Количественный микроанализ биологических материалов

В настоящее время установлено, что пучки высокоэнергетических электронов, используемые в электронной микроскопии и микроанализе, могут разрушающе действовать на образец. Такое повреждение пучком обычно более значительно в органических и биологических образцах 180], и важно знать о таких вызываемых пучком изменениях, как большие разрушения образца, потери органического материала и испарение летучих элементов. Хотя в настоящее время возможно проводить анализ при низких токах пучка (0,1—5 нА), при этом все же имеют место значительные потери материала. Естественно, количество теряемого из образца материала зависит как от образца, так и от тока пучка, но обычно оно составляет около 30% [181], хотя в литературе имеются данные о потерях, составляющих почти 90% [182]. Потеря массы органического материала является серьезной проблемой, особенно в случаях, когда количественные измерения выполняются с использованием спектра непрерывного излучения (см. разд. 7.7.6) и все зависит от точной меры локальной массы в процессе анализа. Потери массы органического материала в любых типах электронно-зондовых приборов можно уменьшить за счет охлаждения образца. В работе [183] и позднее в, [181 и 180] было показано, что потери массы значительно уменьшаются, если образец находится прн низких температурах. В этом заключается другое преимущество использования замороженных в гидратированном состоянии образцов, хотя последние исследования показали, что даже охлаждение образца до температур жидкого азота недостаточно для полного исключения потерь массы. [c.71]

Рентгеновская эмиссионная спектроскопия [108] является методом анализа, позволяющим количественно определять и идентифицировать некоторые элементы, присутствующие в биологическом материале в большом количестве, причем исследуемый материал при этом не разрушается. Рентгеновский микроанализ с применением электронно-лучевого зонда используют для определения количества и местоположения некоторых элементов in situ. Разрешение анализа позволяет применять его по отношению к отдельным бактериальным клеткам и спорам [112]. Этот метод также требует сложного оборудования и специальной подготовки персонала, поэтому он доступен обычно лишь научно-исследовательским лабораториям. [c.368]

В этой главе мы рассмотрим способы характеристики с помощью ВЖХ пикомольных количеств биологически активных белков, получаемых с колонок для микроанализа, и обсудим аналитические и полупрепаративные варианты ВЖХ, используемые при очистке веществ. Мы остановимся также на примерах использования ВЖХ для сравнительного биохимического анализа небольших количеств практически неочищенного исходного материала и для получения нанограммовых количеств биологически активных белков при четырех вариантах разделения. Будут сопоставлены методы количественного определения белков при ВЖХ с помощью прямых измерений оптической плотности и другие стандартные методы. Особое внимание мы уделим вопросам чувствительности ВЖХ, специальным приемам, предназначенным для приготовления растворителей н образцов, и мерам, необходимым для сохранения биологической активности разделяемых веществ. На одном из примеров мы увидим, как высокоочищенный препарат получают при использовании нескольких последовательных этапов ВЖХ. Будут рассмотрены также некоторые неверные концепции, касающиеся перспектив применения ВЖХ для получения ряда биологически активных веществ. [c.105]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология