Последняя инъекция антигена

Приготовление антигена заключается в смешивании следующ,их компонентов 6,25 мл сыворотки человека (берется смесь сывороток нескольких доноров), 12,5 мл 0,9%-ного раствора Na l, 5,0 мл геля гидроокиси алюминия, 1,25 мл 5%-ного раствора фенола. 2,5 мл этой смеси вводят внутримышечно животным в два места раз в неделю в течение 6 нед. Через неделю после последней инъекции у кролика берут кровь и определяют титр антител. Если титр сыворотки ещ,е не достиг необходимой величины или если с ее помощью нельзя выявить желаемого числа антигенных компонентов, еженедельные инъекции повторяют до получения нужного эффекта. [c.118]

Возможны различные варианты иммунизации через кровоток. Например, вводят 0,5%-ный раствор белка три раза в неделю, увеличивая объем инъекции от первой к пятой неделе в следующем порядке 0,5 1,0 1,5 2 и 3 мл. Кровь берут на 8-й день после последней инъекции. Иногда в ходе иммунизации кролик погибает. Кроме того, интенсивность иммунного ответа у разных особей различна. Ввиду этого антиген следует вводить параллельно трем—пяти животным. [c.106]

Для целей анализа подбирают такие условия иммунизации животных, при которых образовывались бы антитела с максимальной специфичностью и прочностью связи с антигеном. В зависимости от структуры антигена и поставленной задачи для получения антител используют различные виды животных от мелких лабораторных (мыши, морские свинки, кролики, куры) до крупных (овцы, козы, лошади). После нескольких инъекций антигена в присутствии стимуляторов иммунного ответа в сыворотке крови накапливаются специфические антитела. При иммунизации крупных животных можно получать большие количества антител для практических целей. В последнее время для иммунизации стали использовать кур, у которых антитела накапливаются в желтке яиц, что упрощает их получение и выделение. [c.103]

Один весьма успешный способ преодоления этой трудности заключается в отделении нужного фермента от других белков с помощью гель-электрофореза [100]. Образец фермента наносят на довольно крупнопористый гель и электрофорез продолжают до тех пор, пока фермент четко не отделится от всех сопутствующих примесей. После локализации положения фермента в геле последний разрезают и слой, содержащий фермент, растирают до получения тонкой суспензии, состоящей из полиакриламидного геля и фермента. Эту суспензию и используют затем для первой инъекции нескольких сотен микрограммов белка оказывается вполне достаточно. Иммуноглобулины, полученные таким способом, содержат до 10% антител к нужному ферменту. Остальные 90% — это относительно неспецифические иммуноглобулины, присутствующие в организме животного к моменту иммунизации. К 1 см агарозы можно присоединить десятки миллиграммов иммуноглобулина, [101]. При этом на 1 смз геля будет приходиться до 1 мг специфических антител. Но, поскольку молекулы антител присоединяются к адсорбенту таким образом, что это приводит в большинстве случаев к потере их способности связывать антиген, концентрация активных антител будет составлять, вероятно, лишь около 0,1 мг/см Если каждая молекула этих антител связывает одну молекулу антигена с близким значением молекулярной массы, то емкость такой колонки будет порядка 0,1 мг/см , это небольшая, но вполне достаточная емкость для очистки малых [c.174]

Перед слиянием донорной мыши следует последний раз ввести антиген. Цель такой подхлестывающей инъекции — избирательно стимулировать пролиферацию ответственных за синтез специфических антител В-лимфоцитов и локализовать их в определенном органе, в данном случае в селезенке. Эту инъекцию не проводят, когда в сыворотке еще сохраняется довольно высокая концентрация антител к вводимому иммуногену. Поэтому иммунизированному животному не следует делать инъекций антигена по крайней мере в течение месяца перед подхлестывающей инъекцией. Если гибридный белок растворим, последняя инъекция может быть внутривенной (введение в хвостовую вену), поскольку этот путь введения антигена особенно эффективен. Инъецируют от 10 до 100 мкг белка в объеме 0,5 мл физиологического раствора или PBS без адъюванта. Чтобы антиген был стерильным, перед инъекцией пропустите его раствор через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм. Если гибридный белок труднорастворим, не фильтруйте антиген и не делайте внутривенной инъекции, а вместо этого внутрибрюшин- [c.188]

НО введите непрофильтрованный антиген за шесть, пять и четыре дня до инъекции. Слияние надо проводить через 72—96 ч после последней инъекции. [c.190]

II. Пневмокок,ки типа III, антитела к углеводному компоненту S3. Очищенный компонент пневмококка S3 обладает чрезвычайно низкой иммуногенностью (или не обладает совсем) для кролика. Однако введенный в/в вместе с мембранными белками убитых нагреванием микроорганизмов, он вызывает эффективное образование IgG, отличающихся высокой типовой и антигенной специфичностью. С помощью повторных курсов получают не менее 5 мг/мл специфических антител, и у многих животных можно повысить концентрацию IgG в сыворотке до 20 мг/мл и более. Данный ответ не зависит от влияния белковых иммуногенов на синтез антител. В одном из наших экспериментов [38] кролики получали не менее двух курсов по девять в/в инъекций в течение 19 дней начальная доза составляла 10 микроорганизмов, с шестой инъекции — 4- 10 , а в конце дозу доводили до 10 ° микроорганизмов. Кровь забирали через 3—4 дня после последней инъекции. [c.84]

Для растворимых антигенов известны разнообразные схемы иммунизации. Например, первую инъекцию 100 мкг антигена, эмульгированного в полном или неполном адъюванте Фрейнда, осуществляют подкожно (в 0,1 мл), а последующие инъекции (оо 100 мкг в PBS объемом 0,5 мл) проводят в/б с интервалом в месяц. Отбирают пробу крови, чтобы убедиться в наличии адекватного титра антител в сыворотке, а затем осуществляют последние инъекции антигена (в/б утром и в/в днем), за 3—4 дня до гибридизации. [c.123]

Эти антисыворотки наиболее полезны для исследований полиморфизма в пределах вида. К сожалению, их получение часто оказывается затруднительным, особенно антисывороток к антигенам МНС. Дело в том, что методики, даюш.ие наилучшие результаты при получении аллоантисывороток, включают предварительную трансплантацию кожи животному, предназначенному для иммунизации. После полного отторжения трансплантата животному делают разрешающие инъекции эритроцитов или лимфоцитов от донора кожи (несколько миллионов клеток на инъекцию для лягушки массой 50—100 г без адъюванта) и берут у него кровь через 2 нед после последней иммунизации. Если титры антител высокие, а специфичность антисыворотки соответствует ожидаемой, то кровь у животных можно брать повторно через 1—2 нед без дополнительных антигенных инъекций. После этого повторными разрешающими инъекциями (например, раз в два месяца) поддерживают образование антител на необходимом уровне. [c.488]

Некоторые авторы рекомендуют вводить антиген в смеси с адъювантом (подкожно) одновременно в область затылка (0,4 мл) и в обе задние лапы близ ахиллесова сухожилия (по 0,3 мл). В последние годы часто практикуется рассредоточенная подкожная инъекция — одновременно в 20 местах на спине животного. При введении раствора кожу следует слегка оттянуть так, чтобы игла под ней свободно перемещалась. Вводят раствор медленно, кожу смазывают иодом, но шерсть не выстригают— она предохраняет место инъекции от охлаждения, что способствует всасыванию антигена. Иногда, в случае необходимости экономии антигена, используют микровариант иммунизации с введением по 10—50 мкл 5%-ного белкового раствора по приведенной выше схеме в подушечки всех четырех лап кролика. Эту операцию производят с помощью шприца Гамильтона. Она очень болезненна и требует анестезии. В любом варианте иммунизация занимает несколько недель. [c.106]

Как установлено, немаловажное значение для возникновения иммунного ответа имеет способ введения антигена. Антигены, введенные подкожно или внутрикожно, вызывают иммунный ответ, тогда как при внутривенной инъекции, приеме внутрь или применении в виде аэрозоля они могут индуцировать толерантность либо иммунное отклонение. (В последнем случае вместо ответа, опосредуемого Т-клетками D4 одного типа, возникает реакция, опосредуемая Т-лимфоцитами D4 другого типа.) Например, грызуны в случае приема овальбумина (ОА) или основного белка миелина (ОБМ) с кормом не реагируют на последующую стимуляцию соответствующим антигеном. Более того, применение ОБМ защищает животных от развития аутоиммунного заболевания — экспериментального аллергического энцефаломиелита (ЭАЭ). Этот феномен может быть использован с терапевтической целью при аллергических расстройствах недавно проведенные исследования показали, что перо-ральное введение Т-клеточного эпитопа аллергена Der р1 клеща домашней пыли может обеспечить толерантность к нативному антигену. Меза-низмом(ами) толерантности при этом может быть как анергия, так и иммунное отклонение. [c.238]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология