Носители полисахаридные

Она широко используется как носитель для иммобилизации. Однако стоимость агарозы довольна высока, поэтому разрабатываются различные методы ее модификации с целью получения легко регенерируемых форм. При охлаждении горячего 2—6%-ного водного раствора агарозы до температуры ниже 45°С образуются прочные крупнопористые гели, представляющие собой сложную смесь из заряженных и нейтральных полисахаридов. В процессе образования геля индивидуальные полисахаридные цепи образуют двойные спирали, которые далее агрегируют с образованием узлов . При температуре около 100°С гель агарозы плавится, поэтому в отличие от сефадексов его нельзя автоклавировать. Высушивание агарозы приводит к необратимой деструкции геля, поэтому его необходимо хранить в виде водной суспензии. [c.14]

Использование магнитных дисперсий. В основе данного направления лежит использование способности мелкодисперсных материалов перемещаться и локализоваться в заданной области организма под действием внешнего магнитного поля. Возможность бесконтактного перемещения потока магнитных микрочастиц внутри организма послужила основой для разработки способов лечения различных заболеваний, в том числе воспалительных. В качестве магнитоуправляемых носителей используют микросферы размером 0,1 — 10 мкм, в белков или полисахаридной матрице которых содержатся, помимо лекарства, мелкодисперсные зерна магнита или железа размером 0,01 мкм. Магнитными носителями могут служить также липосомы и другие искусственные клетки, к которым присоединен ферромагнитный компонент. [c.651]

В обычной аффинной хроматографии для иммобилизации субстратов в качестве носителей используются агароза и сшитая сефароза. В качестве сшивающего агента обычно выступает ВгСМ, а мостик образован а,о)-диамином. Эти полисахаридные носители подвержены биодеградации, и, следовательно, органические полимерные гели более удобны в качестве матрицы и допускают более широкий набор химических модификаций. Именно эти причины побудили Уайт-сайдса и сотр. разработать новый метод иммобилизации ферментов в сшитых органических полимерных гелях [126]. По своей простоте и универсальности этот метод превосходит ранее предложенные. Особенно ценен он при иммобилизации относительно лабильных ферментов для использования в ферментерах большого размера при проведении реакций органического синтеза, катализируемых ферментами. [c.257]

Нерастворимые в воде ферменты получают путем их присоединения к нерастворимым полисахаридным носителям [65, 227, 249]. Применение нерастворимых ферментов упрощает проведение ферментативных реакций, так как такие ферменты могут быть легко удалены из реакционной смеси фильтрацией или центрифугированием, тогда как удаление растворенных ферментов — очень трудоемкая процедура. [c.275]

Ковалентное присоединение белков к полисахаридным носителям, в том числе к агарозе, с помощью бензохинона [5] [c.198]

На каждом этапе колоночной хроматографии содержание белка в смеси увеличивается не более, чем в 20 раз. и поэтому выделить из сложной смеси белков отдельный белок за один цикл практически невозможно. На долю каждого белка, как правило, приходится менее 1/1000 всего белка клетки, и для его очистки требуется последовательное использование нескольких различных типов колонок (рис. 4-47). Гораздо более эффективен метод аффинной хроматографии (хроматография но сродству). В основе этого метода лежат биологически важные взаимодействия, происходящие на поверхности белковых молекул. Так, при ковалентном связывании субстрата фермента с матриксом, например, с полисахаридными шариками, фермент специфически удерживается матриксом и может быть элюирован (смыт) практически в чистом виде. Подобным образом можно иммобилизировать короткие олигонуклеотиды ДНК определенной структуры (см. разд. 4.6.8) и использовать подобные носители для очистки ДНК-связывающих белков, опознающих данную последовательность нуклеотидов на хромосомах (см. разд. 9.1.8). С матриксом можно связать и специфические антитела такой носитель очень удобен для очистки белков, узнаваемых этими антителами. Аффинные колонки обладают высокой степенью специфичности за один цикл хроматографии можно добиться очень высокой степени очистки (1000-10000 раз). [c.213]

Для повышения эффективности сорбции может быть также использована модификация носителя гидрофобными соединениями. Связывание фермента с такими носителями обеспечивается за счет гидрофобных взаимодействий между модификатором и неполярными участками на поверхности белковой глобулы. При этом способе иммобилизации применяются те же носители, которые используются при гидрофобной хроматографии белков. В первую очередь к ним относятся различные агарозы, ковалентно модифицированные гидрофобными группами (алкильными, фенильными и т. п.). На конце такой гидрофобной ножки может присутствовать также и заряженная группа, благодаря чему обеспечивается взаимодействие с ферментом одновременно за счет электростатических и гидрофобных сил (рис. 4, в). При таком многоточечном связывании сорбция многих ферментов протекает практически необратимо. Эффект многоточечного связывания достигается также при использовании полисахаридных носителей, модифицированных танином — природным дубящим веществом, содержащим большое число фенольных групп. Танин может быть ли о адсорбирован на носителе, либо связан с ним химически. Удерживание фермента на [c.53]

Во-вторых, причиной искажения структуры фермента могут быть неспецифические взаимодействия (электростатические, гидрофобные, водородные связи) между ферментом и носителем приводящие к денатурации. Чтобы избежать этих взаимодействий, иногда достаточно заменить носитель на инертный по отношению к белку. Такой инертностью обычно обладают полисахаридные носители, полиакриламид и некоторые другие. Если замена носителя по какой-либо причине нежелательна, то используют следующий методический прием отдаляют белковые молекулы от поверхности носителя за счет увеличения длины ножки (сшивающего агента). При этом, как правило, удается ослабить неблагоприятное для фермента воздействие носителя. [c.99]

Для разделения используют легколетучие буферные системы, в частности разбавленные растворы аммиака, уксусную и муравьиную кислоты, что позволяет выделять белки из элюатов с помощью лиофильного высушивания. Препараты для аминокислотного анализа рекомендуется получать гель-фильтрацией в 50—75%-ной муравьиной кислоте. Муравьиная кислота, сильный денатурирующий и солюбилизирующий агент, вызывает разрушение носителей на основе полисахаридной матрицы в частности, не рекомендуется оставлять сефадексы в контакте с 75%-ной муравьиной кислотой на срок более трех недель. [c.37]

Скорость потока в этом приборе приблизительно I мл/мин. Если используется полисахаридный носитель, то часто происходит уплотнение сорбента в колонке, что приводит к неустойчивой скорости потока. Считается, что полисахаридные носители не отвечают требованиям колоночного процесса по двум основным причинам 1) при клинических анализах в автоматическом режиме (>50 анализов/ч) обычно требуются высокие скорости потока, при которых происходит уплотнение полисахаридных шариков, и 2) при разрушении полисахаридных шариков они могут образовывать комки, что также ограничивает применяемые скорости потока и уменьшает срок эксплуатации детектора [28]. [c.37]

Исходные активности иммобилизованной на оксиде алюминия уреазы сопоставимы с активностями, достигаемыми при применении полисахаридных носителей, а стабильность полученных неорганических продуктов и измеряемые скорости потока оказались очень хорошими. В результате легко достигается быстрый анализ образцов. [c.39]

Иммобилизация антител на сефадексе, сефарозе, целлюлозе. Широко используемые в биохимических лабораториях носители сефадекс С-200, сефароза 4В, карбоксиметилцеллюлоза могут успешно использоваться для иммобилизации антител. Чаще всего полисахаридные носители активируют бромцианом. Схема реакции [c.205]

Нередко для целей иммобилизации используют хитин, представляющий собой целлюлозу, в которой HjOH-rpynna заменена ацетамидным остатком. Из других носителей полисахаридной природы можно отметить декстран (поли-1,6-а-о-глюкопиранозил-о-глюкопираноза), представляющий собой разветвленный полисахарид микробного происхождения. Гели на основе декстрана, сшитые эпихлоргидрином, выпускаются под названием сефадексы и имеют самостоятельное значение в качестве носителей для вьщеления и очистки различных веществ. [c.85]

Для получения специфических сорбентов используют носители полисахаридной природы агарозу, сефарозу, различные сефадексы, а также полиакриламидные гели и пористые стеклянные поверхности. Чаще всего прилГе-няют сефарозу благодаря ее пористой структуре, обеспечивающей хороший ток жидкости и проходимость для макромолекул, и почти полному отсутствию еспецифи-ческой сорбции. Химические группы сефарозы, будучи активированы бромцианом, могут связывать в мягких условиях различные лиганды, содержащие аминогруппы (схема V). Активированная сефароза стабильна по отношению к изменениям pH, температуры, ионной силы растворов, а также к действию денатурирующих агентов— мочевины и гуаяидинхлорида. [c.216]

Органические полимерные носители. Иммобилизация многих ферментов осуществляется на полимерных носителях органической природы. Существующее органические полимерные носители можно разделить на два класса природные и синтетические полимерные носители. В свою очередь, каждый из классов органических полимерных носителей подразделяется на гругшы в зависимости от их строения. Среди природных полимеров выделяют белковые, полисахаридные и липидные носители, а среди синтетических — полиметиленовые, полиамидные и полиэфирные. [c.86]

Иммобилизация ферментов на носителях, обладающих гидроксо-группами. Наиболее расхфостраненным методом образования ковалентной связи между ферментом и полисахаридным носителем или синтетическим диольным соединением является бромциано-вый метод, который был предложен Р.Аксеном, Дж.Поратом и С.Эрнбаком в 1967 г. При обработке носителя бромцианом возникают реакционноспособные цианаты и имидокарбонаты, которые при взаимодействии с нуклеофильными аминогруппами фермента образуют производные изомочевины и уретанов [c.91]

Антитела, иммобилизованные на полисахаридных носителях, используют для очистки антигенов обычно с помощью колоночной хроматографии (иммуноадсорбция), при которой раствор неочищенного антигена пропускают через носитель с закрепленными на нем антителами. Специфический антиген адсорбируется антителами, тогда как примеси вымываются из колонки. Далее антиген может быть десорбирован в чистом виде [250]. Опубликован очень подробный обзор [227] с описанием подобных нерастворимых продуктов и способов их применения. [c.275]

Другой хемотип — сложные высокоразветвленные соединения. Центральная цепь этих соединений не обязательно полисахаридной природы. Она может быть полипептидной, рибитфосфатной или состоять из смешанных полимеров. Определяющее значение для биологической функции имеют концевые олигосахаридные цепи, в состав которых обычно не входят уроновые кислоты или сульфоэфиры. Носителем отрицательных зарядов являются лишь остатки сиаловых кислот. Примерами таких соединений могут служить групповые вещества крови, муцин подчелюстной железы, 0-антиген грамотрицательных бактерий, полисахарид капсулы пневмококков типа XIV, декстраны. [c.609]

Амино-4,6-дихлор-сыдг.лг-триазин приготовлен исходя из циануро-вой кислоты и затем введен в реакцию с различными полисахаридными носителями, такими, как целлюлоза, ДЭАЭ-целлюлоза, КМ-цсллю.лоза, а также сефадекс и сефароза. Ниже приведена методика проведения реакции. [c.179]

Производные агарозы тщательно промывают и высущивают ацетоном на стеклянном фильтре. 100 г высушенного с отсасыванием геля переносят в колбу на 50 мл и добавляют 20 мл 85%-ной муравьиной кислоты смесь нагревают с обратным холодильником 1 ч на водяной бане. Если за это время полисахаридный носитель не растворяется, время гидролиза увеличивают. После гидролиза смесь упаривают досуха, добавляют 2 мл НгО и вновь упаривают. Добавление и упаривание повторяют, остаток растворяют в 1 мл гексадейтеродиметилсуль-фоксида и используют для ЯМР-спектроскопии. [c.246]

Существующие в настоящее время органические полимерные носители можно разделить на два класса 1 — природные полимеры, 2 — синтетические полимерные носители. В свою очередь класс природных полимеров можно подразделить на группы в соответствии с их биохимйческой классификацией полисахаридные, белковые и липидные носители. Синтетические полимеры также могут быть подразделены на группы, например, в соответствии с химическим строением основной цепи макромолекул полиметиленовые, полиамидные и полиэфирные носители. [c.9]

Кельш и др. [41] предварительно очищали темный гидролизат, окраска которого обусловлена кислотным гидролизом полисахаридного носителя на ионообменной колонке. Гидролнзат готовят, используя в качестве внутреннего стандарта норлейцин. После удаления НС1 на роторном испарителе образцы растворяют в 2 мл 0,02 н, соляной кислоты и наносят либо на колонку (7X1 см) с амберлитом IR 120-Х8 и элюируют 25 мл 1 М раствора аммиака, либо на колонку (7X1 см) с дауэксом 50W-X4 и элюируют 25 мл 10 об.%-ного водного пиридина. [c.247]

Кои и Вилчек [1] разработали колориметрический метод контроля активации полисахаридных носителей бромцианом, основанный на образовании темно-красного комплекса, имеющего 6575 15 000 МОЛЬ л-см , лри взаимодействии дианатных эфиров с пиридином и барбитуровой кислотой [2] [c.450]

Таким образом, в хроматографии на бумаге в одних случаях мы встречаем признаки распределительного механизма (Хорнер с сотрудниками. Шуте [2 ), в других случаях — адсорбционного механизма. Это не кажется удивительным, если учесть, в каком состоянии находится закрепленная фаза. Мартин [2] развил это представление. Неподвижная фаза по своим свойствам похожа на раствор сахара и поде. Полисахаридная цепочка аморфных частей, прикрепленная одним концом к твердой фазе, образует с водой систему, которая напоминает их раствор. Мур и Стейн сообщают, что этот раствор по своему характеру похож па гель и что в тех случаях, когда носитель набухает под действием жидкости, образующей неподвижную фазу, разделяемые вещества распределяются между жидкостью и гелем. [c.75]

На протяжении 10 лет Эвери, Мак-Карти и Мак-Леод занимались вьщелением и очисткой молекул, входящих в состав убитых нагреванием инкапсулированных клеток пневмококка и изучали их способность трансформировать бескапсульные клетки. Удаление полисахаридной капсулы и белковой фракции из клеточных экстрактов не оказывало влияния на трансформацию, но добавление фермента дезоксирибонуклеазы (ДНКазы), гидролизующей ДНК, препятствовало ей. Способность высокоочищенных экстрактов ДНК из инкапсулированных клеток вызывать трансформацию показала, что трансформирующим фактором Гриффита бьша ДНК. Несмотря на эти результаты многие ученые все еще отказывались признать, что генетическим материалом служит ДНК, а не белок. В начале пятидесятых годов множество дополнительных данных, полученных при изучении вирусов, наконец, продемонстрировали, что носителем генетической информации служит ДНК. [c.161]

Основой любого фермента является белок, представляющий собой компактную конструкцию из одной или нескольких полипептидных цепей, ковалентно связанных (сшитых) дисульфид-ными мостиками. Помимо белка ферменты иногда мо1ут содержать и небелковые компоненты простетические группы неорганической и органической природы, липиды (в липопротеидах) и углеводы (в гликопротеидах). Конечно, в общем случае химические методы иммобилизации нацелены на модификацию функциональных групп в белковой части молекулы фермента. Однако при выборе процедуры иммобилизации для конкретного фермента целесообразно учитывать и специфические особенности строения его молекулы. В этой связи укажем на хорошо известный и яркий пример ковалентной иммобилизации гликопротеидов. Относительно простым методом — окислением перйодатом натрия в мягких условиях — в полисахаридную часть фермента вводятся альдегидные группы, посредством которых на следующем этапе и осуществляется химическое взаимодействие с носителями или сшивающими агентами, содержащими аминогруппы (образованием азометиновых связей, оснований Шиффа). [c.82]

Одним из самых распространенных методов активации природных полисахаридных носителей (или синтетических полиолов) является бромциановый метод. При обработке бромцианом на таких носителях формируются исключительно реакционноспособные, цианатные, —О—С Ы, и имидокарбонатные, [c.89]

Стабилизацию фермента в тесных ячейках методически проще всего осуществить включением белков в полимерные гели, например при проведении процесса полимеризации мономеров в присутствии фермента. Известно (см. гл. 1), что поперечно сщитые полимерные гели (полиакриламидный, полисахаридные и др.) имеют пористую структуру. В геле, как правило, наблюдается относительно узкое распределение пор по размерам размер пор задается концентрацией полимерных цепей. Он тем меньще, чем выше концентрация полимера в геле. Поэтому, включая фермент в гели различной концентрации, можно реализовать ситуацию, когда белковая глобула окажется зажатой полимерными цепями носителя и благодаря этому клеточному эффекту не сможет развернуться. В таких случаях достигаются существенные стабилизационные эффекты включенные в гель ферменты в тысячи раз стабильнее своих нативных (неиммобилизованных) предшественников, причем стабилизация проявляется тем сильнее, чем выше концентрация полимера. [c.132]

Первоначальная функционализация агарозных шариков для получения аффинных адсорбентов часто осуш ествлялась путем их активации бромоцианом. Реакционноспособные цианатные эфиры и имидокарбонатные группы образуют главным образом изомочевинные связи с аминогруппами белков или других лигандов [12]. В обычных условиях применения такого рода сорбентов эти связи оказываются протонированными (и, следовательно, заряженными) и неустойчивыми при действии нуклео филов (например, ОН ). Таким образом могут иметь место неспецифические ионные взаимодействия, а присоединенные лиганды постепенно отщепляются от носителя. Было предложено несколько других подходов к функционализации полисахаридных матриц [13—16], лишенных указанных недостатков. [c.77]

Гаптены, присоединенные к нерастворимым носителям, используются главным образом для специфического связывания антител, антигенов или клеток с целью очистки. Роль носителя для гапте нов может выполнять поверхность волокон, пробирок, чашек или бус. Мы ограничимся рассмотрением следуюш,их носителей а) полисахаридных гранулированных гелей, б) полистиро-ловых бус и чашек и в) найлоновых волокон. [c.153]

Внутрйклеточный пигмент в форме гранул, имеющих цвет от желтого до коричневого, содержит железо, что является важным диагностическим признаком. Гемосидерин нерастворим в щелочах, но растворяется в сильных кислотах. Он не обесцвечивается сильными окислителями, не проявляет аргентаффинности, свободен от жира и дает положительную ШИК-реакцию, обусловленную его нахождением в белково-полисахаридном комплексе. Этот комплекс-носитель, кроме того, дает резко положительную реакцию с тетразо-лием после бензоилированйя. [c.246]

Бромциановый метод, широко используемый для модификации нерастворимых полисахаридных носителей, для декстрана [20, 21] и других растворимых гидроксилсодержащих полимеров [22], применяется с некоторыми специальными мерами для уменьшения степени сшивания полимера-носителя (снижение pH и концентрации растворов при активации, специальная очистка от бромциана и т. д.). Все же сшивание декстрана значительно и зависит от соотношения реагентов и условий реакций. Поэтому говорить в этом случае о модифицированном полимере-носителе (3.13) как о декстране можно только с оговорками. [c.77]

Аналогично были получены другие синтетические и искусственные олигосахаридные антигены, содержащие ди- или трисахариды как гаптены, вставку и белковый носитель [229, 230], хотя способы соединения олигосахаридной части с белком были другие. Однако такие антигены не вполне адекватны природным полисахаридным антигенам, так как моделируют только специфичность, но не сам процесс иммунного ответа. Природные полисахаридные антигены Т-независимы, а синтетические олигосахаридные антигены на основе белка Т-зависимы. Для получения моноспецифических Т-независимых олигосаха-ридных антигенов и с целью исключения нежелательного биосинтеза антител против белковой части молекулы был предложен новый принцип создания синтетических олигосахаридных антигенов сополимеризация аллилгликозидов специфических олигосахаридов с гидрофильным мономером с образованием линейных псевдополисахаридов (4.81) [231, 232] [c.148]

Особо следует отметить работы тех же авторов по полимерным производным стрептокиназы с полисахаридными носителями [64, 65]. Полученные конъюгаты эффективно разрушают искусственные тромбы, а конъюгат на основе диальдегиддск-страна ( Стрептодеказа ) — первый в мире полимерный препарат фермента, который разрешен для клинического применения и показал хорошие результаты [66]. Среди других полимерных конъюгатов протеолитических ферментов, обладающих тромбо-литическими свойствами, конъюгаты урокиназы [65, 67]. [c.180]

Та часть иммуногена, которая взаимодействует с иммуноглобулином, называется эпитопом или детерминантной группой. В естественных белках-антигенах эпитопом являются аминокислотные остатки, в полисахаридных антигенах — молекулы гексозы, в более сложных антигенах — антипирин, ащнбиотики, азокраски, липиды, низкомолекулярные полисахариды, элементы и другие гаптены. В липопротеидах, гликопротеидах, бромированных, йодированных протеидах белок несет функцию шлеппера (носителя), или индуктора продукции антител, а г ен — детерминантной группы. При этом на поверхности антигена может находиться несколько различных де-терминантных групп, и в таком слу под его воздействием в организме сформируется соответствующее им по специфичности число видов антител. Введение в молекулу белка гаптена сообщает соединению новую специфичность. Антитела против этого конъюгированного гаптена с белком-носителем не реагируют. [c.22]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология