Агароза производные

Открытый характер структуры в гелях (рис. 2-18), образуемых производными агарозы, делает крупнозернистые порошки этих гелей удобной твердой основой для приготовления адсорбентов. Гидроксильные группы агарозы часто модифицируют присоединением к ним аминов. Вначале агарозу обрабатывают бромцианом (Вг—С = Ы) в щелочной среде, активируя тем самым углеводную цепь (химическая сторона этого вопроса обсуждается в работе [118]), а затем добавляют амины. Полная реакция описывается следующим уравнением [c.161]

Получение аффинных сорбентов. В ряде случаев необходимо или удобно получать аффинные сорбенты для конкретной цели. Это можно сделать с помощью реакции между выбранным лигандом и либо активированным производным агарозы или другого твердого носителя, либо модифицированной агарозой, несущей спейсер, оканчивающийся реакционноспособной группой. В разд. Материалы для получения аффинных сорбентов перечислены коммерчески доступные активированные агарозы с присоединенными спейсерами. Используя их в качестве исходного материала, можно легко получить аффинный сорбент в мягких условиях прямыми методами. [c.445]

Помимо очистки ряда ферментов, их ингибиторов или субстратов, которые можно попеременно фиксировать на матрице, аффинная хроматография позволяет выделять антитела и антигены, белки, осуществляющие транспорт гормонов и связывание витаминов. К аффинной хроматографии близко примыкает метод выделения ЗН-содержащих белков на ртутьорганических производных агарозы. Явление фиксации антител на производных агарозы открывает широкие возможности. В отличие от [c.453]

Агароза с длинноцепочечным гидразидным производным Сефароза 4В [c.287]

Са +) активный белок лишь частично сорбировался. Неполная сорбция наблюдалась также на сорбенте с присоединенным ADP в присутствии Са +. Следовательно, Mg + и Са + значительно повышают сродство миозина и его производных к АТР—агарозе. [c.375]

МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ АГАРОЗЫ [c.18]

АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ НА ПРОИЗВОДНЫХ АГАРОЗЫ [c.33]

Примеры применения аффинной хроматографии на агарозе и ее производных [c.36]

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ПРИМЕРЫ ПРИМЕНЕНИЯ АГАРОЗЫ И ЕЕ ПРОИЗВОДНЫХ [c.38]

Количество исследований, в которых в качестве нерастворимого носителя применяется агароза и ее производные с привитыми аффинными лигандами, увеличивается по мере развития аффинной хроматографии, и полный обзор таких работ в рамках одной главы практически невозможен. Так, в 1968 г. были опубликованы всего две работы, описывающие использование агарозы в качестве носителя в аффинной хроматографии, в 1969 г. таких работ было уже примерно 10, а в 1970 г. — около 20, а в 1971 г. — более 40, в 1972 г. — более 70, а в последующие годы это число было вновь превышено. В табл. 7.3 приведены некоторые примеры использования агарозы в аффинной хроматографии, показывающие возможности этого метода. [c.38]

Другое обстоятельство, еще более фундаментального характера, позволяет поставить под сомнение целесообразность особо точного определения полисахаридных структур. Вспомним то, что говорилось о микрогетерогенности полисахаридных цепей. Благодаря этому явлению в образце полисахарида, подвергающемуся структурному анализу, обычно содержится множество близко родственных структур. Поэтому локализация отдельных моносахаридных звеньев в цепях может быть достигнута с точностью, по крайней мере не большей, чем вариации структур молеку.11 внутри образца, связанные с микрогетерогенностью. Принципиально можно, конечно, свести к минимуму структурные вариации такого типа, например, при помощи тех или иных химических или ферментативных обработок (вспомним, как был превращен нерегулярный полисахарид порфиран в производное регулярного полисахарида агарозы) и путем особо прецизионного фракционирования. Для таких полисахаридов со сведенным к минимуму разбросом структурных параметров можно, по крайней мере в принципе, установить строение гораздо более точно. [c.109]

Из полисахаридов для иммобилизации наиболее часто используют целлюлозу, декстран, агарозу и их производные. Для придания химической устойчивости линейные цепи целлюлозы и дек-страна поперечно сшивают эпихлоргидрином. В полученные сетчатые структуры довольно легко вводят различные ионогенные группировки. Химической модификацией крахмала сшивающими агентами (формальдегид, глиоксаль, глутаровый альдегид) синтезирован новый носитель — губчатый крахмал, обладаюпщй повышенной устойчивостью к гликозидазам. [c.86]

В качестве последнего примера белков, связывающих малые молекулы, уместно рассмотреть лектины. Эти белки, чаще всего встречающиеся в растениях (но не только в них), связывают производные углеводов со значительной степенью стереоспецифичности. Впервые лектины привлекли внимание исследователей своей способностью агглютинировать эритроциты посредством связывания гликопротеинов мембран. Некоторые лектины специфичны к индивидуальным групповым веществам крови. Интерес к ним увеличился после того, как было обнаружено, что некоторые из лек-тинов агглютинируют преимущественно злокачественные клетки. Посредством иммобилизации на нерастворимом носителе типа агарозы лектины могут быть использованы для очистки гликопротеинов методом афинной хроматографии. Наиболее изученным лек-тином является конкавалин А для этого белка определены аминокислотная последовательность из 238 остатков и трехмерная структура. Конформация конкавалина А весьма примечательна. Семь участков его единственной полипептидной цепи формируют антипараллельную складчатую структуру, а шесть последующих участков образуют другую антипараллельную структуру, перпендикулярную первой. Ион Mn + координирован с двумя молекулами воды и боковыми радикалами Н18-24, 01и-8, Азр-Ш и Азр-14, образуя октаэдр. Ион Са +, расположенный на расстоянии 0,5 нм от Мп +, делит с ним два последних лиганда, а также связан с карбонильным кислородом Туг-12, боковым радикалом Айп-14 и двумя молекулами воды и также образует октаэдрическую конфигурацию. Остатки глюкозы и маннозы связываются в глубоком кармане размером 0,6 X 0,75 X 1,8 нм, образованным, как это ни удивительно, гидрофобными остатками. [c.562]

Сшитые полисахариды широко применяются в промышленности. Наибольший интерес представляют сшитые целлюлозы, крахмалы, декстраны (сефадекс) и агарозы (сефароза), используемые как хроматографические носители наиболее распространенными сшивающими агентами являются эпихлоргидрин и формальдегид. Сшивкой разных полисахаридов получают водонерастворимые субстраты для очистки и определения ферментов. Так, обработкой гликозаминогликанов циклическими имидокарбонатными производными агарозы [248] получен субстрат для определения гликоз-аминогликаназ. [c.275]

Принцип хроматогра( )ии сродства использован для ввделения тубулина 271,277,288 Смолу сродства готовили, например, исходя из сефарозы, активированной бромцианом, и деацетилколхицина, де-ацетилизоколхицина или их смеси. Другой путь присоединения этих производных колхицина к агарозе - через боковую цепь гексановой кислоты (СН-сефароза). Из готовой смолы сродства облучением получали люми-смолу сродства. Смолы сродства с колхициновыми группами задерживали тубулин. Тубулин, насыщенный колхицином, тоже по- [c.71]

Для селективного выделения пептидов можно использовать иммуносорбенты, представляющие собой антитела ковалентно присоединенные к нерастворимому полимеру-иосителю. Среди последних нашли распространение носители на основе производных бром-ацетилцеллюлозы и гелей агарозы с ковалентно присоединенными антителами к 2,4-динитрофенолу, Такие носители применяются для выделения функционально важных пептидных фрагментов, содержащих реакционноспособные аминокислотные остатки после их селективного динитрофенилирования. Разработаны методики присоединения 2,4-дннитрофенильной группы к остаткам цистеина, метионина лизина и триптофана. [c.56]

Ряд алкилагароз со структурой СНз(СН2)пМН—сефароза (где п принимает значения от О до 7), и-аминоалкилагароз со структурой ЫН2(СН2)п ЫН—сефароза (где п — от 2 до 8) характеризуется близким содержанием алкильных боковых цепей на гранулу геля [15, 49]. В одинаковых условиях (pH, ионная сила, состав буферного раствора и температура) способность СНз(СН2)пЫН—сефарозы удерживать фосфорилазу Ь зависит от длины углеводородных цепей. При хроматографии на производных сефарозы (я = 0 или 1) фосфорилаза Ь выходила из колонки с фронтом растворителя при п = 2 происходила задержка фермента, а при п = 3 фермент адсорбировался. Элюирование фосфорилазы Ь с модифицированной сефарозы (п = 3) возможно с помощью деформирующих буферных растворов, которые, как было показано, приводят к обратимым структурным изменениям фермента. На производном сефарозы с л = 5 связывание фосфорилазы было настолько сильным, что фермент не элюировался с колонки, даже когда pH деформирующего буферного раствора понижался до 5,8, хотя деформирующая способность такого буфера намного выше. Освободить фосфорилазу Ь из комплекса с этим производным можно только в неактивной форме после промывки колонки 0,2 М уксусной кислотой. Сама агароза содержит отрицательные заряды, а связывание алкил- или ариламинов на активированной бромцианом агарозе вводит в гель положительные заряды (разд. 8.2.4). В связи с этим йост и др. [28] обращали внимание на то, что на сефарозе с алкиламинами, прикрепленными после предварительной активации носителя бромцианом, связывание белков происходит большей частью при pH выше изоэлектрической точки выделяемых белков. Поэтому допускалось, что в этих случаях электростатические взаимодействия с положительно заряженной Ы-замещенной изомочевиной более существенны для связывания, чем гидрофобные взаимодействия с гидрофобной боковой цепью. Тем не менее гранулы агарозы не связывают фосфорилазу Ь, пока к ним не будут прикреплены алкильные боковые цепи некоторой минимальной длины. Кроме того, отмеченные выше заряды в равной мере присутствуют во всех членах гомологического ряда, и, следовательно, они не могут быть причиной различий в степени [c.152]

Порат и сотр. [39] приготовили хелатообразующие сорбенты для белков и пептидов из производных агарозы. Поскольку перечисленные ионы металло1В относятся к переходным элементам, их аффинность зависит от pH. При pH 6—8 сорбция белков избирательна для гистидина и, возможно, также для цистеина. При щелочных pH имеет место координационное связывание аминокислот, что приводит к более эффективной, но в то же время менее избирательной сорбции. [c.170]

Присоединение аффинных лигандов к декстрановым гелям может быть осуществлено с помощью ряда методов, описанных для целлюлозы, а также агарозы (см. ниже), а именно связывание после активации бромцианом, триазиновый метод, связывание с использованием эпоксидов или бифункциональных производных или связывание через ацилазидные промежуточные соединения. [c.183]

Производные агарозы тщательно промывают и высущивают ацетоном на стеклянном фильтре. 100 г высушенного с отсасыванием геля переносят в колбу на 50 мл и добавляют 20 мл 85%-ной муравьиной кислоты смесь нагревают с обратным холодильником 1 ч на водяной бане. Если за это время полисахаридный носитель не растворяется, время гидролиза увеличивают. После гидролиза смесь упаривают досуха, добавляют 2 мл НгО и вновь упаривают. Добавление и упаривание повторяют, остаток растворяют в 1 мл гексадейтеродиметилсуль-фоксида и используют для ЯМР-спектроскопии. [c.246]

Из перечня носителей, приведенного в разд. 7.3, следует, что наиболее часто используются для аффинной хроматографии агароза и ее производные. Хорошо известны промышленные препараты сефароза и биогель А. Сефароза — прО(Мышленное название сферического геля агарозы, выпускаемого фирмой Pharma ia Fine hemi als АВ (Швеция). Сефароза продается в набухшем состоянии, суспендированная в дистиллированной воде, содержащей 0,02% азида натрия в качестве бактериостатического агента. [c.13]

Перечень нерастворимых ферментов, выпускаемых фирмой MiLes Laboratories Ltd., приведен в табл. 7.2. К СМ- и DEAE-целлюлозе ферменты присоединяют азидным методом [65], с помощью триазиновых производных [50], или по методу Баркера [5] путем диазотирования 2-окси-З-(л-аминофенокси) пропи-лового эфира целлюлозы. Иммобилизованные на целлюлозе ферменты содержат относительно мало белка. Ферменты с высоким содержанием белка получают путем связывания белков с сополимером этилена и малеинового ангидрида [54]. Ферменты, присоединенные к агарозе триазиновым методом, характеризуются высокой ферментативной активностью главным образом по отношению к макромолекулярным субстратам [50]. Препараты рекомендуется хранить в среде с pH не ниже 5,0. [c.33]

Совсем недавно в продаже появились ионообменные производные агарозы, сшитые 2,3-дибромпропанолом и десульфиро-ванные щелочным гидролизом в восстановительных условиях (см. табл. 5.6 и гл. 6, разд. 6.2.5). У СМ- и ВЕАЕ-производных агарозы выше, чем у ионообменных декстранов, предел исключения (мол. масса около 10 ) и больше устойчивость. [c.235]

Выбор ионита можно ускорить, если воспользоваться таблицами, в которых приведены характеристики ионитов различных типов, имеющихся в продаже (табл. 5.4—5.7). Более подробные таблицы приведены в работах [5, 25, 118, 123, 139]. Для разделения неорганических соединений пригодны ионообменные смолы (табл. 5.4) или неорганические иониты (табл. 5.7). Для хроматографирования низкомолекулярных ионогенных органических соединений (аминов и других оснований, кислот, аминокислот, пептидов, нуклеозидов, нуклеотидов) следует пользоваться ионообменными смолами. Однако они непригодны для анализа белков. Биополимеры (белки, нуклеиновые кислоты и их высокомолекулярные фрагменты) можно успешно разделять на ионообменных производных целлюлозы (табл. 5.5), полидекстрана и агарозы (табл. 5.6). Для высокоэффективной жидкостной хроматографии биополимеров предназначены биополимерные ионообменные производные макропористого стекла (табл. 5.6А) и гидрофильные макропористые оксиалкилмет-акрилатные полимеры (табл. 5.6Б). [c.251]

Ионообменные производные полидекстрана и агарозы, имеющиеся а продаже [c.260]

Смотреть страницы где упоминается термин Агароза производные: [c.180] [c.419] [c.221] [c.24] [c.538] [c.156] [c.184] [c.186] [c.189] [c.196] [c.197] [c.198] [c.198] [c.215] [c.374] [c.376] [c.11] [c.18] [c.19] [c.31] [c.235] [c.261]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология