Хлоропласты получение из протопластов

В общем все методы, которые применяют для выделения хлоропластов, основаны либо на механическом разрушении самой ткаии листа, либо на разрушении в щадящих условиях. тех протопластов, которые были предварительно из нее получены. Такой прием был разработан лишь недавно, и в этом случае для получения протопластов используют ферменты (целлюлаза- -пектиназа), которые растворяют клеточную стенку клеток мезофилла. Для того чтобы получить интактные органеллы, протопласты осторожно разрушают в щадящих условиях. [c.545]

A.S. Получение хлоропластов из протопластов [c.550]

Использование изолированных протопластов в селекции растений не ограничивается возможностью их индуцированного слияния и получения соматических гибридов. Изолированные протопласты способны поглощать из окружающей среды макромолекулы и органеллы, следовательно, в них можно вводить чужеродную информацию, не пересаживая ДНК или органеллы других клеток. Уже проведена успешная трансплантация изолированных ядер в протопласты петунии и табака. Вместе с тем поглощение протопластами чужеродных ядер не всегда ведет к образованию гибридов. Кроме ядер в изолированные протопласты удалось трансплантировать чужеродные хлоропласты. Из этих протопластов Карлсон 158 [c.158]

Рис. 20-71. Световая микрофотография протопластов, полученных из зеленых клеток листьев табака. Клетки, лишенные стенки, округляются их можно сохранить только в изотоническом растворе. В каждом протопласте видны многочисленные хлоропласты (С любезного разрешения F

Если хлоропласты, полученные из протопластов мезофилла С4-Растений, фракционируют далее в градиенте концентрации сахарозы, то свыше 80% NADP-триозофосфатдегндрогеназы выявляют в зоне интактных хлоропластов, а вся активность ФЕП-карбоксилазы остается в верхней части градиента, во фракции цитозоля. Следовательно, ФЕП-карбоксилаза локализована только в цитозоле клетки. Не исключено, что in vivo этот фермент непрочно связан с наружной частью оболочки хлоропластов. Если к тому же учесть и транспорт метаболитов, то напрашивается вывод о том, что этот фермент должен находиться снаружи от хлоропласта. [c.353]

Для того чтобы исследовать метаболизм углерода, транспорт метаболитов в хлоропластах и компартментацию ферментов в клетке (чему посвящена большая часть этой книги), необходимо прежде всего получить изолированные хлоропласты, которые при этом должны быть интактными, в достаточной степени очищенными от других субклеточных структур и биохимически активными. В некоторых случаях требуется очеиь высокая степень очистки хлоропластов (иапример, для установления локализации тех ферментов, которые присутствуют только в очень небольших количествах), поэтому может оказаться, что гораздо вал<иее освободиться от каких бы то ни было примесей н загрязнений, чем получить хлоропласты, способные осуществлять фотосинтез с очень высокой скоростью. При других обстоятельствах можно поступиться степенью очистки ради сохранения максимального уровня активности, ио наличие примеси цитоплазматических ферментов в препарате может очень усложнить интерпретацию полученных результатов (гл. 8). К тому же важно ие забывать два обстоятельства, которые часто упускают из виду, несмотря на то что это само собой разумеется. Во-первых, абсолютно невозможно получить хорошие хлоропласты из плохого исходного материала (см. разд. А.З). Во-вторых, хорошие хлоропласты будут работать хорошо только тогда, когда с ними будут правильно обращаться. Если оглянуться назад, то станет совершенно ясно, что после того, как в начале 60-х годов в практику были снова введены приемы Хилла, использовавшего в качестве осмотически активного вещества сахара, в плане улучшения методики выделения хлоропластов было сделано очеиь мало, если, конечно, ие считать предварительного получения протопластов (см. разд. А.5). Все последующие улучшения методики, способствующие получению более активных хлоропластов, касались главным образом методики определения активности, и в частности были связаны с введением в среду неорганического пирофосфата (разд. 8.14). [c.543]

Это, пожалуй, первый и чрезвычайно вал<ный фактор, который определяет возможность получения функционально активных хлоропластов. Вполне естественно, что условия, необходимые для оптимального роста различных растений, неодинаковы. В большинстве случаев различная интенсивиость фотосинтеза (и противоречивость сделанных выводов) у одного и того же растения может быть связана с различиями исходного растительного материала у разных исследователей. Так, например, для того чтобы получить хорошие хлоропласты шпината, нул<но обратить особое внимание иа продолжительность фотопериода и на условия питания растения во время его выращивания. Когда хлоропласты выделяют из протопластов, возникает еще одно обстоятельство. При определенных условиях выращиваиия ткань листа может становиться очень устойчивой к действию ферментов, которые переваривают клеточную стенку. При получении протопластов из листьев табака или томатов следует обращать особое внимание на такие факторы, как ос- [c.545]

Для многих целей до сих пор предпочитают использовать шпинат. Это связано, во-первых, с. тем, что в этом растении практически отсутствуют фенольные соединения, которые обычно загрязняют получаемые препараты, и, во-вторых, с тем, что исследованию хлоропластов именно этого растения посвяш,ено. громадное число работ. Еще совсем недавно шпинат был единственным растением (за исключением, пожалуй, молодых листьев гороха), из которого удавалось получать действительно интактные и активные хлоропласты. Для некоторых целей очень удобными оказались растеиия гороха, хотя с каждым годом становится все яснее, что хлоропласты, выделенные из молодых побегов гороха, отличаются по проницаемости от хлоропластов, полученных из взрослых растений шпината. Аврои и др. очеиь широко использовали в своих исследованиях салат ио главным образом для изучения транспорта электронов и фотофосфорилироваиия. Приемы получения протопластов (разд. А.5) позволили выделить хорошие хлоропласты и из миогих других растений. [c.546]

Для того чтобы не происходило зависимого от СО2 выделения О2, в среду добавляют глнцеральдегид, а для разобщения переноса электронов и фосфорилирования и получения максимальной скорости наблюдаемого процесса вносят НН4С1. Наглядно этот метод определения степени интактности изображен на рис. А.1, где приводятся данные для препарата хлоропластов, полученных из протопластов пшеницы. [c.558]

Рнс. 19-i8. Световая микрофотография протопластов, полученных из зеленых клеток листьев табака. Клетки, лишенные клеточной стеики, округляются их можно сохранить только в изотоническом растворе сахара, уравновешивающем осмотическое давление их цитоплазмы. На периферии клеток видиы многочисленные хлоропласты. (С любезного разрешения J. Burgess.) [c.206]

Для определения внутриклеточной локализации ферментов С4-ПУТИ использовали хлоропласты мезофилла, полученные либо после механического разрушения ткаии, либо из приготовленных заранее протопластов. В ранних работах на кукурузе Слэк и Хэтч, применив методы, основанные на использо вании [c.351]

В экстрактах, полученных из протопластов мезофилла С -растений, продуктивность фотофосфорилироваиия можно оценить косвенным путем, измерив зависимое от пирувата связывание СОг. При фиксации СОг, сопряженной с активностью пируват,ортофосфат —дикиназы, пирофосфатазы, аденилатки-назы и ФЕП-карбоксилазы, иа связывание каждой молекулы СОз затрачиваются две молекулы АТР (разд. ПЛ). Такую стехиометрию проверили экспериментально, измерив скорость зависимой от пирувата фиксации СОа в темноте в присутствии АТР [она составляет 40—70 мкмоль-(мгХл) -ч- ]. АТР поглощается хлоропластами с помощью переносчика адениловых нуклеотидов, причем на связывание каждой молекулы Os тратится две молекулы АТР. [c.380]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология