Цитоплазматические ферменты

НАД+-зависимые дегидрогеназы локализованы в основном в матриксе митохондрий. Их окисление осуществляется НАДН КоО-оксидоредуктазой, интегрированной во внутреннюю мембрану митохондрий. НАДФ -зависимые дегидрогеназы — это преимущественно цитоплазматические ферменты, и их восстановленные формы являются донорами восстановительных эквивалентов в реакциях биосинтеза. [c.194]

Эти методы служат для разрушения клеток и выделения ферментов в раствор. Если фермент локализован в органеллах, метод может быть использован только при условии, что органеллы также разрушаются. С другой стороны, может понадобиться предварительное выделение самих органелл, что позволит избавиться от загрязнения цитоплазматическими ферментами перед экстракцией фермента из органелл. Для этого требуется менее сильное воздействие. Предварительное растворение поверхностных коллагеновых и целлюлозных структур препаратами гидролитических ферментов позволяет в дальнейшем разрушать клетки более мягкими способами, сохраняя целостность органелл. Примером подобной методики служит получение препаратов митохондрий из таких тканей, как скелетная или сердечная мышцы, под действием протеолитических ферментов [6]. Однако эта методика применима только для получения препаратов в небольших масштабах и больше подходит для. метаболических исследований органелл, чем для очистки ферментов. Выход очищенных органелл может быть очень низким, поэтому во многих случаях лучше сначала разрушить всю ткань, а затем уже приступить к выделению нужного фермента из сложной смеси белков в экстракте. Таким образом, ферменты митохондрий и хлоропластов часто получают из тканевого гомогената, а не из выделенных органелл. [c.42]

Ингибирование каталитической активности цитоплазматических ферментов изначально обусловлено дегидратацией клеток и изменением ионного гомеостаза протопласта покоящихся форм (снижение концентрации К" ", Ка" , повышение Са , Однако существует [c.104]

Реакция (XI.16) катализируется растворимым (цитоплазматическим) ферментом, Ь-глицерол-З-фосфат-дегидрогеназой, а реакция (XI.17) — специфической фосфатазой. Для обратной реакции (XI.17а), как всегда, требуется АТФ-зависимая киназа (фосфотрансфераза). Как видно из изложенного, восстановленный НАД, образовавшийся в реакции (XI.8), потребляется в реакции (XI.16), а каждая молекула триозы координированным образом участвует в реакциях обеих ветвей гликолиза, т. е. в реакциях (XI.16) - -(XI.17), с одной стороны, и в реакциях (XI.8) — (XI.14) — с другой. В результате этого ни одно из реагирующих веществ не накапливается и не [c.292]

Когда оценивают уровень секреции в периплазматическое пространство, эффективность образования сферопластов определяют по периплазматическим маркерным ферментам. Кроме того, контролируется степень лизиса клеток с помощью определения активности такого цитоплазматического фермента, как алкоголь-дегидрогеназа [49] (табл. 4.28). [c.133]

Сравнительно недавно была выделена и исследована экстра-целлюлярная форма супероксиддисмутазы [270—273]. Экстра-целлюлярная СОД является основным изоферментом в плазме, лимфе и синовиальной жидкости и представляет собой гликопротеид, состоящий из 4 субъединиц. Каждая субъединица имеет молекулярную массу около 30 кДа и содержит ионы меди и цинка. Кроме более высокой молекулярной массы, субъединица экстра-целлюлярной СОД отличается от субъединицы цитоплазматической Си-, гп-СОД аминокислотным составом, антигенными свойствами и генным локусом, кодирующим аминокислотную последовательность апофермента. Каталитическая активность экстра-целлюлярной СОД значительно ниже, чем у цитоплазматического фермента. [c.37]

Как было установлено, в основе регуляции активности цитоплазматических ферментов лежит принцип. [c.98]

Предполагается, что холин-ацетилтрансфераза встречается в нескольких молекулярных формах, или конфигурациях. Она является растворимым цитоплазматическим ферментом, активность и растворимость которого зависят от ионной силы. Как показали исследования, этот фермент [c.205]

При воспалительных процессах повышается проницаемость клеточных мембран и в сыворотку крови могут попадать цитоплазматические ферменты. [c.57]

Исчерпывающее обсуждение методов экстракции водорастворимых ферментов из мембран читатель найдет в другой работе [19]. Белки, связанные с мембранами, очевидно, отличаются по растворимости от типичных цитоплазматических ферментов, и для их очистки иногда применяются (и вполне успешно) некоторые необычные эмпирически найденные методы. [c.55]

Внешние клеточные стенки микроорганизмов исключительно разнообразны по структуре и составу. Поэтому осуществимость предложенного выше механизма будет зависеть от того, какой тип микроорганизмов исследуется. В общем случае грам-отрицательные микроорганизмы устроены более сложно, чем грам-положительные. Доступ к восстановительным областям облегчен, если микроорганизм имеет экзоферменты, но становится все труднее в ряду периплазматические ферменты - цитоплазматические ферменты-митохондрии в эукариотических клетках. Многие бактерии [c.250]

Процессы, протекающие до момента образования гипохлорит-аниона или гидроксил-радикала, локализованы в цитоплазме и контролируются цитоплазматическими ферментами или природными водорастворимыми антиоксидантами. Например, таурин способен связывать гипохлорит-анион в форме хлораминового комплекса, дипептид карнозин и его производные нейтрализуют гидроксил-радикал, а такие соединения, как белок ферритин, связывают железо. Перекисное окисление липидов, инициируемое в гидрофобном пространстве клеточных мембран, способен прерывать щироко известный гидрофобный антиоксидант а-токоферол (витамин Е). Его высокая концентрация в биологических мембранах препятствует их повреждению свободными радикалами. [c.315]

Качество ядерных препаратов оценивается па основании следующих критериев 1) морфологические особенности при наблюдении в обычном световом микроскопе, фазово-контрастном микроскопе и электронном микроскопе 2) наличие таких ферментов, как НАД-пирофосфорилаза (К. Ф., 2.7.7.1), которые встречаются исключительно в ядрах 3) отсутствие цитоплазматических ферментов, например цитохромоксидазы (К. Ф., 1.9.3.1) или глюкозо-6-фосфатазы (К. Ф., 3.1.3.9). [c.137]

Имеются данные, говорящие о том, что микрофибриллы целлюлозы удлиняются путем нарастания с конца. Однако остается совершенно неясным, каким образом синтезирующие клетчатку цитоплазматические ферменты катализируют концевой рост микрофибрилл в клеточной оболочке. Возможно, частицы Эльбей-на локализованы в оболочке. Трудно также объяснить, как микротрубочки кортекса могут направлять ориентированный синтез микрофибрилл оболочки ведь эти системы, хотя они и расположены сходным образом, разделены плазматической мембраной. Еще труднее понять, как кортикальные микротрубочки могут [c.90]

Особые митохондриальные изоферменты являются как бы свидетельством эволюционного процесса, указывающим на прокариотическое происхождение этих органелл например, перо-ксид-дисмутаза матрикса митохондрий из печени цыплят представляет собой магнийсодержащий фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична таковой для перо-ксид-дисмутазы из Е. oli и В. stearothermophilus, в то время-как соответствующий цитоплазматический фермент (из эритроцитов быка) содержит медь и цинк и имеет другую последовательность аминокислот [554]. [c.111]

Более подробно ферментативный синтез УДФ-глюкозамина и УДФ-N-ацетилглюкозамина был изучен после того, как стал возможен химический синтез а-п-глюкозамин-1-фосфата и К-ацетил-а-о-глюкозамин-1-фосфата [59, 69]. Так, было показано, что ядра клеток печени крысы могут синтезировать УДФ-глюкозамин из соответствующих субстратов [реакция (14)], но не образуют УДФ-К-ацетилглюкозамин из УТФ и N-ацетилглюкозамин-1-фосфата. Неожиданными оказались более поздние данные Смита и сотр. [49, 57], которые обнаружили, что ядра из клеток печени крысы могут оказывать пирофосфорилазное действие на УДФ-N-aцeтилглюкoзaмин. Это, вероятно, можно объяснить наличием в препаратах, полученных Смитом и сотрудниками, примесей растворимого цитоплазматического фермента, который, согласно данным Мэли и сотрудников, способен синтезировать УДФ-N-ацетилглюкозамин. [c.278]

Чтобы проверить, разворачиваются ли белки-предшественники, когда они пересекают митохондриальную мембрану, был сконструирован гибридный ген, кодирующий смешанный белок. В этом как бы состыкованном белке митохондриальный сигнальный пептид присоединен к К-концу цитоплазматического фермента-дигидрофолатредуктазы (ДГФР). Такой гибридный белок обладал почти ненарушенной ферментативной активностью, а значит ДГФР была в нативной трехмерной конформации. При смешивании с препаратом митохондрий этот белок поступал в матрикс. Однако если его предварительно обрабатывали метатрексатом, который прочно связывается с активным центром фермента и мешает разворачиванию его молекулы, то перенос резко подавлялся. [c.31]

Другой эффективный метод контроля заключается в отборе проб по ходу разрушения и их центрифугировании в таком временном и скоростном режиме, который достаточен для осаждения интактных клеток. Надосадочную жидкость проверяют затем на содержание белка и других поглощаюших в ультрафиолете веществ (т. е. нуклеиновых кислот) или специфических цитоплазматических ферментов таким образом определяют степень выхода этих компонентов из подвергаемых разрушению клеток. [c.140]

НЫХ количеств соли, в результате чего водный потенциал их клеток позволяет им всасывать воду даже из засоленной почвы. При этом соль накапливается в клеточных вакуолях, так что высокое содержание натрия не влияет на цитоплазматические ферменты. Опыты показали, что специальные линии некоторых растений, обычно не рассматриваемых как галофиты, могут обладать значительной устойчивостью к засолению. Например, солеустойчивая линия ячменя, выведенная Эмануэлем Эпштейном (Калифорнийский университет в Дэвисе), дает урожай в условиях такой засоленности, при которой обычный ячмень погибает. Дальнейшая селекция этой линии может дать сорт для выращивания на засоленных почвах. [c.417]

Функции ряда белков установлены. Наибольшая фракция — полоса 3 — представлена интегральным белком гликопротеином с молекулярной массой 90 кДа, который взаимодействует с мембраной и одновременно обеспечивает транспорт ионов через бислой, а также связывание ряда цитоплазматических ферментов. Белок полосы 3 через анкерин (полоса 2,1) взаимодействует со спект-рином — основным белком цитоскелета, составляющим двумерную сеть, к которой прикрепляется актин. При электрофорезе актин выявляется в полосе 5. Белки полос 8, 9 и 10 относятся к семейству гликофоринов (см. рис. 23). [c.56]

В ЭТОМ механизме участвуют две дегидрогеназы а-глицерофосфата, присутствующие в больщинстве клеток. Цитоплазматический фермент окисляет NADH сопряженно с образованием а-глицерофосфата из дигидроксиацетонфосфата, а фермент, локализованный на наружной стороне внутренней мембраны митохондрий, окисляет а-глицерофосфат, подавая электроны прямо на UQ в дыхательной цепи. В этом случае направление процесса задается тем, что электроны передаются в пул хинонов при потенциале, близком к нулю (рис. 5.11). [c.168]

Обращает на себя внимание тот факт, что в головном мозгу до 25—30% активности креатинкиназы связано с митохондриями. Фермент локализован на внешней митохондриальной мембране. Равновесие катализируемой им реакции сдвинуто в сторону образования креатинфосфата, в отличие от цитоплазматического фермента, который, напротив, катализирует преимущественно расщепление креатинфосфата и образование АТФ. Эти особенности дали основание предполагать, что вместе с АТФ — АДФ-транслоказой, находящейся на внутренней мембране митохондрий, креатинкиназа принимает участие в трансформациях макроэргических соединений, а также в переносе их из одного клеточного компартмента в другой. [c.67]

Цитоплазматические ферменты, окисляющие субстраты и непосредственно восстанавливающие Ог, обычно используют в качестве простетической группы или флавиннуклеотид, или металл, например Си + или Fe +. [c.457]

Для того чтобы исследовать метаболизм углерода, транспорт метаболитов в хлоропластах и компартментацию ферментов в клетке (чему посвящена большая часть этой книги), необходимо прежде всего получить изолированные хлоропласты, которые при этом должны быть интактными, в достаточной степени очищенными от других субклеточных структур и биохимически активными. В некоторых случаях требуется очеиь высокая степень очистки хлоропластов (иапример, для установления локализации тех ферментов, которые присутствуют только в очень небольших количествах), поэтому может оказаться, что гораздо вал<иее освободиться от каких бы то ни было примесей н загрязнений, чем получить хлоропласты, способные осуществлять фотосинтез с очень высокой скоростью. При других обстоятельствах можно поступиться степенью очистки ради сохранения максимального уровня активности, ио наличие примеси цитоплазматических ферментов в препарате может очень усложнить интерпретацию полученных результатов (гл. 8). К тому же важно ие забывать два обстоятельства, которые часто упускают из виду, несмотря на то что это само собой разумеется. Во-первых, абсолютно невозможно получить хорошие хлоропласты из плохого исходного материала (см. разд. А.З). Во-вторых, хорошие хлоропласты будут работать хорошо только тогда, когда с ними будут правильно обращаться. Если оглянуться назад, то станет совершенно ясно, что после того, как в начале 60-х годов в практику были снова введены приемы Хилла, использовавшего в качестве осмотически активного вещества сахара, в плане улучшения методики выделения хлоропластов было сделано очеиь мало, если, конечно, ие считать предварительного получения протопластов (см. разд. А.5). Все последующие улучшения методики, способствующие получению более активных хлоропластов, касались главным образом методики определения активности, и в частности были связаны с введением в среду неорганического пирофосфата (разд. 8.14). [c.543]

Кристаллическая структура растворимого (цитоплазматического) фермента установлена с разрешением 2,5 А [45]. Карта электронной плотности еще не соотнесена с аминокислотной последовательностью, но, как указывалось в гл. 1, укладка полипептидной цепи фермента в принципе аналогична укладке цепи лактатдегидрогеназы, хотя малатдегидрогеназа является всего лишь димером с мол. весом 70 ООО. Вероятно, механизм действия обоих ферментов одинаков, поскольку малатдегидрогеназа также содержит важный для катализа остаток гистидина, который может модифицироваться диэтилпирокарбонатом [46]. Два моля NADH (или NAD+) связываются с одинаковым сродством [47]. Кажущаяся отрицательная кооперативность при связывании кофермента, обнаруженная для одного из препаратов фермента, может быть обусловлена тем, что на самом деле в препарате присутствовали две формы [48, 49]. [c.356]

Были раскрыты также функциональные звенья медиаторного процесса. В общих чертах они заключаются в том, что образующийся в нервных тканях норадреналин накапливается (депонируется) в везикулах (пузырьках) нервных окончаний, высвобождается из них под влиянием нервных импульсов (или химических воздействий), поступает в синаптическую щель (отсюда термин синаптическая передача ), где взаимодействует с адренорецепто-рами постсинаптической мембраны. Далее при участии внутриклеточных биохимических процессов осуществляется физиологический эффект. Отработавший норадренапин частично инактивируется в синаптической щели цитоплазматическим ферментом катехол-О-метилтрансферазой (КОМТ), частично захватывается обратно ( геир1аке ) пресинаптическими нервными окончаниями, где частично инактивируется моноаминоксидазой, а частично депонируется везикулами и вновь используется при очередном нервном импульсе. [c.19]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология