Аффинное мечение

Методологические замечания необратимое связывание, аффинное мечение [c.253]

Как уже неоднократно отмечалось, фундаментальным свойством белков нуклеиновых кислот является их способность узнавать определенные низкомол кулярные соединения или другие полимеры. Результатом узнавания является образование стабильных комплексов с этими лигандами. Обычно это не приводит к изменениям химической структуры биополимера и позволяет неоднократно использовать эти же молекулы биополимера, если это узнавание влечет за собой какие-либо биологические последствия. В то же время отсутствие каких- ибо химических последствий означает, как правило, отсутствие каких-либо следов пребывания биополимера в виде комплекса р соответствующим лигандом. Между тем во многих случаях желательно, чтобы такой след остался для определения области биополимера, принимавшей участие в узнавании. В некоторых случаях желательно сделать это узнавание необратимым для того, чтобы повредить биополимер с соответствующими биологическими последствиями. Обе эти проблемы решаются благодаря подходу, известному как аффинная модификация (или аффинное мечение). [c.329]

Было найдено, что все эти соединения, первые три — при облучении УФ-светом, осуществляют аффинное мечение фермента из разных биологических объектов. [c.330]

Рис. 6.11. Общая схема выделения меченых пептидов из аффинно-меченого белка [62].

Протонам ароматических колец обычно отвечают сигналы, расположенные в гораздо более низкопольной области, чем — 80 -г- - 160 Гц, где должен наблюдаться резонанс метиленовых и метильных групп (разд. 9.6). Таким образом, добавление аффинной метки затрагивает остаток (тирозин), который вряд ли дает сигнал в спектральной области от - 80 до — 160 Гц, где наблюдаются изменения при присоединении лиганда. (Правда, ситуация изменится, если модифицируется не ароматическое кольцо тирозина, а его /3-метиленовая группа, протоны которой могут давать сигналы в этой области. Сушествует опасность, что Ь связывается с другим участком, а не с Ь, поэтому имеет смысл снять спектр аффинно меченного белка. Если в области от — 80 до — 160 Гц при присоединении аффинной метки никаких изменений в спектре не происходит, то, скорее всего, Ъ не находится в центре связывания Ь. Если же, напротив, спектр меченого белка в этой области изменяется так же, как это происходит при связывании немодифицированного белка с Ь, то весьма вероятно, что L присоединяется в области активного центра, а его действие на молекулу белка сравнимо с действием Ь, даже если протоны тирозина не затрагиваются. [c.461]

Ценность антител к компонентам клеточной поверхности заключается не только в их способности селективно уничтожать или идентифицировать клеточные популяции, но и в возможности определения конкретных молекул-мишеней. В настоящее время с помощью антител можно выделить компоненты, входящие в состав клеточных мембран, и определить их природу путем аффинного мечения после разделения в полиакриламидном геле. Такие методы лежат в основе современных исследований во многих областях клеточной биологии. [c.15]

В опубликованных недавно книгах и обзорных статьях можно найти множество примеров ингибиторов, специфичных к активному центру [312, 313, 315]. Помимо химической модификации фермента и аффинного мечения за последние десять лет разработано еще несколько новых методов. Хотя эти методы и не имеют прямого отношения к бноорганнческому моделированию ферментов, о них все же следует упомянуть, так как в приложении к биологическим системам с их помощью можно получить полезную информацию, К ним относятся введение фотоаффинной метки [316] и использование флуоресцентной спектроскопической линейки [317]. Эти разработанные недавно методы включают в основном биофизические приемы, обсуждение которых выходит за рамки данной книги, но которые важны для лучшего понимания биологических процессов. Получаемая информация может быть ценным руководством к планированию и созданию новых биоорганических моделей биологически важных макромолекул. [c.450]

ДаЕные по связылзанию в тканях, клетках или даже на мембранных препаратах часто не воспроизводятся в опытах с рецепторами в растворах или с очищенными рецепторами. Иногда способность к связыванию рецептора полностью исчезает, если его извлекают из мембранного окружения. В таких случаях для исследования рецептора можно использовать метод аффинного мечения подбирается лиганд, который имеет структуру, обеспечивающую его специфическое связывание, содержит подхо- [c.253]

В случае белков не существует разработанных общих принципов конструирования лигандов, специфичных к определенным областям белка. Поэтому конструирование реагентов для аффинной модификации белков чаще всего основывается на знании их специфических лигандов. Таким образом получают производные или аналоги соответствующих субстратов для аффинной модификации каталитических центров ферментов. Также используют аналоги эффекторов для модификации регуляторных центров ферментов. Аналогии прозводные гормонов и нейромедиторов, снабженные реакционноспособными группами, применяют для аффинного мечения соответствующих рецепторов, как, например, реакционноспособные производные и аналоги АТФ, представленные ниже, которые были использованы для аффинной модификации АТФ сиЕ1тазы (см. 8.5) [c.329]

Направленная биоспецифическая модификация по точному адресу , так называемое аффинное мечение . Широко известно, например, применение субстратоподобных агентов для химического исследования природы и локализации активного центра ферментов или иных систем. Как биос№цифическую модификацию можно рассматривать и некоторые процессы модификации белков, такие, как фосфорилирование, ацилирование, гликозилирование, метилирование, протекающие в клетке с участием соответствующих ферментов. [c.160]

Аффинно-меченые пептиды из трипсинового гидролизата стафилококковой нуклеазы Лрсанилазотирозилсодержащие пептиды [c.358]

Работы относятся к хим. кинетике и молекулярной биологии. Исследовал (до 1961) цепные вырожден-но-разветвленные р-ции. Изучает кинетику и механизм синтеза пептидов с помощью карбодиими-дов, процессы модификации нуклеиновых кислот карбодиимидами и алкилирующими агентами. Предложил (1971) метод аффинного мечения функциональных центров рибосомы. [c.211]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология