Сыворотка как источник комплемент

Непрямой иммунофлуоресцентный метод со связыванием комплемента. Этот вариант метода разработан для определения комплемент-связываю-щих антител (см. рис. 29.7). После обработки среза антителами на него наносят в качестве источника комплемента свежую сыворотку. Комплемент связывается в участках, где фиксированы антитела. В результате эффекта усиления при активации комплемента по классическому пути (см. гл. 5) одна молекула антител может вызвать связывание многих СЗЬ-молекул на срезе их выявляют, обрабатывая срез флуоресцентно меченными антителами анти-СЗЬ. [c.533]

Комплемент (С ). Источником комплемента обычно служит кроличья сыворотка, которую либо покупают, либо готовят самостоятельно. [c.195]

Если иммунизировать животное чужеродными эритроцитами, то образуются антитела, обладающие способностью агглютинировать эритроциты, подобные тем, которыми производилась иммунизация. Антигенами, вызывающими образование этих агглютининов, служат так называемые группоспецифические вещества крови, которые мы уже упоминали в гл. XI. Агглютинины и другие антитела не разрушаются нагреванием до 56°, поэтому агглютинация не нарушается при прогревании иммунной сыворотки в течение 30 мин. при 56°. Между прогретой и непрогретой иммунной сывороткой имеется существенное различие при применении непрогретой сыворотки помимо агглютинации эритроцитов наблюдается также и гемолиз, прогретая же сыворотка ие обладает гемолитическим действием. Гемолиз вызывается находящимся в сыворотке термолабильным комплексом, получившим название комплемент. Обычным источником комплемента служит сыворотка морской свинки, которая содержит значительное количество этого комплекса. [c.347]

Сыворотка кролика является наиболее подходящим источником комплемента для этой реакции, благодаря присутствию в ней природных антител к клеткам человека. Взаимодействие этих антител с другими антигенами клеточной поверхности усиливает комплемент-зависимое цитотоксическое действие комплекса антител к ЛАЧ с антигенами. Титры и специфичность этих природных антител могут варьировать даже среди смешанных препаратов сыворотки кролика. Возникающие проблемы можно преодолеть, изменяя продолжительность инкубации, используя различные источники и разведения комплемента, разводя кроличью сыворотку сывороткой человека, или же путем абсорбции кроличьей сыворотки культивируемыми клетками [27]. Может потребоваться раздельный анализ каждой линии клеток, поскольку конечный результат зависит от множественных взаимодействий между присутствующими антителами и спектром антигенов на поверхности каждого типа клеток. [c.144]

Использование комплемента морской свинки удобно, но это животное не лучший источник комплемента. Наибольшее число зон лизиса может быть получено с применением свежей сыворотки крови Xenopus, причем оно не увеличивается при использовании кроличьей антисыворотки. Для головастиков характерно более низкое число зон лизиса, чем для взрослых Xenopus. [c.503]

В качестве источника комплемента используют нормальную сыворотку морской свинки, которую покупают у фирм Gib o нли Behringwerke или готовят самостоятельно, смешав сыворотки ие менее 50 животных. Каждую серию свежеприготовленной сыворотки хранят мелкими порциями при —20 С. Активность комплемента не снижается по крайней мере в течение месяца. В замороженном виде можно также хранить коммерческий комплемент, регидратированный из лиофилизата. Перед, самым употреблением замороженную сыворотку оттаивают и. разбавляют охлажденным СР, и если ее держать на льду, она будет пригодна в течение 12 ч, однако разбавленный комплемент нельзя повторно заморозить. Необходимо проверять активность соответствующего разведения каждой новой серии комплемента, проводя титрование по стандартной методике параллельно с предыдущей серией. Все испытанные нами серии комплемента самого разного происхождения оказались пригодными в конечном разведении от I 60 до 1 150 без какого-либо истощения. Избыток комплемента может вызывать частичный гемолиз монослоя эритроцитов, а при его недостатке зоны гемолиза получаются меньше и для их выявления нужна более длительная инкубация. Тем не меиее кривые титрования обычно получаются весьма пологими, что позволяе использовать комплемент в широких пределах конечных разведений (см. ниже). [c.216]

В качестве источника комплемента используют сыворотку кролика илн морской свинкн с низкой спонтанной литической активностью. [c.224]

Источник комплемента нормальная кроличья сыворотка, собранная приблизительно от 100 кроликов, хранится при —80 С мелкими порциями, или лиофилизированная, сохраняемая при —20°С. Лиофилизироваиный комплемент регидратируют непосредственно перед употреблением. [c.232]

Реакция иммунного прилипания стшится тоже в двух пробирках. В опытную проб1фку вносят 0,5 мл взвеси живых боррелий возвратного тифа, 0,1 мл сыворотки больного возвратным тифо , инактивированной при темперапуре 56 °С в течение 30 мин, и 0,2 мл свежей плазмы морской свинки, являющейся источником комплемента и тромбоцитов, в контрольную — те же боррелии, плазма морской свинки, но вместо иммунной — инактивированная нормальная сыворотка человека. Смеси ставят в термостат при температуре 37 С на 30—60 мин, затем делают раздавленные капли, которые исследуют в темном поле, определяя в них количество нагруженных (облепленных) тронбоцигами и свободных боррелий. [c.105]

Выбор сыворотки. Отбору сыворотки необходимо уделять особое внимание. Сыворотки из различных источников сильно варьируют по свойствам. Надо проверять также каждую партию сывороток. Наибольшей способностью поддерживать рост гибридных клеток обладает сыворотка плода коровы (СПК). Чаще всего используют неинактивнрованную сыворотку, хотя некоторые исследователи предпочитают инактивировать ее прогреванием при 56°С в течение 30 мин для уменьшения возможной токсичности компонентов комплемента. СПК является одним из самых дорогих компонентов среды культивирования, поэтому с ней необходимо обращаться весьма экономно. Для культивирования клеток сразу после слияния, а также для клонирования используют высокую концентрацию СПК (15—20%). Как только гибридомы отобраны, их можно постепенно переводить иа рост в 10% СПК. Если клетки хорошо адаптировались, то концентрацию СПК можно снизить до 5%. [c.98]

В последнее время роль рецепторов, распознающих данный белок в регуляции его биосинтеза, была подвергнута детальному анализу. В качестве модельной служила система биосинтеза покоящимися макрофагами lq-компонента комплемента. Опыты выполняли ш viiro в среде 199, не содержащей сыворотки крови, что позволяло исключить влияние не поддающихся точной оценке сывороточных факторов. Источником глицина служил С-глицин. [c.88]

Мер каптоэтанол (2-МЭ) может вызывать диссоциацию lgM-пентамеров, р результате. чего они утрачивают агглютинирующую способность. Поэтому добавление данного реагента приводит к Т о му, что в реакции агглютинации участвуют лишь IgG, что позволяет сравнивать титры. IgM и IgG. Антитела, связывающие комплемент (источником которого служит свежая сыворотка), в его присутствии вызывают лизис эритроцитов-мишеней. У большинства видов животных лишь некоторые подклассы IgG способны связывать комплемент в то же время IgM обладают более высокой комплемент-свя- Зывающей активностью. Поэтому антисыворотки с высоким Содержанием IgM имеют более высокий гемолитический титр, чем сыворот. ки, в составе которых преобладают JgG. Гемолитические тесты, в делом, более. чувствительны, чем агглютинационные— раз умеется, лишь в том случае, если участвующие в реакции антитела связывают комплемент. Поскольку 2-МЭ обладает способностью ингибировать связывание комплемента IgM, он заметно снижает гемолитический титр антисывороток с высо ким содержанием антител этого класса. В результа те можно. определить концентрацию IgM в сыворотке (ом. рис. 7.2). [c.241]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология