Агглютинация, тесты

Гуморальный иммунный ответ экспериментальных животных на эритроцитарный антиген изучали в реакции прямой гемагглютинации [102]. Постановку реакции осуществляли в соответствии с методическими рекомендациями [103]. За титр антител, выраженный в log , принимали конечное разведение сыворотки, при котором наблюдалась видимая агглютинация тест-антигена (1% ЭБ). [c.227]

Тесты на агглютинацию на предметных стеклах [c.64]

У многих вирусов имеются антигены, которые могут адсорбироваться на эритроцитах и вызывать их слипание. При взаимодействии большого количества вирусных частиц и эритроцитов образуется сеть клеток, и суспензия агглютинирует, т. е. эритроциты выпадают в осадок. Существует некоторая специфичность, заключающаяся в том, что определенные вирусы вызывают агглютинацию эритроцитов определенных животных, но если обнаружена активная комбинация, то гемагглютинация становится быстрым тестом, позволяющим определить титр вируса. [c.211]

Двойная диффузия в геле — это единственный в своем роде, уникальный и простой метод изучения антигенных взаимосвязей между молекулами и специфичности антител. Он имеет два главных недостатка а) относительно низкую чувствительность по сравнению с непрямыми методами, например реакциями агглютинации и иммуноферментными тестами, и б) при исследовании смесей антигенов методом ДДГ часто наблюдаются перекрывающиеся и накладывающиеся друг на друга линии преципитации. В этом отношении ДДГ уступает ИЭФ (разд. 4.1), в котором антигены разделяются в геле иа Начальной электрофоретической стадии. [c.207]

Это смещение исчезло бы, однако, если бы можно было обследовать достаточное число лиц, потому что любой локус, контролирующий группу крови, предположительно может мутировать и в конце концов будет обнаружен как редкий вариант. Сначала, когда реакции перекрестной агглютинации проводились только у небольшого числа людей, выявлялись лишь наиболее полиморфные локусы, но по мере увеличения числа тестов и выявления все большего числа относительно инвариантных локусов кумулятивная оценка генотипической изменчивости должна понижаться. [c.135]

Для типирования каждого образца эритроцитов берут две опытные и одну контрольную (с нормальной мышиной сывороткой) пробирки. В опытные пробирки наливают по 0,1 мл того разведения антисыворотки, которое вызывало оптимальную агглютинацию, в контрольную — 0,1 мл нормальной сыворотки в том же разведении. Затем в каждую пробирку тест-системы добавляют по 0,05 мл 2%-ной взвеси типируемых эритроцитов, встряхивают штатив, инкубируют 2 ч при комнатной температуре и учитывают реакцию. [c.223]

Наиболее распространенными иммуноглобулинами являются IgG ж IgM. Именно эти классы иммуноглобулинов описаны в серологических реакциях с участием вирусов растений. Сравнительное значение IgG и IgM иммуноглобулинов в различных описанных ниже серологических тестах варьирует в зависимости от характера антигена. Как правило, в тестах, используемых обычно при работе с вирусами растений (реакции преципитации, агглютинации и связывания комплемента), чаще фигурирует класс 7S (IgG). [c.360]

Выполнение работы включало три основных этапа I) направленный синтез высокоспецифических реагентов, являющихся основой получения коньюгатов антигенов, и последующая наработка иммуноспецифических субстанций антител к наркотикам и монодисперсных полимерных суспензий с заданными свойствами реакционно-способных комплексов гаптенов либо их специфических антител с ферментом или их макромолекулярным носителем (белок, полимер) 2) разработка иммунохимического метода анализа для определения опиатов, каннабиноидов и гидазепама на основе полученных реагентов с использованием латексной агглютинации 3) разработка экспериментально-технологического регламента и пакета нормативно-технической документации для выпуска опытно-промышленной серии иммунодиагностикумов для быстрого определения наркотиков в биологической жидкости человека. Создание и испытание опытных серий наборов тест-систем для получения необходимых рекомендаций для внедрения в клиническую практику. [c.200]

Была предпринята попытка разработать тест-систему и при использовании двух других латексных антигенов - акролеинового и белкового. В случае применения латекса на основе БСА агглютинация происходила лишь при больших концентрациях морфина 500 мкг/мл и данный метод нельзя рекомендовать для практической диагностики. Использование морфина, меченого акролеиновым латексом, позволило разработать метод с высокой чувствительностью выявления опиатов 100 нг/мл. Однако, результаты плохо воспроизводились из-за происходящей в ряде случаев спонтанной агглютинации. [c.203]

У выделенных культур (реже непосредственно в исследуемом материале) определяют характерные для возбудителя токсины (цитотоксин, энтеротоксин). Для этого используют тесты нейтрализации на культуре ткани и ИФА (последний также используют для скрининга токсигенных культур). Для быстрого обнаружения возбудителя в исследуемом материале применяют реакцию агглютинации латексных частиц, нагруженных антителами к С. diffi ile. Ввиду широкого распространения данных микроорганизмов у здо- [c.195]

Подводя итоги экспериментальным наблюдениям при изучении влияния на организм животных нитробензола и п-нитрохлорбензола, по двум тестам (фагоцитарная активность лейкоцитов и титр агглютинации), фагоцитарную активность следует признать более чувствительным тестом, занимающим меньше времени при постановке исследований. Исходя из полученных данных и учитывая громоздкость проведения определения титра агглютининов при постановке санитарно-токсикологиче-ского эксперимента, можно ограничиться изучением иммунологической реактивности организма по тесту на фагоцитарную активность лейкоцитов. [c.299]

Часто (особенно в случаях с патогенными бактериями) проводят быструю предварительную идентификацию до рода или вида с помощью диагностических сывороток. Однако такие тесты бывают не абсолютно специфичными, и обычно для подтверждения полученных с их помощью результатов требуется проведение дополнительных физиологических тестов. Например, агглютинация грамотрицательных кишечных палочек поливалентной сывороткой Salmonella является предварительным свидетельством в пользу их принадлежности к роду Salmonella, но это обязательно должно быть подтверждено рядом биохимических тестов. [c.10]

Л. Аггля)тинацяя. Реакция агглютинации, т.е. сшивание антиген-сенсибнлизированных клеток или частичек с помощью соответствующих антител, известна уже давно и детально описана в иммунологической литературе. Агтлютинационные тесты можно использовать для определения как антигена, так и антитела в зависимости от того, какой реагент связывается с твердой фазой. Известен прямой (образование осадка) и конкурентный (ингибирование образования осадка) варианты реакции. [c.80]

Агглютинационные тесты очень хорошо подходят как для самодиагноза, так и для лабораторий при кабинете врача, поскольку они очень просты и не требуют никакого оборудования. Однако по чувствительности они сильно уступают иммуноферментным методам анализа, так как в них сигнал не усиливается. К тому же интерпретация полученных данных довольно субъективна, а сами агглютинационные тесты подвержены случайным механическим воздействиям, сотрясениям, которые могут разрушать образующиеся структуры и приводить к неправильным результатам. Кроме того, при наличии в пробе ревматоидного фактора или молекул типа белка А возможна неспецифическая агглютинация. Подобные белку А вещества (Наиболее опасны при диагностике инфекционных заболеваний, поскольку они имеются на поверхности многих обычных микроорганизмов. [c.80]

Работа с антителами зачастую требует от исследователя самостоятельного получения реагентов, в связи с чем в первую очередь возникает задача получения иммуногена. В случае растворимых простых иммуногенов для достижения хороших результатов молекулы должны быть как можно лучше очищены. Поэтому первый рассматриваемый метод — это оценка чистоты антигенного препарата. После сбора антисыворотки необходимо оценить ее качество. В зависимости от характера тест-системы, используемой на заключительном этапе, сыворотку необходимо проверить на специфичность, титр и параметры связывания. Это требует знания процедур контроля качества, в некоторых случаях включающих в себя определение изотопического спектра антител. На заключительном этапе важен правильный выбор теста (табл. 1.2)—.например, выбор между иммунофлуоресцентным и иммунопероксидазным методами в случае тканевых и клеточных антигенов либо между агглютинацией, ELISA, РИА и реакциями преципитации в случае растворимых антигенов. При использовании некоторых тест-систем может потребоваться очистка антител для последующего мечения либо получение и мечение антиглобулинового реагента. К оценке преимуществ и недостатков тест-систем следует подходить осторожно. [c.30]

У большинства видов, животных агглютинирующими свойствами обладают как IgQ, так и IgM. Антитела класса М более эффективны в реакции агглютинации, поскольку отличаются высокой валентностью. Прямые и пассивные тесты позволяют количественно (по титрам агглютинации) сравнивать между собой различные сыворотки при условии точной стандартизации условий эксперимента. Некоторые антиэритроцитарные антитела, полученные от человека или экспериментальных животных, слабо агглютинируют либо совсем не агглютинируют эритроциты как в лрямых, так и в пассивных тестах. Причина этого может заключаться в недостаточном количестве либо в малой доступности антигенных детерминант на поверхности клеток. Другая причина — принадлежность исследуемых антител к классу G, которые представляют собой неэффективные агглютинины. Такие антитела можно выявить, связывая их с эритроцитами и используя анти-глобулиновые сыворотки к иммуноглобулиновым детерминантам. Такие сыворотки получают путем иммунизации животных соответствующими антителами. Описанный тест был разработан Кумбсом для обнаружения так называемых непол--шых антител, ж которым относятся, например, IgG человека К резус-антигену. Зта реакция, называемая пробой Кумбса, отличается высокой чувствитель Ностью. Она применяется и в других целях например, если в распоряжении исследователя имеются изотипСпецифические антиглобулийы, то с их помо- [c.240]

Мер каптоэтанол (2-МЭ) может вызывать диссоциацию lgM-пентамеров, р результате. чего они утрачивают агглютинирующую способность. Поэтому добавление данного реагента приводит к Т о му, что в реакции агглютинации участвуют лишь IgG, что позволяет сравнивать титры. IgM и IgG. Антитела, связывающие комплемент (источником которого служит свежая сыворотка), в его присутствии вызывают лизис эритроцитов-мишеней. У большинства видов животных лишь некоторые подклассы IgG способны связывать комплемент в то же время IgM обладают более высокой комплемент-свя- Зывающей активностью. Поэтому антисыворотки с высоким Содержанием IgM имеют более высокий гемолитический титр, чем сыворот. ки, в составе которых преобладают JgG. Гемолитические тесты, в делом, более. чувствительны, чем агглютинационные— раз умеется, лишь в том случае, если участвующие в реакции антитела связывают комплемент. Поскольку 2-МЭ обладает способностью ингибировать связывание комплемента IgM, он заметно снижает гемолитический титр антисывороток с высо ким содержанием антител этого класса. В результа те можно. определить концентрацию IgM в сыворотке (ом. рис. 7.2). [c.241]

Эритроциты можно сенсибилизировать антителами, как описано в разд. 3.3.2. Используя для связывания с эритроцитами три концентрации антител, обычно мюжно с nepiboro раза определить дозу, дающую крайне чувствительный антиглобулиновый тест,. без какой-либо тенденции к спонтанной агглютинации. Однако в то М случае, если эритроциты, нагруженные антиг ло булинами в оптимальной концентрации, все же проявляют склонность ж образованию (конгломератов в безбелковом буфере, можно рекомендовать проводить тест с использованием буфера, содержащего. 2% инактивированной нагреванием сыворотки. плода коровы (СПК). Постановка реакции аналогична таковой в случае прямой гемагглютинации, однако в связи с ее высокой чувствительностью для определения конечной точки титрования воз можно придется титровать антиглобулины в разведениях, превышающих 24-луночные серии, либо же начинать титрование с разведения 1 1000. Для достижения максимальной чувст вительности можно использовать 0,5%-ную суспензию сенсибилизированных клеток. [c.254]

В одностадийном тесте в лунках готовят последовательные разведения антигена на среде H-RPMI — 2% СПК и катем добавляют нагруженные антителами эритроциты. Далее панели инкубируют. Конечной точкой титрования антигена считают максимальное раз ведение, дающее положительную агглютинацию, клеток. Тест используют как для выявления антигена, так и для его количественного определения против стандартных разведений. [c.263]

Техника типирования. Суточную агаровую культуру исследуемого штамма S. typhi проверяют на содержание Vi-антигена в реакции агглютинации с монорецепторной VI-сывороткой. При наличии указанного антигена культуру засевают в пробирку с 4 мл мартеновского бульона pH 6,8— 7,2 (рец. 40) или бульона Хоттингера (рец. 37) и помещают в термостат на 3—4 ч. По истечении указанного срока бульонную культуру высевают на чашку со слабощелочным питательным агаром. Посев производят петлей диаметром 5 мм в виде отдельных капель, число которых должно соответствовать количеству используемых типовых бактериофагов. После того как нанесенная культура впитается в агар и засеянные участки подсохнут, на них наносят петлей несколько меньшего диаметра капли типовых бактериофагов в тест-разведениях (см. с. 80). После подсыхания капель бактериофага чашки помещают в термостат при 37—37,5° С. [c.221]

Таблица 13-4. Постановка опытов, в которых изучали блокирование препаратами сыворотки больных инфекционным мононуклеозом, положительными по данным тест-системы ORDIA IM, но отрицательными по агглютинации лошадиных эритроцитов

Такой подход к проверке достоверности анализа особенно полезен для тех препаратов, которые оказываются положительными по данным ELISA, но отрицательными по данным альтернативного контрольного метода. Это можно проиллюстрировать на примерах тестирования препаратов сыворотки больных инфекционным мононуклеозом, приведенных в табл. 13-4. Диагноз был основан на обнаружении у больных IgM против капсидного антигена вируса Эпштейна — Барра. В то же время эти препараты сыворотки давали отрицательную реакцию з анализе, основанном на агглютинации лошадиных эритроцитов. Можно видеть, что очищенный гетерофильный 1М-антиген и строма из бычьих эритроцитов эффективно блокируют последующие реакции в тест-системе ORDIA IM, в то время как агрегированные нагреванием IgG человека на них абсолютно не влияют. Последние, конечно, как уже упоминалось, весьма эффективно блокируют реакции в системе тестирования ревматоидных IgM. [c.205]

Несравненно больше антигенных детерминантов, чем на бел ке, находится или может быть закреплено на поверхности целой клетки. Взаимодействие антител с этими поверхностными детерминантами, опять-таки,в силу бивалентности антител, приводит к связыванию, или агглютинации клеток. Образование даже небольших клеточных агрегатов приводит к их быстрому и хорошо заметному осаждению из суспензии. Это обстоятельство позволило разработать столь же быстрый, как кольцевой тест, но на три порядка более чувствительный метод обнаружения антител в иммунной антисыворотке. [c.121]

Пример 10-В. Обнаружение гонадотропинов в моче беременных женщин методом торможения и пассивной агглютинации. Небольшие частицы полистирола можно покрыть гонадотропином человека — гормоном, который найден в моче беременных женщин. Прибавление антигонадотропина приводит к слипанию таких покрытых частиц (рис. 10-П) это явление хорошо видно с помощью оптического микроскопа. Если к таким покрытым частицам добавить мочу беременной женщины перед прибавлением антитела, то гонадотропин мочи будет конкурировать с покрытыми частицами за место па антителе, поэтому агрегаты образовываться не будут. Это свойство обычно используется в качестве теста па наличие беременности. [c.264]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология