Иммуноглобулины кролика, очистка

Фракции антител, специфичных к тяжелым цепям соответствующих иммуноглобулинов, получали, исходя из антисыворотки кролика или морской свинки, аффинной хроматографией на колонках, содержащих иммобилизованные подходящие Ig, индивидуальные или в смеси с другими белками (табл. 114-1). До проведения хроматографической очистки все антисыворотки анализировали с помощью иммунодиффузии. Для каждой антисыворотки подбирали подходящую колонку, проводя предварительные адсорбционные тесты с использованием соответствующих антигенов. [c.212]

Ферритин выделяли по модифицированной методике Гранина (Grani k, 1942) и подвергали дополнительной очистке на сефарозе 6В. Каждому кролику вводили по 100 мкг очищенного ферритина, смешанного с равным объемом адъюванта Фрейнда. Через И нед проводили повторную иммунизацию такой же дозой антигена. Спустя еще 8 нед от 5 кроликов брали кровь, из которой получали антисыворотку, используемую для покрытия фильтров антителами. Антитела козы против иммуноглобулинов кролика приобретали у Antibodies, [c.303]

К насыщенному раствору (NH4)2S04 добавляют 2 н. NaOH и доводят pH до 7,8. При постоянном перемешивании медленно, по каплям к 50 мл сыворотки кролика добавляют 80 мл насыщенного раствора сульфата аммония (pH 7,8) и перемешивают в течение 2—3 ч. Центрифугируют суспензию при комнатной температуре 30 мин при 1500 g. Первый осадок содержит все -у-глобулины, другие глобулины и следы альбумина. Растворяют осадок в дистиллированной воде до начального объема сыворотки (50 мл). Очищают фракцию у-глобули-нов вторым и третьим осаждениями. После третьего осаждения растворяют осадок в боратном буфере (pH 8,45) до конечного объема 20— 25 мл. Удаляют сульфат аммония диализом при 4°С против боратного буфера в течение 2—3 дней со сменой буфера утром и вечером. Полученный после диализа препарат иммуноглобулинов обычно содержит небольшой осадок денатурированного белка и слегка опалесцирует. Центрифугируют при 4° С в течение 30 мин при 1400 s. В полученном препарате проверяют содержание белка и титров антител. Определяют белковый состав методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии ДСН (с. 119). Если полученный препарат у-глобулинов не отвечает требованиям эксперимента по стоте, проводят дальнейшую очистку с применением ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе. [c.308]

Знание того, где находится фитохром в растении, конечно,, помогло бы нам понять механизм его действия, и для получения этой информации было использовано несколько методов. Самые подробные данные о распределении фитохрома на уровне световой микроскопии получены нами с помощью метода иммуноцитохимии— с использованием антител, синтезируемых в организме животного после введения ему в кровь чужеродного белка. Кролики, которым вводят выделенный из растительной ткани фитохром, синтезируют антифитохромный иммуноглобулин. Это вещество после очистки специфически связывается с фитохромоМ в срезах растительной ткани. Присутствие здесь иммуноглобулина можно выявить благодаря связыванию другого его конца с ферментом пероксидазой, при действии которого на субстрат образуется нерастворимый окрашенный продукт. Распределение фитохрома в молодых побегах ячменя, выясненное этим методом, показано на рис. 11.15. [c.349]

При гуморальном ответе животного на эритроциты другого вида образуются IgM и IgG. Затем антиэритроцитарные антитела нагружают на эритроциты-мишени, которые при введении донору эритроцитов, вызывают образование антиглобулинов. Этот простой подход позволяет избежать очистки иммуноглобулинов и дает хорошие результаты. Например, введя кролику внутривенно 1 мл отмытых в физиологическом растворе эритроцитов барана (10%-ная суспензия, объем на объем), можно легко получить соответствующие антиэритроцитарные антитела. При взятии крови через 10 дней после первой инъекции главным образом получают IgM. Повторное введение антигена через 1 нед и 2 раза в неделю в течение последующих несколькнх недель с забором крови через 2—5 дней после последней инъекции преимущественно обеспечивает получение IgG. Сыворотки затем могут быть смешаны. [c.53]

К сывороточным иммунным препаратам относят иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Иммунные сыворотки получают из крови гипериммунизированных (интенсивно иммунизированных) животных (лошади, ослы, кролики) соответствующей вакциной или крови иммунизированных людей (используется донорская, плацентарная, абортная кровь). Нативные иммунные сыворотки для удаления из них балластных белков и повышения концентрации антител подвергают очистке, используя различные физико-химические методы (спиртовой, ферментативный, аффинная хроматография, ультрафильтрация). Очищенные и концентрированные иммунные сыворотки называют иммуноглобулинами. [c.191]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология