Сыворотка плода коровы

Сыворотка плода коровы. [c.310]

Обычно используют сыворотку плода коровы (СПК), предварительно инактивированную нагреванием в водяной бане при 56 °С в течение 30 мин. Различные партии СПК значительно варьируют по способности поддерживать рост культур, поэто му чрезвычайно важно выбрать хорошую партию. Самый простой и надежный способ определения качества сы- [c.120]

Сыворотка плода -коровы, инактивированная нагреванием (30 мии, 56 0 [c.180]

Клетки инкубируют в пластиковых чашках Петри диаметром 10 см. Для инкубации используют модифицированную среду Игла (МСИ), не содержащую лейцина и лизина, прибавляют к ней 10% сыворотки плода коровы (диализованной в течение ночи против ЗФР), глутамин (2 мМ) и, кроме того, н-лейцин и зН-лизин (с удельной активностью 20—50 Ки/ммоль, в концентрации 100 мкКи на 1 мл культуральной среды). Если нужно маркировать только лейцином, можно использовать коммерческую МСИ без лейцина. В табл. 1 приведен состав среды, применяющейся для маркирования не только Н-лейцином и Н-лизином, [c.185]

Сыворотка плода коровы. ........... [c.185]

К остальной суспензии каждой фракции прибавляют 1 мл сыворотки плода коровы и 0,1 мл О,, %-ной взвеси бараньих эри- [c.260]

Раствор Хэнкса, содержащий 10% прогретой сыворотки плода коровы (РХ-СПК) [c.274]

Для того чтобы не было воздушных пузырьков, вату помещают в колонку, заполненную средой (5—10 мл ЗФР с Ъ% сыворотки плода коровы). Небольшие кусочки найлоновой ваты (длиной 1—2 см) укладывают в колонку до 6-миллиметровой отметки. Плотность набивки должна быть такой, чтобы без иглы скорость протекания достигала 150—200 капель в 1 мин при слое среды объемом 2 мл над столбиком ваты. Конечный объем колонки доводят до 6 мл. Колонку промывают 20 миллилитрами среды, надев иглу (в чехле), а затем инкубируют в вертикальном положении не менее 1 ч при 37°С, так, чтобы над ватой были 2 мл среды. Для сохранения стерильности колонку закрывают стерильным бумажным или пластиковым колпачком. Перед внесением клеток иглу снимают и дают вытечь излишнему объему среды. [c.302]

Берут суспензии гибридомных клеток, отмывают центрифугированием при обычных условиях и подсчитывают в камере Горяева. Готовят две клеточные суспензии для каждой гибридомы 2,5-10 клеток в 1 мл и 1,25-103 клеток в 1 мл. Суспензии готовят в холодной гибри-домной среде с 20% сыворотки плода коровы. Объем суспензии — по 2 мл. [c.313]

Сыворотка плода коровы. Она должна производиться фирмой, постоянно поставляющей проверенные партии сыворотки, используемой для роста гибридом, например Hybrite h. [c.191]

Выбор сыворотки. Отбору сыворотки необходимо уделять особое внимание. Сыворотки из различных источников сильно варьируют по свойствам. Надо проверять также каждую партию сывороток. Наибольшей способностью поддерживать рост гибридных клеток обладает сыворотка плода коровы (СПК). Чаще всего используют неинактивнрованную сыворотку, хотя некоторые исследователи предпочитают инактивировать ее прогреванием при 56°С в течение 30 мин для уменьшения возможной токсичности компонентов комплемента. СПК является одним из самых дорогих компонентов среды культивирования, поэтому с ней необходимо обращаться весьма экономно. Для культивирования клеток сразу после слияния, а также для клонирования используют высокую концентрацию СПК (15—20%). Как только гибридомы отобраны, их можно постепенно переводить иа рост в 10% СПК. Если клетки хорошо адаптировались, то концентрацию СПК можно снизить до 5%. [c.98]

Незараженная микоплазмами линия В95-8 растет в виде. монослоя, обладающего слабой адгезивностью к подложке. Для культивирования используют среду RPMI-1640, содержащую 8% сыворотки плода коровы (СПК) и стандартную добавку L-глутамина, антибиотиков и, если необходимо, фунгицидов. Как правило, линию выращивают в стандартных флаконах для культивирования, поместив их горизонтально в термостат во влажную атмосферу, содержащую 5% СОг. Для рассева культуры нужно плотно завернуть крышку и, встряхивая флакон, добиться отделения части клеток от пластика, затем перенести их в новый флакон. При нормальной скорости роста это надо делать 1—2 раза в неделю. [c.155]

Эритроциты можно сенсибилизировать антителами, как описано в разд. 3.3.2. Используя для связывания с эритроцитами три концентрации антител, обычно мюжно с nepiboro раза определить дозу, дающую крайне чувствительный антиглобулиновый тест,. без какой-либо тенденции к спонтанной агглютинации. Однако в то М случае, если эритроциты, нагруженные антиг ло булинами в оптимальной концентрации, все же проявляют склонность ж образованию (конгломератов в безбелковом буфере, можно рекомендовать проводить тест с использованием буфера, содержащего. 2% инактивированной нагреванием сыворотки. плода коровы (СПК). Постановка реакции аналогична таковой в случае прямой гемагглютинации, однако в связи с ее высокой чувствительностью для определения конечной точки титрования воз можно придется титровать антиглобулины в разведениях, превышающих 24-луночные серии, либо же начинать титрование с разведения 1 1000. Для достижения максимальной чувст вительности можно использовать 0,5%-ную суспензию сенсибилизированных клеток. [c.254]

После центрифугирования супернатант удаляют, а клеточный осадок осторожно ресуспендируют в 5—10 мл полной культуральной среды, содержащей сыворотку плода коровы (СПК). Мы обычно используем минимальную среду Игла (МСИ), модифицированную Дульбекко (МСИД МсКеагп et al., 1984), с добавлением сыворотки, однако применение среды RPMI-1640 также дает хорошие результаты. Далее мы будем называть полную среду для гибридов средой МСИД. После слияния определяют число жизнеспособных клеток, которое является показателем эффективности методики (обычно выход >70—80% живых клеток). [c.181]

Спленоциты, клетки лимфатических узлов или лимфоциты периферической крови культивируют в полной среде RPMI с добавлением 10% сыворотки плода коровы (СПК) при 37°С в присутствии внешних стимуляторов или без них. Для стимуляции клеток используют митогены, лимфокины или антигены. [c.203]

К этим средам добавляют антибиотики, -меркаптоэтанол (5- 10-S М) и соответствующее количество сыворотки плода коровы (СПК) (см. ниже). К среде RPMI добавляют также L-глу-тамин и пируват до конечной концентрации 1%. [c.234]

Нейлоновую вату в шприце постепенно смачивают, медленно добавляя забуференный физиологический раствор Дульбекко (Д-ЗФР), содержащий 0% сыворотки плода коровы (СПК) (Д-ЗФР-СПК). Шприц располагают вертикально и, осторожно постукивая пальцем по шприцу, удаляют пузырьки воздуха. Когда среда начнет вытекать из кончика шприца, зажим на его конце закрывают и продолжают добавлять среду до тех пор, пока нейлоновая вата полностью не смочится. [c.459]

СПКд —сыворотка плода коровы, инактивированная нагреванием [c.11]

Этим методом можно также с успехом изучать молекулы иммуноглобулинов других классов, обладающих сходными свойствами (Barnstable et al., 1978 A. Ziegler, неопубликованные данные). Однако в ИТФ сравнительный анализ иммуноглобулинов, содержащихся в разных сыворотках, имеет одно существенное ограничение. Дело в том, что любой вид отрицательно заряженных ионов, содержащихся в исследуемом образце, будет усиливать разделяющее действие амфолитов-носителей. Поскольку каждая из сравниваемых сывороток всегда имеет свой собственный набор разновидностей отрицательных ионов, сопоставление электрофореграмм становится невозможным подобное явление не имеет места при ИЭФ. Правда, сходство или различие компонентов в двух образцах можно установить, исследуя в ИТФ их смесь. Кроме того, мы обходили указанное затруднение, внося во все образцы одинаковые количества гетерогенной смеси немеченых ионов (10% лошадиной сыворотки или сыворотки плода коровы), так, чтобы они были в большом избытке по сравнению с [c.147]

Для выявления мембранных антигенов проводят окрашивание живых клеток в суспензии. Клетки, выделенные из тканей и полученные в культуре, окрашивают по однотипной методике. В обоих случаях клетки тщательно и осторожно промывают сбалансированным солевым раствором, содержащим 1% БСА или 10% сыворотки плода коровы (СПК), чтобы удалить мешающие окрашиванию сывороточные, секретнруемые или спонтанно освобождающиеся белки. Удобно проводить окрашивание при концентрации клеток 10—20-10 /мл в маленьких круглодонных пластмассовых или стеклянных пробирках. Желательно иметь пробирки для одноразового использования, так как присутствие следов детергента резко нарушает антигенную структуру клетки и активность антител, даже если его концентрация недостаточна, чтобы вызвать цитолиз. [c.173]

Если окрашивание приходится повторять более чем один раз, то меченую антисыворотку отмывают другим, более щадяи1им способом. Для этого взвесь клеток пропускают через большой объем сыворотки плода коровы. Используется неразведенная сыворотка или ее ступенчатый градиент 6 мл — 100%, 3 мл — [c.173]

Через 3 недели после пересадки животных вновь иммунизируют внутрнбрюшинно суспензией 2-10 живых лимфоидных клеток (смесь клеток селезенки, лимфоузлов и тимуса) в среде без сыворотки плода коровы. Такую иммунизацию повторяют еще три раза каждые 2 недели. Через неделю после каждой иммунизации у мышей из хвоста берут кровь. Активные сыворотки объединяют, разливают мелкими порциями и хранят при —20°С. [c.221]

Если продажная жидкая среда уже содержит глутамин, ее следует хранить в замороженном виде, иначе перед употреблением к ней нужно будет добавлять эту аминокислоту. Один из самых важных моментов — выбор подходящей сыворотки. Положительную реакцию в СКЛ можно наблюдать и в бессывороточной среде, но такая система еще недостаточно проверена. Обычно мы дополняем среду человеческой сывороткой она оказалась менее митогенной, чем сыворотка плода коровы. Для получения человеческой сыворотки кровь от каждого донора берут в асептических условиях в стерильную коническую пробирку на 50 мл и оставляют для свертывания не более чем на 2—3 ч при комнатной температуре (в сыворотках, полученных после более длительного свертывания, накапливаются ингибиторы). Сгустки отделяют от стенок, после чего пробирки центрифугируют 1 ч при 2000д. Затем каждую сыворотку стерильно отсасывают с помощью груши, собирают отдельно и проверяют на стерильность. Все сыворотки объединяют, инактивируют (30 мин при 56°С), разливают небольшими порциями и хранят при —20°С. Сыворотки отдельных доноров могут различаться по своим свойствам. Эти различия трудно учитывать, и для того, чтобы уменьшить их проявление, рекомендуется объединять сыворотки возможно большего числа доноров. Если замысел эксперимента предусмат- [c.242]

Первичные культуры получают так же, как было описано выше, только вместо человеческой сыворотки в среду добавляют сыворотку плода коровы (СПК) до конечной концентрации 10% ло объему. Из имеющихся образцов этой сыворотки нужно выбирать те, которые обладают низкой митогенной активностью. Ми-тогенные факторы СПК снижают воспроизводимость СКЛ и мешают при анализе специфичности и кинетики этой реакции. [c.249]

Для получения градиента низкой плотности, стабилизирующего седиментацию клеток, различные лаборатории используют три основных реагента бычий сывороточный альбумин, сыворотку плода коровы и фиколл. В табл. 1 указаны эти реагенты и их концентрации, используемые для седиментационной среды. Бычий сывороточный альбумин и сыворотка плода коровы (Gib o, Гранд Айленд, США)—это белковые материалы, обладающие выраженными буферными свойствами. Первый из них мы получаем в виде лиофилизированпого препарата фракции V по Кону (Pentex, США), растворяем в сбалансированном солевом растворе Игла (см. разд. III, А) до концентрации 20%, фильтруем и храним при 4°С доводим pH до нужной величины с помощью [c.269]

Фиколл (Pharma ia, Упсала, Швеция) — высокомолекулярный полисахарид (мол. вес 400 000). Поскольку в нем мало заряженных групп (по сравнению с белками), его влияние на pH незначительно. Этот реагент относительно инертен, он не обладает адгезивностью к поверхностным мембранным белкам и не изменяет их заряда. Поэтому фиколл используют при разделении клеток с целью изучения их мембран. Кроме того, он гораздо дешевле, чем бычий сывороточный альбумин или сыворотка плода коровы. Перед применением все эти три реагента должны быть проверены на отсутствие цитотоксичности. Важно также выяснить, не влияют ли они на те функции клеток, которые предстоит изучать. [c.269]

Клетки остаются связанными с частицами иммуносорбента и не могут быть отделены от них простым отмыванием сывороткой плода коровы. Конъюгат желатины с гаптеном можно отделить от клеточной поверхности с помощью трипсина или коллагеназы. В большинстве случаев необходимо пользоваться высокоочи-щенной коллагеназой марки А, которая не действует на поверхностные белки клеток. К 0,9 мл клеточной суспензии в СРЭЗ или ЗФР (содержащей до 10 клеток) прибавляют 0,1 мл 0,1 /о-ного раствора коллагеназы. При достаточной активности препарата коллагеназы можно применять более низкие концентрации. [c.285]

Смесь оставляют на 10 мин при 37°С, затем клетки дважды отмывают, подслаивая под 1 мл сыворотки плода коровы. Чтобы не потерять много клеток, всю обработку проводят в силикопн-рованной посуде. В некоторых случаях целесообразно проводить ферментолиз при 4°С в течение 20 мин. При этом клетки также очищаются от примеси конъюгата желатины с гаптеном. [c.286]

Человеческую сыворотку следует предпочесть сыворотке плода коровы, так как выяснилось, что она дает более низкий уровень пролиферации отвечающих клеток, культивируемых с облученными сингенными клетками (контроль). Человеческую сыворотку получают следующим образом. Кровь от предварительно подобранных доноров асептически собирают в стерильные конические пробирки (Fal on Plasti 2070 50 мл) и на 2—3 ч оставляют, для свертывания при комнатной температуре. Для удаления эритроцитов и тромбоцитов сыворотку переносят в другие пробирки и центрифугируют 15 мин при 2000g. Сыворотки из каждой пробирки собирают отдельно, проверяют на стерильность, а затем объединяют, инактивируют прогреванием, разливают небольшими порциями и хранят при —20°С. [c.301]

После инкубации с аллоантисывороткой клетки в тех же пробирках при 4°С отмывают (см. разд. IV,А) в сбалансированном солевом растворе Хэнкса (Flow Laboratories Ltd., Ирвин, Шотландия), содержащем 5% прогретой сыворотки плода коровы, 15,мМ буфер ГЭПЭС и 10 мМ азид натрия. В этой среде клетки находятся на протяжении всего опыта. Клетки (не более 2,5-10 на пробирку) тщательно ресуспендируют в 50 мкл среды и добавляют 50 мкЛ подходящего флуоресцирующего реагента (разве- [c.305]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология