Сыворотка кролика

Белки являются специфическими антигенами антитела, образующиеся при впрыскивании чужеродного белка, дают осадки только с этим белком. Так, например, гемоглобин человека производит в сыворотке кролика антитело, осаждающееся гемоглобином человека, но не осаждающееся гемоглобином быка. Только в случае родственных животных родов антитела не дифференцируются белки сыворотки лошади производят в сыворотке кролика антитело, осаждающееся также белками сыворотки осла. С другой стороны, миоглобин быка обусловливает образование антитела, не осаждающегося гемоглобином того же животного ввиду того что оба вещества содержат гем, разумеется, что специфичность обусловлена не последним, а белковым участком молекулы. Белки теряют антигенные свойства в результате денатурации или частичного гидролиза протеолитическими ферментами. Желатина не обладает антигенными свойствами, потому что ее молекулы сильно расщеплены, а у инсулина, по-видимому, отсутствие антигенных свойств обусловлено слишком малым размером его молекул. [c.448]

Метод непрямой окраски флуоресцентными антителами используется в АТСС в качестве одного из способов подтверждения вида линии клеток. Техника окрашивания включает два этапа. На первом из них из сыворотки кролика получают ви- [c.118]

Для выделения у-глобулинов из сыворотки кролика обычно используют метод трехкратного высаливания сульфатом аммония при конечном насыщении 33%. Соли затем удаляют диализом. [c.308]

При проведении опыта исследуемый материал разводят в 1%-м растворе нормальной сыворотки кролика в объеме 0,025 мл в лунках планшеты. Затем в каждую лунку добавляют по 2 нейтрализующих дозы АГ в объеме 0,025 мл. Планшеты встряхивают и оставляют на 30 мин при 37 °С или на 1 ч при комнатной температуре. Затем во все лунки вносят по [c.63]

И второй эксперимент. Обычный гамма-глобулин из сыворотки кролика можно перестроить в пробирке в антитела, специфичные, скажем, к человеческому сывороточному альбумину с динитрофенильным остатком (ДНФ) в качестве дополнительной группы. Для этого достаточно только заранее немного (неполностью) развернуть молекулу гамма-глобулина и предоставить идти процессу свертывания в присутствии ДНФ-альбумина. Конечно, большая часть молекул приобретет исходную форму, однако 0,5% молекул станут все-таки после этого специфичными к ДНФ-альбумину. Может показаться, что это совсем мало, однако, в сущности, именно этого и следовало ожидать, так как, очевидно, всегда лишь немногие антигены будут встречаться с частично развернутым глобулином в нужном месте и в нужное время. [c.346]

А-эстераза сыворотки кролика ведет себя подобно нерастворимой ДФФ-азе печени в том смысле, что она утрачивает активность под действием Со +и Мп2+ и этим отличается от растворимой ДФФ-азы печени и от ДФФ-азы почек. Кроме того, фермент почек не действует на параоксон. [c.152]

Накапливание вируса можно успешно осуществлять на зародышах кур в качестве побочного хозяина. Вне хозяина вирус сохраняется очень короткий промежуток времени (в сыворотке кролика при 4 °С—10 дней), поэтому раньше его накапливали путем серийных пассажей через хозяина. В настоящее время патоген можно хранить в активном состоянии долгие годы при глубоком замораживании (при —70 °С) или после лиофильного высушивания. Так как внесение вируса в полевых условиях осуществляется путем выпуска предварительно зараженных кроликов, его незначительная устойчивость вне хозяина не играет большой роли. [c.206]

Иммунологические исследования тоже свидетельствуют о филогенетических связях между организмами. Если белки, содержащиеся в сыворотке крови, ввести в кровь животных, у которых этих глобинов нет, то они действуют как антигены, т. е. побуждают организм вырабатывать соответствующие антитела в результате возникает реакция антиген-антитело. Эта иммунная реакция обусловлена способностью жи-вотного-реципиента распознавать присутствие в сыворотке чужеродных белков. Человеческая сыворотка, введенная кроликам, сенсибилизирует их и вызывает у них образование антител к сывороточным белкам человека. Если спустя некоторое время к пробе сенсибилизированной сыворотки кролика добавить сыворотку человека, то произойдет образование комплексов антиген-антитело, выпадающих в осадок (преципитат), количество которого можно измерить. Если добавлять к пробам кроличьей сыворотки, содержащей антитела против сыворотки человека, сыворотки различных животных, то образуются разные количества преципитата. Предполагая, что количество преципитата находится в прямой зависимости от количеств чужеродного белка , этот метод можно использовать для оценки степени родства между разными группами животных (табл. 26.8). [c.304]

Активность очищенных групповых веществ крови можно измерить как по торможению гемагглютинации, так и по специфической преципитации с соответствующей антисывороткой [29]. Групповые вещества А человека и животных, кроме специфической А-активности, обладают еще одной особенностью, так называемой активностью Форемана, т. е. способностью тормозить гемолиз бараньих эритроцитов под действием иммунной анти-А-сыворотки кролика в присутствии комплемента [88]. Все попытки разделить эти активности были неудачны, и в настоящее время активность Форемана рассматривается как неотъемлемая часть активной молекулы вещества А. Вещества В, Н и Ье этой активностью не обладают. [c.176]

Для постановки РСК требуется точное определение количественных соотношений всех ингредиентов, участвующих в реакции исследуемой сыворотки, антигена, комплемента, гемолитической сыворотки кролика и эритроцитов барана. Поэтому постановке основного опыта предшествуют титрование гемолитической сыворотки и выбор ее рабочего разведения, титрование комплемента и выбор его рабочей дозы, титрование других ингредиентов. [c.119]

Сыворотка кролика является наиболее подходящим источником комплемента для этой реакции, благодаря присутствию в ней природных антител к клеткам человека. Взаимодействие этих антител с другими антигенами клеточной поверхности усиливает комплемент-зависимое цитотоксическое действие комплекса антител к ЛАЧ с антигенами. Титры и специфичность этих природных антител могут варьировать даже среди смешанных препаратов сыворотки кролика. Возникающие проблемы можно преодолеть, изменяя продолжительность инкубации, используя различные источники и разведения комплемента, разводя кроличью сыворотку сывороткой человека, или же путем абсорбции кроличьей сыворотки культивируемыми клетками [27]. Может потребоваться раздельный анализ каждой линии клеток, поскольку конечный результат зависит от множественных взаимодействий между присутствующими антителами и спектром антигенов на поверхности каждого типа клеток. [c.144]

В заключение отметим, что белки сыворотки кролика удается фракционировать хроматографией на силиконированном пористом стекле типа PG-10 (240 А). Элюцию вели лпиейпым градиентом (30—100%) ацетопитрила в 0,01 М Трис-НС1 (pH 7,6) [Mizntani et al., 1982]. [c.216]

К насыщенному раствору (NH4)2S04 добавляют 2 н. NaOH и доводят pH до 7,8. При постоянном перемешивании медленно, по каплям к 50 мл сыворотки кролика добавляют 80 мл насыщенного раствора сульфата аммония (pH 7,8) и перемешивают в течение 2—3 ч. Центрифугируют суспензию при комнатной температуре 30 мин при 1500 g. Первый осадок содержит все -у-глобулины, другие глобулины и следы альбумина. Растворяют осадок в дистиллированной воде до начального объема сыворотки (50 мл). Очищают фракцию у-глобули-нов вторым и третьим осаждениями. После третьего осаждения растворяют осадок в боратном буфере (pH 8,45) до конечного объема 20— 25 мл. Удаляют сульфат аммония диализом при 4°С против боратного буфера в течение 2—3 дней со сменой буфера утром и вечером. Полученный после диализа препарат иммуноглобулинов обычно содержит небольшой осадок денатурированного белка и слегка опалесцирует. Центрифугируют при 4° С в течение 30 мин при 1400 s. В полученном препарате проверяют содержание белка и титров антител. Определяют белковый состав методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии ДСН (с. 119). Если полученный препарат у-глобулинов не отвечает требованиям эксперимента по стоте, проводят дальнейшую очистку с применением ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе. [c.308]

Иглы из ац. 155. Раств-сть н.р. Н О (1,3-10 моль/л) р. ЕЮН, эф., многие орг. раств-ли, растительные масла 6%-ная сыворотка кролика (3,3-10 моль/л). 239 нм (IgE 4,23). Главный мужской половой стероидный гормон. Первично образуется в половых железах. В мужском организме превращается в аидростерон, этиохоланолон и эпиандростерон. Для клинического использ. доступен в виде эфиров (напр., пропионовой, фенилпропио-новой, нзокапроновой, энантовой кисл.). [c.161]

Методика постановки РТПГА. В лунки полистироловых планшетов или агглютинационные пробирки вносят по 0,025 мл 1%-го раствора нормальной сыворотки кролика и делают серийные 2-кратные разведения исследуемого материала. Затем во все лунки добавляют по 0,025 мл иммунной сыворотки, планшет встряхивают и оставляют на 30 мин при 37 °С или на 1 ч при комнатной температуре. Далее во все лунки добавляют по 0,025 мл антигенного диагностикума, встряхивают планшет и оставляют на 2 ч, после чего учитывают результаты. [c.63]

Благодаря использованию минимального количества АГ (2 нейтрализующие дозы) реакция высокочувствительна. Количество нейтрализующих доз в антигенном препарате определяют с помощью РНГА, при этом делают серийные 2-кратные разведения АГ в 1%-м растворе нормальной сыворотки кролика и в лунки вносят антительный эритроцитарный диагностикум. Нейтрализующей дозой АГ считают его максимальное разведение, дающее полное склеивание сенсибилизированных эритроцитов. [c.63]

Опыт сопровождают следующими видами контроля 1) стабильности сенсибилизированных эритроцитов (эритроциты + 1%-й раствор нормальной сыворотки кролика) 2) полноты истощения гемагглютининов в каждой испытуемой сыворотке (испытуемая сыворотка в наименьшем разведении + формалинизированные эритроциты) 3) правильности определения минимальной нейтрализующей дозы АГ (2, 1 и 0,5 нейтрализующей дозы АГ + антительный эритроцитарный диагностикум). [c.64]

Добавление солей К. в рацион и питьевую воду вызывает у крыс задержку роста костей и остеопороз, усиленное выведение кальция с мочой и калом, уменьшение активности щелочной фосфатазы. Близкий эффект был получен Цветковой при хроническом ингаляционном введении крысам пыли сульфата К. (только у рожавших самок). Среди ранних признаков экспериментальной кадмиевой интоксикации указывается на повыщение содержания в сыворотке кроликов холестерина и свободных жирных кислот (Yoshikawa). [c.165]

Существование системы групп крови ABO, которая хотя и оставалась неизвестной столь долгое время, было показано благодаря присутствию в сыворотке здоровых людей изоагглютиногенов анти-А и анти-В. Однако прощло более четверти века, пока у человека были открыты другие системы групп крови. В 1927 г. Ландштейнер и Левин, применив адсорбированные сыворотки кроликов, иммунизированных эритроцитами человека, доказали существование М-и N-антигенов (также Р). Поскольку анти-М- и анти-N-изоагглютинины встречаются редко и поскольку иммунизация соответствующими антигенами происходит с трудом, эти антигены не имеют значения при Переливании крови. В основном они представляют интерес для судебных медиков и антропологов. [c.74]

Физико-химические свойства антител очень близки к физикохимическим свойствам [ глобулинов нормальной сыворотки. В большинстве случаев их изоэлектрическая точка лежит около pH 6 [38]. Молекулярный вес антител крови кроликов и обезьян равен 157 ООО, а крови лошади, овцы и быка 920 ООО [39]. При гидролизе антител получаются те же самые аминокислоты, которые удается обнаружить в гидролизате нормальных т-глобули-нов [40]. В глобулинах нормальной сыворотки кролика и в антителах крови кроликов аминокислоты расположены в одной и той же последовательности. Оба белка содержат аспарагиновую кислоту, валин, лейцин, а на концах пептидных цепей находится аланин со свободной аминогруппой [41]. [c.335]

Гидролиз различных ФОС сывороткой кролика был изучен Маунтером [56]. Хорошо гидролизовались ДФФ, ТЭПФ и параоксон следуюш,ие соединения совсем не подвергались гидролизу паратион, шрадан, диэтилфосфорная кислота, триэтилфосфат триэтилфосфит и диэтилэтилфосфонат. Представлены доказатель ства в пользу того, что три перечисленные выше ФОС гидролизуют ся одним и тем же ферментом оказалось, что в разных условиях [c.152]

До сих пор мы обсуждали гидролиз ФОС, не рассматривая вопроса о том, в каком месте происходит расщепление молекулы яда. Под действием ДФФ-азы Мазура [52 ] из сыворотки кролика образовывалось около 0,7 моля F- на каждый моль гидролизованного ДФФ и при этом отщеплялось ничтожное количество Р04 . Хотя Мазур высказал предположение, что расщепление происходило только по Р — F-связи, однако здесь могло иметь место и выраженное отщепление одной изопропильной группы (до 30% к общему гидролизу). Вполне вероятно, что образующийся ионизированный продукт не подвергался дальнейшему разрушению до РО4" вследствие существенных различий в свойствах между ионизированным и не-ионизированным субстратами. Исключительно низкое количество фтора, обнаруженное Мазуром, мы можем рассматривать как доказательство того, что происходит расщепление изопропильной связи, но мы не можем сказать, предшествует ли это расщепление разрыву связи Р — F, или оно следует за ним, или, может быть, оно предотвращает этот разрыв. Маунтер и Дайн [63] показали, что при действии ДФФ-азы из почки свиньи на каждые 2 моля СО2, освобождающиеся при ферментативном гидролизе (в бикарбонатном буфере), образуется 0,97 моля F-, из чего следует, что в данном случае гидролиз протекал только по связи Р — F. [c.154]

Табуназа сыворотки кролика и лошади гидролизует табун исключительно по связи Р — N [13]. Зарин гндрол11зуется сывороткой крысы только по связи Р — F, и образующийся при этом изопропил-фосфонат совершенно не подвергается дальнейшему гидролизу [47]. [c.155]

Наоборот, сыворотка кролика, иммунизированного Russula, задерживает действие этого фермента, не влияя па фенолазу из La tarius. Наконец, ни та, ни другая сыворотка не де11ствуют на систему пероксидаза — перекись водорода . [c.567]

Оказалось, таким образом, что кипяченый сок при внутривенном введении кроликам неспособен сообщить их сыворотке антифенолатические свойства. Так как не была исключена возможность, что мы в данном случае имеем дело с индивидуально невосприимчивыми кроликами, мы подвергли их затем иммунизации активными растворами соответствующих препаратов фенолазы. Уже носле четвертой инъекции сыворотка кроликов обнаруживала ясно выраженные задерживающие свойства при дальней-щих инъекциях задерживающая сила их еще возросла. [c.568]

Приведенные данные в полной мере подтвери дают результаты Шютце и Бергеля и Кнафл-Ленца, которые нашли, что сыворотка кроликов, получивших инъекции инвертазы нз дрожжей, оказывает лишь незначительное влияние на действие этого фермента. Величина торможения также совпадает с данными указанных авторов она составляет от 10 до 15%. [c.573]

Измерения с помощью ультрацентрифуги, произведенные Гейдельбергом, Педерсеном и Тизелжусом, послужили доказательством того, что антитела являются видоизмененными сывороточными белками. С тщательно очищенными препаратами были получены константы седиментации, подобные константам, определенным для сывороточного глобулина кроме того, иммунная активность оказалась связанной с тем веществом, константа седиментации которого измерялась. В сочетании с электрофоретическими измерениями оказалось возможным разделить глобулины с одинаковым молекулярным весом, но с различными электрохимическими свойствами. Оказалось, что фракция -глобулина, выделенная из сыворотки кролика, несет функции антител [84]. Пневмококковые антитела человека также связаны с фракцией -глобулина и по форме молекул значительно отличаются от сферической формы [85]. Зайберт, Педерсен и Тизелиус [86] показали, что полисахариды и белковые фракции, выделенные из различных фильтратов туберкулезных бацилл, имеют одинаковые константы седиментации (около 1,7 10" ). Они по существу однородны и имеют молекулярный вес около 9000. Для белков туберкулезных штаммов быка и человека было найдено, что молекулярные веса равны соответственно 10 000 и 32 000. [c.547]

Атропинэстераза сыворотки кролика — неснецифический В-тип эсте-разы, является гликопротеином, содержащим сиаловую кислоту. Обработка нейраминидазой приводит к уменьшению общего отрицательного заряда молекулы белка фермента, что было показано с помощью электрофореза на крахмальном геле при pH 4,5. После отщепления сиаловой кислоты каталитические и антигенные свойства молекулы фермента в основном сохранялись [83]. [c.246]

Каждую реакцию иммунопреципитацни проводите с таким объемом надосадочной фракции, который эквивалентен примерно ЗХЮ клеток. Инкубируйте клеточный экстракт с 100 мкл надосадочной фракции антител нли с 10 мкл мышиной антисыворотки в течение ночи при 4 °С. Клеточные экстракты, инкубировавшиеся с моноклональными антителами, далее инкубируйте с 5 мкг антимышиных иммуноглобулинов (DAKO) и 5 мкл нормальной сыворотки кролика в течение 2 ч при комнатной температуре. [c.189]

В данном разделе метод вестерн-блоттинга используется для выявления экспрессии гена npt-II в трансформированных клетках моркови [50]. Антитела к NPT-П получали из сыворотки кролика, при этом животных иммунизировали ферментом, выделенным из Е. oli с помощью стандартных методов работы с белками (ионообменная [35] и аффинная [15] хроматография). Показано, что NPT-П выявляется в виде одной иммуно-реактивной зоны, обладающей той же электрофоретической подвижностью, что и исходный бактериальный фермент. Эти результаты позволяют сделать ряд заключений об экспрессии фермента в клетках растений трансляция мРНК гена nos-npt-II в [c.358]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология