. схему гл. 4, 2). [c.251]

Физический смысл третьего условия состоит в том, что иммобилизованный антиген может значительно смещать равновесие зеакций, проходящих в растворе (и тем самым существенно ухудшать калибровочную кривую по сравнению с кривой титрования), голько в случае, если он способен связывать значительную часть антител, за которые идет конкуренция. С другой стороны, теоретически выгодное значительное снижение концентрации комплекса на носителе (В,<С[Ат]о) может приводить к трудности его де-гекций, осуществляемой с помощью меченых антивидовых антигел, что лимитируется чувствительностью регистрации метки. [c.252]

Ротавирусный антиген, специфические антитела против ротавируса (АТ), конъюгат специфических антител с пероксидазой Ат-ПХ), антивидовые антитела против иммуноглобулинов быка, меченные пероксидазой (АтрПХ), положительные и отрицательные стандарты для выявления ротавируса и специфических антител, компоненты для приготовления субстратов на основе 5-АС (см. 1 этой главы), полистирольные планшеты, микропнпеткн, спектрофотометр. [c.273]

В данном разделе, рассмотрён конкурентный метод ИФА, включающий конкуренцию адсорбированного на полистироле и определяемого тестостерона за центры связывания специфических антител, С последующим выявлением специфического комплекса иа твердой фазе меченными пероксидазой антивидовыми антителами (А. В. Захарычев. и др., 1987). [c.281]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология