Электрофоретическая кювета

Одним из самых важных применений электрофореза является использование его в анализе естественных смесей коллоидов, например белков, полисахаридов и нуклеиновых кислот, а также продуктов, полученных фракционной перегонкой. При электрофорезе между раствором белка и буфером в специальной У-образной трубке, снабженной электродами, образуется резкая граница, за движением которой можно проследить с помощью оптической шлирен-системы (разд. 11.10). Эти опыты обычно проводят при температуре 4° С, т. е. при максимальной плотности воды, так что температурный градиент в электрофоретической кювете, вызванный нагреванием током, сопровождается наименьшим градиентом плотности. Градиенты плотности горизонтально поперек кюветы стремятся вызвать конвекцию. На рис. 20.1 [1] показана электрофоретическая картина плазмы крови человека в буферном растворе (pH 8,6) диэтилбарбитурата натрия с ионной силой 0,10 (после 150 мин при 6,0 В/см и 1°С). Строится график зависимости градиента показателя преломления от расстояния в кювете (горизонтальная ось). Одна картина получена для той части кюветы, в которой белки опускаются вниз, а другая — для той части, где белки поднимаются вверх. Начальные положения границ указаны на рисунке тупыми концами стрелок. Различные виды белков представлены альбумином, аг, аг-, р-, у-глобу-линами и фибриногеном ф. Площадь под определенным пиком почти точно пропорциональна концентрации белка, дающего эту границу. Так, например, процент альбумина может быть получен делением площади пика альбумина на суммарную площадь всех пиков белков. е-Граница в спускающейся части и б-граница в поднимающейся части картины обусловлены не белковыми компонентами, а изменениями концентрации соли, которые возникают в опытах с обычным переносом вблизи начального положения границы. [c.603]

Хотя метод электрофореза известен уже со второй половины XIX в., точные измерения на чистых белках стали проводить лишь после создания Тизелиусом усовершенствованного аппарата для электро ретического анализа методом подвижной границы. В этом приборе электрофоретическая кювета помещалась в низкотемпературный термостат, благодаря чему для разделения белков можно было использовать высокие градиенты потенциала, избежав тепловой конвекции. Сама кювета имела прямоугольное сечение, оптические поверхности и смещающиеся относительно друг друга части. Это позволило получать четкие границы раздела между белковым и буферным растворами и наблюдать изменения показателя преломления в зоне подвижных границ с помощью теневой оптической системы, использующей принцип Фуко—Теплера. [c.164]

На рис. 140 схематически показана граница (полоса) чистого белка, а также границы (полосы), полученные в результате разделения компонентов белковой смеси в электрофоретической кювете. В левой кювете видна един- [c.353]

Если внести в электрофоретическую кювету раствор, содержащий различные белки, и приложить электрическое напряжение, то скорость движения каждого белка будет зависеть от плотности заряда, которая определяется как суммарный заряд частицы на единицу площади поверхности. В идеальном случае каждый индивидуальный белок будет двигаться со скоростью, отличной от скорости движения остальных белков. Поэтому при достаточных размерах кюветы и за достаточно большое время смесь белков разделится на индивидуальные компоненты. Секции кюветы можно отделить друг от друга так, чтобы в каждую попал индивидуальный белок. Таким образом, электрофоретическая техника может быть использована для получения чистых белков. [c.354]

Прибор для электрофореза должен быть сконструирован так, чтобы разделенные вещества снова не смешивались и чтобы его можно было использовать для разделения в препаративном масштабе. Такие конструкции показаны на рис. 469, 470 и 471. В первом случае (рис. 469) прибор снабжен поперечными перегородками. Этот тип прибора выгоден в тех случаях, когда имеющиеся разделяемые вещества сильно отличаются по своим электрофоретическим свойствам (например, при разделении веществ противоположного знака). Во втором приборе (рис. 470) отделение чистого вещества осуществляют в коленах электрофоретической кюветы, причем плотность отдельных зон повышается в направлении ко дну кюветы. В данном случае в чистом виде можно получить только две части смеси — наиболее кислую и наиболее основную. Совсем иначе обстоит дело, когда прибор, изображенный на рис. 471, предназначен для разделения веществ в инертной пороШ- [c.530]

Прежде чем перейти к изложению некоторых принципов электрофореза белков в жидкой среде, необходимо вкратце остановиться на конструкции электрофоретической кюветы, а также на регистрации изменения показателя преломления с помощью теневой оптической системы. [c.165]

Электрофоретические кюветы типа влажной. камеры можно разделить на две группы. В кюветах первой группы бумажные полоски свободно висят поверх опорной планки [1424] (рис. 10). Несколько вариантов таких устройств производится промышленностью. В другой группе кювет полоски или широкие листы бумаги натягиваются горизонтально между электродными камерами ([468] (рис. И). [c.38]

Электрофорез. Для наблюдения электрофоретической миграции заряженных макромолекул также необходимо перед наведением электрического поля создать острую границу между раствором исследуемого вещества и соответствующим буферным раствором. По аналогии с диффузионными устройствами здесь тоже создается подслаиванием граница с последующим ее обострением. На рис. 143 изображена электрофоретическая кювета из огранического стекла конструкции С. Е. Брес-лера и П. А. Финогенова [40]. Корпус кюветы состоит из и-образной рамки с плоскопараллельными торцевыми пластинками 7, через которые проходит световой пучок. Выводные трубки 6 посредством резиновых сочленений соединяют кювету с электродными сосудам11. Вначале кювета заполняется буфером, а затем через вводной капилляр / подается раствор белка. При этом обычно, в зависимости от направления миграции, открывается пара выводных капилляров 2, 5 или 3, 4. Таким образом, границы создаются в обоих коленцах кюветы и обостряются так же, как в диффузионной кювете Финогенова. При направлении миграции, указанном стрелками, границы создаются в положениях 2 (восходящая граница) и 5 (нисходящая граница). При этохм обе они проходят за время опыта максимальные ПУТИ. С помощью сменных диафрагм производится пооче- [c.294]

Рис. 143, Электрофоретическая кювета С. Е. Бреслера и П, А. Финогенова

По аналогии с диффузионными устройствами граница здесь тоже создается подслаиванием с последующим ее обострением. На рис. XIV, 22 изображена электрофоретическая кювета из органического стекла конструкции Бреслера и Финогенова [68]. Корпус кюветы состоит из и-образной рамки с плоскопараллельными торцевыми пластинками 7, через которые проходит световой пучок. Выводные трубки 6 посредством резиновых сочленений соединяют кювету с электродными сосудами. Вначале кювета заполняется буферным раствором, а затем через вводный капилляр 1 подается раствор белка. При этом обычно (в зависимости от направления миграции) [c.314]

Электрофоретические кюветы, используемые для электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы, аналогичны горизонтальным влажным камерам, применяемым для электрофореза на бумаге. Кон [694, 695] сконструировал кювету, вся площадь которой разделена на отсеки для буфера. Это сделано для того, чтобы воопрепятство вать чрезмерному испарению воды с поверхности пленки путем создания сплошной поверхности жидкости, обеспечивающей более эффективиое насыщение парами всего объема прибора. Полоски или листы ацетата целлюлозы поддерживаются в нужном положении соответствующим мо-сти ком, позволяющим варьировать длину пленки. Мостик, предложеиный Коном, показан на рис. 13. Электроды делают из платиновой проволоки, проходящей вдоль всей ширины кюветы, снабженной герметически закрывающейся крышкой. [c.41]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология