Секвенатор твердофазный

Другой вариант автоматического определения аминокислотной последовательности коротких пептидов, основанный на ковалентном присоединении их к нерастворимому носителю, предложен Р. Ларсеном. Реакционным сосудом в твердофазном секвенаторе служит хроматографическая колонка, с носителем которой ковалентно связан исследуемый пептид. Через колонку последовательно пропускаются необходимые реагенты и растворители. Присоединение пептида к носителю является определяющей стадией в процессе. Для этой цели широко применяются матрицы на основе [c.63]

Твердофазный секвенатор позволяет получать наилучшие результаты при анализе пептидов, содержащих от 5 до 40 аминокислотных остатков. Иногда он применяется и для изучения структуры более крупных пептидов и белков, особенно гидрофобных, легко вымываемых из реакторов жидкофазного прибора. С помощью этого метода удается определять последовательность 20 — 25 аминокислотных остатков. [c.66]

В ходе анализа становятся очень гидрофобными. Для реализации очевидных преимуществ автоматического метода были разработаны различные варианты секвенаторов жидкофазного (ЖФ) [15, 64], твердофазного (ТФ) [27, 35], газофазного (ГФ) [22] (см. в гл. 17 обсуждение последних достижений газофазного метода). В этой главе рассмотрен только ТФ-метод. [c.375]

ОТЩЕПЛЕНИЕ НА ТВЕРДОФАЗНОМ СЕКВЕНАТОРЕ 393 [c.393]

Отщепление на твердофазном секвенаторе [c.393]

ОТЩЕПЛЕНИЕ НА ТВЕРДОФАЗНОМ СЕКВЕНАТОР 395 [c.395]

Твердофазный стандартный секвенатор (модель 4020) модифицирован для работы на микроуровне [52]. Программа работы прибора показана на рис. 12.5. Модификация включала следующие изменения конструкции прибора [c.396]

ОТЩЕПЛЕНИЕ НА ТВЕРДОФАЗНОМ СЕКВЕНАТОРЕ 397 [c.397]

РИС, 12.6. Схема модифицированного секвенатора для твердофазного анализа фирмы LKB (модель 4020), имеющего продувку колонки азотом и автоматический конвертор [52]. [c.398]

ФИТЦ препаратом, дающим окрашенные производные отщепляемых, аминокислот [Wilson et al., 1979]. Здесь нет возможности останавливаться на этих и других интересных усовершенствованиях процесса секвенирования белков, поскольку это выведет нас за пределы круга вопросов, рассматриваемых в книге. Нам также придется вовсе оставить в стороне вариант секвенирования в твердой фазе (с закреплением полипептида с одного его конца на твердом носителе), а также интересное предложение о создании газо-жидкостного твердофазного секвенатора с миниатюрной неподвижной камерой, в которой полипептид задерживается на стекловолокнистом фильтре fHewi k et al., 1981]. [c.514]

Для анализа коротких I пептидов более эффективен подход, заключающийся в их ковалентном присоединении к нерастворимому носителю. Этот принцип положен в основу твердофазного секвенатора, где реакц. сосудом служит хроматографич. колонка, с носителем к-рой ковалентно связан исследуемый пептид. Через колонку последовательно пропускают реагенты и р-рители. Носителями чаще всего служат полистирол и пористое стекло. В кач-ве функц. группы, реагирующей с пептидом, обычно использует- [c.252]

Первый твердофазный секвенатор предложен в 1970— 1971 гг. Лоурсеном [117, 118]. Он значительно дешевле, чем секвенатор Эдмана, и подходит для работы с [c.371]

Ручная конверсия, В твердофазных секвенаторах отщепленные тиазолиноны аминокислот элюируются в пробирки коллектора фракций в растворе, содержащем 1,5 мл ТФУ и 3 мл метанола. Прн ручном превращении АТЗ хранят в этой смеси в течение ночи при комнатной температуре. Однако АТЗ чувствительны к кислороду, поэтому происходит частичное разрушение производных некоторых аминокислот (например, Ser, Thr, Arg, His). Кроме того, если после обработки ТФУ колонка промывается метанолом, то Asp и Glu частично превращаются в соответствующие метиловые эфиры. Для предотвращения этого рекомендуется после проведения реакции колонку промывать сначала 1,2-дихлороэтаном или ДМФА. Для увеличения выхода ФТГ-производных Ser и Thr раствор АТЗ разбавляют водой, как указано ниже. [c.397]

С появлением ВЭЖХ и высокочувствительных проточных детекторов стал возможным анализ на микроуровне с идентификацией пикомольных количеств вещества. Чувствительность микроанализа ограничивается чистотой производных, их стабильностью в ходе и после отщепления, наличием примесей. Обязательное условие — высокая чистота растворителей для устранения возможности загрязнения секвенатор, во-первых, должен иметь минимальные мертвые объемы и некорродирующие клапаны и соединения, во-вторых, необходимо постоянно поддерживать на высоком уровне технические параметры прибора. Лимитирующими факторами в жидкофазном анализе является качество полибрепа, в твердофазном — качество носителей. Дополнительно осложняет анализ существенное различие выходов отдельных производных. Некоторые тиогидантоины отщепляются с высокими выходами и устойчивы, другие присутствуют в малых количествах, так как они либо плохо отщепляются, либо разрушаются после отщепления в любом случае их трудно обнаружить на фоне побочных продуктов. Следует тщательно контролировать техническое состояние прибора для того, чтобы быть уверенным в результатах тех анализов, где [c.401]

Для устранения потерь с промывками образца был предложен твердофазный (ТФ) метод анализа [И] Благодаря ковалентному присоединению изучаемого полипептида к химически модифицированной матрице носителя (па основе стекла или полистирола) исключены потери образца при промывке его органическими растворителями в процессе отщепления аминокислот. Простота конструкции колонки-реактора ТФ-секвепа-тора облегчает ее миниатюризацию, что позволяет повысить чувствительность определения последовательности. В то же время ковалентное присоединение пептидов и белков к носителю в гетерогенной системе пе так просто осуществить, а выходы на этой стадии составляют лишь 20—50%. Реакции связывания белка (пептида) с матрицей носителя проводятся вне секвенатора, они весьма трудоемки и требуют длительного времени. Необходимо отметить, что планирование эксперимен- [c.464]

Фенилизотиоцианатный метод Эдмана (1950) реализуется в специально созданном для этой цели приборе, получившем название секвенатор (от англ. sequen e—последовательность). Принципиальная схема устройства твердофазного секвенатора и принцип его работы показаны на рис. 24. В современных моделях секвенатора удается определить чередование аминокислотных остатков не только в коротких пептидах, но и непосредственно в полипептидных цепях белка, проходя до 70 аминокислотных звеньев в его молекуле. [c.56]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология